สืบค้นงานวิจัย
การยับยั้งการเพิ่มจำนวนไวรัสนิวคลีโอโพลีฮีโดร (NPV) ของไหม โดยใช้ double-strand RNA interference
เลิศลักษณ์ เงินศิริ - มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
ชื่อเรื่อง: การยับยั้งการเพิ่มจำนวนไวรัสนิวคลีโอโพลีฮีโดร (NPV) ของไหม โดยใช้ double-strand RNA interference
ชื่อเรื่อง (EN): Suppression of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus by double-strand RNA interference
บทคัดย่อ: นิวคลีโอโพลีฮีโดรไวรัส เป็นไวรัสที่ก่อให้เกิดโรคแกสเซอรี่ในหนอนไหม สร้างความเสียหายอย่างมากต่อเกษตรกร ไวรัสเพิ่มจำนวนในเซลล์หนอนไหมขณะเดี่ยวกันก็ทำลายเซลล์หนอนไหม ในการเข้าทำลายเซลล์ของไวรัสมียีนเข้ามาเกี่ยวข้องในกระบวนการนี้มากมาย ยีน ie-1 และยีน pe38 เป็นยีนที่แสดงทันที่ที่ไวรัสเข้าทำลายเซลล์ ยีน ie-1 จำเป็นสำหรับการสร้างดีเอ็นเอของไวรัส ส่วนยีน pe38 มีส่วนสำคัญในการกระตุ้นการสร้างดีเอ็นเอ ขณะที่ยีน lef-2 แสดงในระยะถัดมา ผลผลิตของยีนนี้มีส่วนช่วยในการสร้างดีเอ็นเอและควบคุมการแสดงออกของยีนกลุ่มที่แสดงออกหลังสุด ยีน pg64 แสดงออกในช่วงท้ายทำหน้าที่เกี่ยวข้องในการที่ไวรัสที่สร้างขึ้นใหม่ไปเข้าทำลายเซลล์ที่อยู่ใกล้เคียง ในการศึกษาครั้งนี้ได้ทำการโคลนยีน ie-1, pe38, lef-2 และgp64 จากไวรัส NPV ที่เข้าทำลายหนอนไหมพันธุ์ไทย และทำการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์และลำดับกรดอะมิโนของยีนทั้ง 4 ยีน พบว่าประกอบด้วยนิวคลีโอไทด์จำนวน 1755, 930, 633, 1599 คู่เบส ซึ่งรหัสของโปรตีนที่ประกอบด้วยกรดอะมิโนจำนวน 584, 309, 195, 532 ตัว ตามลำดับ มีความเหมือนกับยีนของนิวคลีโอโพลีฮีโดรไวรัส สายพันธุ์ T3 จากฐานข้อมูล NCBI 98 – 100 % ส่วนการศึกษาการยับยั้งการเกิดโรคแกรสเซอรีในหนอนไหม โดยใช้อาร์เอ็นเอสายคู่ของยีน lef-2 และ gp64โดยสร้างเวคเตอร์ที่มี ดีเอ็นเอของยีนเป้าหมายที่เหมือนกัน 2 ชิ้นต่อกันในสภาพกลับทิศทาง จากนั้นทำการตัดเอาดีเอ็นเอที่เชื่อมต่อกันนี้ไปต่อกับเวคเตอร์ pET-3a ที่ทำให้ยีนที่ต่อไว้แสดงออก แล้วนำเวคเตอร์ pET-3a นี้ ไปถ่ายเข้าสู่แบคทีเรีย E. coli สายพันธุ์ HT115 ที่ไม่มีการสร้างเอนไซม์ทำลาย dsRNA ทำการชักนำโดยใช้ IPTG ให้มีการสร้าง dsRNA ของยีน lef-2 กับ gp64 ในแบคทีเรีย พบว่าสามารถชักนำให้มีการสร้าง dsRNA ของยีน lef-2 และ gp64ได้ เมื่อทำการทดสอบความคงทนของ dsRNAs พบว่า dsRNAs สามารถอยู่ในอุณหภูมิห้องได้อย่างน้อย 5 วันโดยไม่ถูทำลาย และเมื่อนำมาทดสอบประสิทธิภาพการยับยั้งการเกิดโรคแกรสซอรี่ ในหนอนไหม พบว่า dsRNAs สามารถยับยั้งการเกิดโรคได้ประมาณ 60 - 80% เมื่อทำการทดลองยืนยันโดยใช้ dsRNA ของยีน lef-2 และ gp64 แล้วตรวจสอบประสิทธิภาพการยับยั้ง การเพิ่มจำนวนไวรัส โดยใช้ real time PCR พบว่า dsRNA ทำให้การเพิ่มจำนวนไวรัสลดลงได้ นิวคลีโอโพลีฮีโดรไวรัส เป็นไวรัสที่ก่อให้เกิดโรคแกสเซอรี่ในหนอนไหม สร้างความเสียหายอย่างมากต่อเกษตรกร ไวรัสเพิ่มจำนวนในเซลล์หนอนไหมขณะเดี่ยวกันก็ทำลายเซลล์หนอนไหม ในการเข้าทำลายเซลล์ของไวรัสมียีนเข้ามาเกี่ยวข้องในกระบวนการนี้มากมาย ยีน ie-1 และยีน pe38 เป็นยีนที่แสดงทันที่ที่ไวรัสเข้าทำลายเซลล์ ยีน ie-1 จำเป็นสำหรับการสร้างดีเอ็นเอของไวรัส ส่วนยีน pe38 มีส่วนสำคัญในการกระตุ้นการสร้างดีเอ็นเอ ขณะที่ยีน lef-2 แสดงในระยะถัดมา ผลผลิตของยีนนี้มีส่วนช่วยในการสร้างดีเอ็นเอและควบคุมการแสดงออกของยีนกลุ่มที่แสดงออกหลังสุด ยีน pg64 แสดงออกในช่วงท้ายทำหน้าที่เกี่ยวข้องในการที่ไวรัสที่สร้างขึ้นใหม่ไปเข้าทำลายเซลล์ที่อยู่ใกล้เคียง ในการศึกษาครั้งนี้ได้ทำการโคลนยีน ie-1, pe38, lef-2 และgp64 จากไวรัส NPV ที่เข้าทำลายหนอนไหมพันธุ์ไทย และทำการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์และลำดับกรดอะมิโนของยีนทั้ง 4 ยีน พบว่าประกอบด้วยนิวคลีโอไทด์จำนวน 1755, 930, 633, 1599 คู่เบส ซึ่งรหัสของโปรตีนที่ประกอบด้วยกรดอะมิโนจำนวน 584, 309, 195, 532 ตัว ตามลำดับ มีความเหมือนกับยีนของนิวคลีโอโพลีฮีโดรไวรัส สายพันธุ์ T3 จากฐานข้อมูล NCBI 98 – 100 % ส่วนการศึกษาการยับยั้งการเกิดโรคแกรสเซอรีในหนอนไหม โดยใช้อาร์เอ็นเอสายคู่ของยีน lef-2 และ gp64โดยสร้างเวคเตอร์ที่มี ดีเอ็นเอของยีนเป้าหมายที่เหมือนกัน 2 ชิ้นต่อกันในสภาพกลับทิศทาง จากนั้นทำการตัดเอาดีเอ็นเอที่เชื่อมต่อกันนี้ไปต่อกับเวคเตอร์ pET-3a ที่ทำให้ยีนที่ต่อไว้แสดงออก แล้วนำเวคเตอร์ pET-3a นี้ ไปถ่ายเข้าสู่แบคทีเรีย E. coli สายพันธุ์ HT115 ที่ไม่มีการสร้างเอนไซม์ทำลาย dsRNA ทำการชักนำโดยใช้ IPTG ให้มีการสร้าง dsRNA ของยีน lef-2 กับ gp64 ในแบคทีเรีย พบว่าสามารถชักนำให้มีการสร้าง dsRNA ของยีน lef-2 และ gp64ได้ เมื่อทำการทดสอบความคงทนของ dsRNAs พบว่า dsRNAs สามารถอยู่ในอุณหภูมิห้องได้อย่างน้อย 5 วันโดยไม่ถูทำลาย และเมื่อนำมาทดสอบประสิทธิภาพการยับยั้งการเกิดโรคแกรสซอรี่ ในหนอนไหม พบว่า dsRNAs สามารถยับยั้งการเกิดโรคได้ประมาณ 60 - 80% เมื่อทำการทดลองยืนยันโดยใช้ dsRNA ของยีน lef-2 และ gp64 แล้วตรวจสอบประสิทธิภาพการยับยั้ง การเพิ่มจำนวนไวรัส โดยใช้ real time PCR พบว่า dsRNA ทำให้การเพิ่มจำนวนไวรัสลดลงได้
บทคัดย่อ (EN): Bombyx mori neucleopolyhedrovirus (BmNPV) is the most devastating pathogen since it causes the worst silkworm deleterious disease, grasserie. BmNPV is a member of the genus Neucleopolyhedrovirus (NPV), family Baculoviridae. The proliferation of NPVs needs a number of genes functioning in a sequential order. These genes have been divided into three classes, early (immediate-early and delayed early), late and very late genes, based on their expression time after virus infection. In this report, the complete sequences of ie-1, pe38, lef-2 and pg64 from Thai Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) were cloned and sequenced. The open reading frame (ORF) of ie-1, pe38, lef-2 and pg64 was 1755, 930, 633 and 1599 bp long and their deduced proteins were 584, 309, 210 and 532 amino acid residues respectively. The function of ie-1 is required for DNA replication and the pe38 function is important for stimulate DNA replication. While, a late expression factors2, lef-2, is required for viral DNA replication and regulates the transcription of very late genes. Moreover, a very late gene, gp64, is required for budded virus infect surrounding cells. To suppress NPV proliferation, double strand RNAs of lef-2 and gp64 were constructed. Two vectors containing two ~ 400 bp DNA fragments of a target gene, lef-2 and gp64, fused in inverted direction were constructed. The constructs were subcloned into an expression vector, pET-3a. The expression vectors were then introduced into a special bacterial strain, HT115, which could not produced an enzyme digesting dsRNAs. The bacteria containing the expression vectors were induced with IPTG to transacript dsRNAs of each target gene. The efficiency of dsRNAs on suppression grassery disease in silkworms was conducted by feeding silkworms with the dsRNAs. The result showed that dsRNAs could decrease the disease at approximately from 60 to 80%. Real time PCR was used to confirm the efficiency of double strand RNA to suppress NPV proliferation by using lef-2 and gp64 dsRNAs and found that the dsRNAs could reduce the virus number. Bombyx mori neucleopolyhedrovirus (BmNPV) is the most devastating pathogen since it causes the worst silkworm deleterious disease, grasserie. BmNPV is a member of the genus Neucleopolyhedrovirus (NPV), family Baculoviridae. The proliferation of NPVs needs a number of genes functioning in a sequential order. These genes have been divided into three classes, early (immediate-early and delayed early), late and very late genes, based on their expression time after virus infection. In this report, the complete sequences of ie-1, pe38, lef-2 and pg64 from Thai Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) were cloned and sequenced. The open reading frame (ORF) of ie-1, pe38, lef-2 and pg64 was 1755, 930, 633 and 1599 bp long and their deduced proteins were 584, 309, 210 and 532 amino acid residues respectively. The function of ie-1 is required for DNA replication and the pe38 function is important for stimulate DNA replication. While, a late expression factors2, lef-2, is required for viral DNA replication and regulates the transcription of very late genes. Moreover, a very late gene, gp64, is required for budded virus infect surrounding cells. To suppress NPV proliferation, double strand RNAs of lef-2 and gp64 were constructed. Two vectors containing two ~ 400 bp DNA fragments of a target gene, lef-2 and gp64, fused in inverted direction were constructed. The constructs were subcloned into an expression vector, pET-3a. The expression vectors were then introduced into a special bacterial strain, HT115, which could not produced an enzyme digesting dsRNAs. The bacteria containing the expression vectors were induced with IPTG to transacript dsRNAs of each target gene. The efficiency of dsRNAs on suppression grassery disease in silkworms was conducted by feeding silkworms with the dsRNAs. The result showed that dsRNAs could decrease the disease at approximately from 60 to 80%. Real time PCR was used to confirm the efficiency of double strand RNA to suppress NPV proliferation by using lef-2 and gp64 dsRNAs and found that the dsRNAs could reduce the virus number.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
คำสำคัญ:
  1. ไหม
  2. โรคไหม
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

เลิศลักษณ์ เงินศิริ. "การยับยั้งการเพิ่มจำนวนไวรัสนิวคลีโอโพลีฮีโดร (NPV) ของไหม โดยใช้ double-strand RNA interferenceSuppression of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus by double-strand RNA interference". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2553

เลิศลักษณ์ เงินศิริ. "การยับยั้งการเพิ่มจำนวนไวรัสนิวคลีโอโพลีฮีโดร (NPV) ของไหม โดยใช้ double-strand RNA interferenceSuppression of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus by double-strand RNA interference". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2553. Print.



TARR Wordcloud:
การยับยั้งการเพิ่มจำนวนไวรัสนิวคลีโอโพลีฮีโดร (NPV) ของไหม โดยใช้ double-strand RNA interference
เลิศลักษณ์ เงินศิริ
มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
30 กันยายน 2553
การเพิ่มระดับความต้านทานต่อโรคไหม้ในพันธุ์ข้าวเจ้าหอมพิษณุโลก 1 โดยใช้โมเลกุลเครื่องหมาย การศึกษาความสัมพันธ์ในกระบวนการจัดการ การเลี้ยงไหม ที่มีผลต่อการเกิดโรคและการระบาดของโรคไหม ศึกษาผลของวิธีการป้องกันกำจัดโรคไหมที่เกษตรกรปฏิบัติ การศึกษาแนวทางของการพัฒนาความรู้ในการป้องกันกำจัดโรคไหมของเกษตรกร การศึกษาความสัมพันธ์ในกระบวนการจัดการ การเลี้ยงไหมที่มีผลต่อการเกิดโรค และการระบาดของโรคไหม การใช้สารสกัดจากพืชในการควบคุมโรคไหม้ของข้าว การใช้เครื่องหมายดีเอ็นเอช่วยในการผนวกยีนต้านทานโรคไหม้เข้าสู่ข้าวสายพันธุ์ปรับปรุง IR 57514 เพื่อเพิ่มศักยภาพการผลิตข้าวในที่ราบลุ่มอาศัยน้ำฝนบริเวณลุ่มแม่น้ำโขง การพัฒนาสายพันธุ์ข้าว Jasmine IR57514 ให้ต้านทานโรคไหม้และเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลโดยใช้เครื่องหมายโมเลกุลช่วยในการคัดเลือก การทดสอบปฏิกิริยาของ Bacillus sp. No.B.01 ที่เป็น สาเหตุของโรคไหมต่อสารปฏิชีวนะ การพัฒนาสายพันธุ์ข้าว Jasmine IR57514 ให้ต้านทานโรคไหม้และเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล โดยใช้เครื่องหมายโมเลกุลช่วยในการคัดเลือก
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair