คลังข้อมูลการวิจัยการเกษตรไทย

ผู้แต่ง รองศาสตราจารย์สุดสาย ตรีวานิช

เผยแพร่โดย

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์

เผยแพร่เมื่อ 20 มีนาคม 2559

หน่วยงาน มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์

คัดลอก URL

ชื่อเรื่อง:	การพัฒนาเทคนิคมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์เพื่อตรวจวิเคราะห์ Shiga-toxin producing Escherichia coli (STEC), Listeria monocytogenes และ Salmonella spp. ในอาหาร
ชื่อเรื่อง (EN):	Development of multiplex PCR technique for detection of Shiga-toxin producing Escherichia coli (STEC), Listeria monocytogenes and Salmonella spp. in foods.
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ:	รองศาสตราจารย์สุดสาย ตรีวานิช
บทคัดย่อ:	สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน) หรือ สวก. ได้สนับสนุนทุนวิจัยโครงการ “การพัฒนาเทคนิคมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์เพื่อตรวจวิเคราะห์ Shiga-toxin producing Escherichia coli (STEC), Listeria monocytogenes และ Salmonella spp. ในอาหาร” แก่มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ มีวัตถุประสงค์ 1) พัฒนาวิธีการมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ เพื่อตรวจสอบกลุ่มแบคทีเรียเป้าหมาย (shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC), Listeria monocytogenes และ Salmonella spp.) 2) ศึกษาสภาวะที่เหมาะสมของเทคนิคมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ต่อการตรวจสอบกลุ่มแบคทีเรียเป้าหมาย 3) ศึกษาการใช้เทคนิคมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ในการตรวจสอบการปนเปื้อนของกลุ่มแบคทีเรียเป้าหมายในอาหาร โดยเปรียบเทียบกับวิธีมาตรฐานและชุดตรวจสอบแบบรวดเร็วทางการค้า จากการศึกษาวิจัยพบว่า สภาวะที่เหมาะสม คือ pre-denaturation 95 องศาเซลเซียส นาน 2 นาที denaturation 95 องศาเซลเซียส นาน 30 วินาที annealing 57.6 องศาเซลเซียส นาน 30 วินาที extension 72 องศาเซลเซียส นาน 30 วินาที และ final extension 72 องศาเซลเซียส นาน 7 นาที ที่ความเข้มข้นไพรเมอร์ 0.05 µM, 0.05 µM, 0.02 µM, 0.02 µM, 0.6 µM และ 0.03 µM สำหรับไพรเมอร์stx1-2, stx2, eae, invA, hlyA และ IAC ตามลำดับ โดยไพรเมอร์ทั้งหมดให้ผลิตภัณฑ์ดีเอ็นเอที่มีขนาดเฉพาะและแยกออกจากกันได้อย่างชัดเจน วิธีมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ที่พัฒนาขึ้นมีความไวในการตรวจสอบของดีเอ็นเอแบคทีเรียเป้าหมายแต่ละชนิดที่ความเข้มข้น 0.01 ng/µl (กรณีใช้ชุดสกัดดีเอ็นเอทางการค้า) หรือ 10 ng/µl (กรณีใช้วิธีการต้มร่วมกับเม็ดบีด) เมื่อมีการใช้อาหารเลี้ยงเชื้อเหลว SEB เพื่อบ่มเพาะแบคทีเรีย กลุ่มเป้าหมายที่อาจปนเปื้อนในตัวอย่างอาหารสด (เนื้อหมู เนื้อวัว เนื้อไก่ และถั่วงอก) ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน 24 ชั่วโมง แล้วนำไปตรวจสอบด้วยปฏิกิริยามัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ที่พัฒนาขึ้นร่วมกับการสกัดดีเอ็นเอโดยวิธีการต้มร่วมกับเม็ดบีด พบว่า วิธีมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ที่พัฒนาขึ้น ให้ผลในการตรวจสอบแบคทีเรียชนิดก่อโรคกลุ่มเป้าหมายในตัวอย่างอาหารสดดังกล่าวส่วนใหญ่เป็นไปในทิศทางเดียวกันกับวิธีมาตรฐานดัดแปลง BAM (2001) วิธีมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ที่พัฒนาขึ้นในการวิจัยนี้สามารถใช้ในการตรวจสอบแบคทีเรียกลุ่มเป้าหมายในอาหารสดได้ภายในระยะเวลา 26 ชั่วโมง ประโยชน์ที่จะได้รับคือได้ไพรเมอร์ 6 คู่ ที่จำเพาะต่อยีนก่อโรคเป้าหมายของ STEC ( stx1-1, stx2, eae) , L. monocytogenes (hlyA), Salmonella spp. (invA) และตัวติดตาม คือ IAC ที่จำเพาะต่อ pUC19 plasmid รวมถึงได้เทคนิคมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ที่พัฒนาขึ้นมีต้นทุนต่ำในการตรวจวิเคราะห์แบคทีเรียกลุ่มเป้าหมายทั้ง 3 ได้พร้อมกันในครั้งเดียว สะดวกและง่ายในการดำเนินการเตรียมตัวอย่าง การบ่มเพาะเลี้ยงตัวอย่าง และการสกัดดีเอ็นเอ ใช้ระยะเวลาในการทราบผลสั้นกว่าวิธีมาตรฐานหลายวัน และให้ผลการตรวจสอบที่ถูกต้องสอดคล้องกับวิธีมาตรฐาน
บทคัดย่อ:	ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN):	th
เผยแพร่โดย:	มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
คำสำคัญ:	ซัลโมเนลลา สปีชีส์
คำสำคัญ (EN):	Salmonella spp.
เจ้าของลิขสิทธิ์:	สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร
ข้อมูลทรัพยสินทางปัญญา
ประเภทIP	อนุสิทธิบัตร
รายชื่อสิ่งประดิษฐ์	1803000947 กรรมวิธีการตรวจวิเคราะห์ Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC), Salmonella spp. และ Listeria monocytogenes ในเนื้อสัตว์สดด้วยวิธีมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ร่วมกับอาหารเลี้ยงเชื้อเดี่ยว
เลขที่คำขอ	1803000947
วันที่ยื่นคำขอ	2018-04-20 12:00:00
เลขที่ประกาศ	18248
วันที่จดทะเบียน	2021-09-06 12:00:00
เลขที่จดทะเบียน	18248
วันที่ประกาศ	2021-09-06 12:00:00
สถานะปัจจุบัน	เชิงพาณิชย์