สืบค้นงานวิจัย
การศึกษาการแสดงออกและหน้าที่ของยีนพัฒนาเซลล์อสุจิที่แยกได้จากช่องเก็บอสุจิของกุ้งกุลาดำแม่พันธุ์และแนวทางการประยุกต์ใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการปฏิสนธิ
รพีพรรณ วานิชวิริยกิจ - มหาวิทยาลัยมหิดล
ชื่อเรื่อง: การศึกษาการแสดงออกและหน้าที่ของยีนพัฒนาเซลล์อสุจิที่แยกได้จากช่องเก็บอสุจิของกุ้งกุลาดำแม่พันธุ์และแนวทางการประยุกต์ใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการปฏิสนธิ
ชื่อเรื่อง (EN): Expression and Characterization of Sperm Maturation Related Genes Isolated from Thelycum of P. monodon Broodstock and Their Applications in Fertilization Improvement
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: รพีพรรณ วานิชวิริยกิจ
บทคัดย่อ: การผสมพันธุ์ในกุ้งกุลาดำ กุ้งตัวผู้จะสอดถุงอสุจิเข้าไปที่อวัยวะเก็บอสุจิของตัวเมีย (Thelycum) ที่เพิ่งลอกคราบ ซึ่งพบว่า thelycum นี้มีบทบาททำให้อสุจิมีความพร้อมในการปฏิสนธิ ก่อนหน้านี้เราได้ทำการสร้าง cDNA library จาก Thelycum ของแม่พันธุ์กุ้งกุลาดำ ด้วยวิธีการ suppression subtractive hybridization เพื่อค้นหายีนที่ทำหน้าที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการเตรียมความพร้อมในการปฏิสนธิของอสุจิ และพบลำดับบางส่วนของยีน Penaeus monodon lipid binding protein ซึ่งมีลำดับเบสยาว 460 ลำดับ ดังนั้นในการศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อหาลำดับเบสสมบูรณ์ และศึกษาการแสดงออกของ Penaeus monodon lipid binding protein ในกุ้งกุลาดำ (PmLBP) รวมถึงหน้าที่ที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการเตรียมความพร้อมในการปฏิสนธิของอสุจิในกุ้งกุลาดำ ในการศึกษานี้เราใช้วิธี 5?และ 3? RACE-PCR เพื่อหาลำดับเบสที่สมบูรณ์ของยีน PmLBP ซึ่งพบว่ามีความยาว 1018 ลำดับ บรรจุรหัสของกรดอะมิโน 148 ตัว ประกอบด้วยส่วน signal peptide ที่ N-terminal 16 ตัว ส่วนที่คล้ายกับ cholesterol/lipid-binding domain 132 ตัว และ termination codon เป็นส่วนสุดท้าย การศึกษาการแสดงออกของ PmLBP โดยใช้วิธี RT-PCR และ in situ hybridization พบว่า PmLBP แสดงออกมากในระบบสืบพันธุ์ เช่น อัณฑะ, ท่อนำอสุจิ, ถุงเก็บอสุจิ และอวัยวะเก็บอสุจิของตัวเมีย โดยน่าจะสร้างมาจากเซลล์เยื่อบุของท่อนำอสุจิ และอวัยวะเก็บอสุจิของตัวเมีย นอกจากนี้ยังพบการแสดงออกของ PmLBP ได้ในอวัยวะระบบอื่นๆ อีกด้วย เนื่องจาก PmLBP ประกอบด้วยส่วนของ cholesterol/lipid binding site เราจึงมีสมมุติฐานว่า PmLBP มีหน้าที่ในการดึงคอเรสเตอรอลออกจากเยื่อหุ้มเซลล์อสุจิในขณะที่เกิดกระบวนการพัฒนาอสุจิในระบบทางเดินอสุจิของตัวผู้ และในถุงเก็บอสุจิของตัวเมีย เราได้สังเคราะห์ recombinant PmLBP protein ใน E. coli ที่ต่อด้วยกรดอะมิโนฮิสติดีน 6 ตัว (rPmLBP-6His) ขึ้นมาเพื่อใช้ศึกษาหน้าที่ของ PmLBP ด้วยวิธีการ Protein-Lipid Overlay Assay และใช้ในการบ่มกับอสุจิที่แยกจากท่อนำอสุจิ ผลการทดลองพบว่า rPmLBP-6His สามารถจับกับไขมันที่สกัดได้จากอสุจิ และเมื่อทำการบ่มระหว่าง rPmLBP-6His (10 ?g/ml) และอสุจิที่แยกจากท่อนำอสุจิ พบว่าปริมาณคลอเลสเตอรอลในอสุจิลดลง ผลการทดลองบ่งชี้ว่า PmLBP อาจทำหน้าที่ในการดึงคอเลสเตอรอลออกจากเยื่อหุ้มเซลล์อสุจิของกุ้งกุลาดำในกระบวนการพัฒนาอสุจิภายในท่อทางเดินสืบพันธุ์
บทคัดย่อ (EN): In the black tiger shrimp, Penaeus monodon, male mates with a soft-shell newly molted female. During mating, the male inserts sperm sacs (spermatophores) into the female sperm storage organ, the thelycum. It has been known that the thelycum plays an active role in shrimp sperm capacitation which is the process that makes the sperm ready for fertilization. To identify genes that are involved in sperm capacitation, our group has recently constructed cDNA library from the thelycum of P. monodon female broodstocks using suppression subtractive hybridization protocol. Interestingly, the partial nucleotide sequence of Penaeus monodon lipid binding protein (PmLBP) was found at the length of 460 bp. Therefore, in this study, we aimed to characterize the full cDNA sequence of PmLBP and investigate its role in sperm maturation. Using using 5? and 3? RACE-PCR, we could identify full sequence of PmLBP cDNA. The longest open reading frame of PmLBP cDNA (1018 bp) encodes a putative 148 amino acids including 16 amino acids of a signal peptide at N-terminal, 132 amino acids of the highly conserved cholesterol/lipid-binding domain, and a termination codon, respectively. Tissue specific expression of PmLBP was determined using RT-PCR and in situ hybridization. The results showed that PmLBP gene was highly expressed in the reproductive tracts. The PmLBP transcript was localized in germ cells within the seminiferous tubules of the testis and epithelial cells of the vas deferens, terminal ampoule, and female thelycum, suggesting the cellular sources of PmLBP production. Since the PmLBP contained the putative cholesterol/lipid binding site, we hypothesized that it may play role in sperm cholesterol efflux during the sperm maturation process in the male reproductive tracts. To reveal the functional role of the PmLBP, the recombinant PmLBP protein (rPmLBP-6His) was expressed in E. coli and used in Protein-Lipid Overlay Assay and co-incubation of rPmLBP-6His and sperm taken from the vas deferens (Vsp). The results showed that rPmLBP-6His could bind specifically to the crude sperm lipid extracted from Vsp and pure cholesterol. Moreover, co-incubation of 10 ?g/ml rPmLBP-6His and Vsp showed significant decrease of sperm cholesterol level suggesting role of PmLBP in sperm cholesterol effect.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยมหิดล
คำสำคัญ: กุ้งกุลาดำ
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

รพีพรรณ วานิชวิริยกิจ. "การศึกษาการแสดงออกและหน้าที่ของยีนพัฒนาเซลล์อสุจิที่แยกได้จากช่องเก็บอสุจิของกุ้งกุลาดำแม่พันธุ์และแนวทางการประยุกต์ใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการปฏิสนธิExpression and Characterization of Sperm Maturation Related Genes Isolated from Thelycum of P. monodon Broodstock and Their Applications in Fertilization Improvement". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2557

รพีพรรณ วานิชวิริยกิจ. "การศึกษาการแสดงออกและหน้าที่ของยีนพัฒนาเซลล์อสุจิที่แยกได้จากช่องเก็บอสุจิของกุ้งกุลาดำแม่พันธุ์และแนวทางการประยุกต์ใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการปฏิสนธิExpression and Characterization of Sperm Maturation Related Genes Isolated from Thelycum of P. monodon Broodstock and Their Applications in Fertilization Improvement". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2557. Print.



TARR Wordcloud:
การศึกษาการแสดงออกและหน้าที่ของยีนพัฒนาเซลล์อสุจิที่แยกได้จากช่องเก็บอสุจิของกุ้งกุลาดำแม่พันธุ์และแนวทางการประยุกต์ใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการปฏิสนธิ
รพีพรรณ วานิชวิริยกิจ
มหาวิทยาลัยมหิดล
30 กันยายน 2557
การสืบค้นยีน และศึกษาการแสดงออกของโปรตีนในช่องเก็บเซลล์อสุจิของ กุ้งกุลาดำเพศเมียที่เกี่ยวข้องกับการพัฒนาความสามารถในการปฏิสนธิของเซลล์อสุจิ การทดลองเลี้ยงกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon Fabricius, 1798) ร่วมกับกุ้งแชบ๊วย (Penaeus merguiensis De Man, 1888) และกุ้งขาวแปซิฟิค (Litopenaeus vannamei Boone, 1931) ในบ่อดิน ด้วยระบบน้ำหมุนเวียน การวิจัยรูปแบบโครงการฟาร์มเลี้ยงกุ้งแชบ๊วยแบบพัฒนาโดยใช้ระบบรีไซเคิลผสมผสานกับระบบมีนเกษตร ยีนที่เกี่ยวข้องกับการเจริญเติบโตของกุ้งกุลาดำ การพัฒนาเทคโนโลยีหลังการจับกุ้งกุลาดำ การศึกษาลักษณะสมบัติและการแสดงออกของยีน asialoglycoprotein receptor จากกุ้งกุลาดำPenaeus monodon การศึกษายีนของไวรัสตัวแดงดวงขาวและกุ้งกุลาดำที่เกี่ยวข้องกับกลไกการตายของเซลล์ การทดลองเลี้ยงกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon Fabricius, 1978) ตามมาตรฐานการเพาะเลี้ยงกุ้งทะเลระบบอินทรีย์ การศึกษาลักษณะและหน้าที่ของโปรตีน Argonaute ในการเจริญของเซลล์สืบพันธุ์และการพัฒนาตัวอ่อนของกุ้งกุลาดำ ผลของกระแสน้ำ,ระยะเวลา ที่มีผลต่อการเจริญเติบโต คุณภาพ และวัยเจริญพันธุ์ของพ่อแม่พันธุ์กุ้งกุลาดำที่เลี้ยงในบ่อดิน
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair