สืบค้นงานวิจัย
การผลิตและคัดกรองไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่
Kroong Yoosook - มหาวิทยาลัยมหิดล
ชื่อเรื่อง: การผลิตและคัดกรองไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่
ชื่อเรื่อง (EN): Production and screening of hybridoma clones producing monoclonal antibodies specific to dengue virus proteins
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Kroong Yoosook
บทคัดย่อ: โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ เป็นเครื่องมือที่สำคัญในการศึกษาพยาธิสภาพของ โรค และการพัฒนาชุดตรวจวินิจฉัยโรคไข้เลือดออก การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์ในการผลิตเซลล์ไฮบริโดมาที่ สามารถสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะกับโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ โดยเลือกซีโรทัยป์ 1 เป็นตัวแทนใน การศึกษา โดยใช้ไวรัสเด็งกี่และโปรตีน NS1 จากน้ำเลี้ยงเซลล์ที่มีการติดเชื้อไวรัสซีโรทัยป์ 1 ในการฉีดหนู BALB/c 2 ตัวคือ M1 และ M2 ด้วยปริมาณที่แตกต่างกันทุกๆ 2 สัปดาห์ เมื่อตรวจพบปริมาณแอนติบอดีต่อ ไวรัสเด็งกี่ในซีรั่มหนูทั้งสองตัว ได้ทำการเชื่อมเซลล์ม้ามของหนูแต่ละตัวกับเซลล์มะเร็งไมอิโลมาเพื่อสร้างเป็น เซลล์ไฮบริโดมา และทำการคัดเลือกโคลนที่มีการสร้างแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ด้วยวิธี ELISA หรือ DEIA จากไฮบริโดมาทั้งหมดที่ได้จากการเชื่อมเซลล์จำนวน 179 โคลน พบว่ามีเพียงจำนวน 7 โคลนเท่านั้นที่ สร้างแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ และถูกนำมาโคลนให้กลายเป็นเซลล์เดี่ยวโดยวิธี limiting dilution โดย ได้โคลนที่มาจากการทำครั้งที่หนึ่งจำนวน 3 โคลน ได้แก่ M1-69, M1-84 และ M2-35 ส่วนโคลน M1-53 นั้นได้มา หลังจากนำไปโคลนเป็นเซลล์เดี่ยวซ้ำเป็นครั้งที่สอง จากการศึกษาคุณสมบัติของแต่ละโคลนด้วยวิธี Western blot พบว่าโคลน M1-53 และ M1-84 ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะกับโปรตีน NS1 ของไวรัสเด็งกี่ ส่วนโม โนโคลนอลแอนติบอดีจากโคลน M1-69 และ M2-35 นั้นทำปฏิกิริยากับโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ที่ไม่ทราบชนิด จึง ไม่ได้นำมาศึกษาต่อ ผลการตรวจสอบคุณสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดี 53A-1 และ 84A ซึ่งได้มาจาก โคลน M1-53 และโคลน M1-84 ตามลำดับ พบว่าแอนติบอดีทั้งสองมี isotype เป็นชนิด IgG1 มีความจำเพาะต่อ โปรตีน NS1 ของไวรัสเด็งกี่ซีโรทัยป์ 1 และทำปฏิกิริยากับ conformational epitope ของ NS1 เท่านั้น จากการนำ โมโนโคลนอลแอนติบอดีทั้งสองมาประยุกต์ใช้ใน NS1 capture ELISA พบว่าสามารถแยกโปรตีน NS1 ของ ไวรัสเด็งกี่ซีโรทัยป์ 1 จากซีโรทัยป์อื่นๆได้อย่างจำเพาะ ผลที่ได้จากการศึกษานี้สามารถนำไปประยุกต์ใช้ในการ ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ โดยเฉพาะโปรตีน NS1 ของเด็งกี่ซีโรทัยป์อื่นๆ ได้ ซึ่งอาจนำไปใช้ในการพัฒนาชุดตรวจโปรตีน NS1 ที่สามารถแยกซีโรทัยป์ของไวรัสเด็งกี่ได้ในอนาคต
บทคัดย่อ (EN): Monoclonal antibodies (Mabs) specific to dengue proteins are one of the most effective tools to elucidate dengue pathogenesis as well as to diagnosis application. This study is aimed to generate hybridoma clones producing Mabs to dengue serotype- 1 (dengue-1) proteins, as a representative among four serotypes. Dengue-1 infected culture supernatant containing dengue particles as well as secreted NS1 protein was used as an immunogen for mouse immunization. Two BALB/c mice, namely M1 and M2, were injected with different dosages of dengue-1 at 2 weeks interval. Antibody responses in the sera of both immunized mice were detected. Fusions of mouse myeloma and spleen cells from each mouse were performed. The dengue-1 lysate coated ELISA and dot enzyme immunoassays (DEIA) were used for screening of positive hybridoma clones. In the fusion screening step, 7 out of 179 hybridoma supernatants gave positive reactivity by either or both assays. All positive fusion hybridomas were subjected to single cell cloning by limiting dilution. The monoclones were obtained from M1-84, M1-69 and M2-35 after the first limiting dilution step, while those from M1-53 were obtained after the second limiting dilution. Using Western blot analysis, only M1-53 and M1-84 limiting clone showed clear reactivity to dengue NS1 protein, while M1-69 and M2-35 gave a ladder of non-identified reactive bands to dengue proteins, which were excluded from the following studies. Mab 53A-1 and 84A, which were generated by monoclone M1-53 and M1-84, respectively, were further characterized. Both 53A-1 and 84A Mabs were IgG1 isotypes, reactive to NS1 protein of dengue-1 and recognize conformational epitope on NS1 protein. Application of both Mabs to NS1 capture ELISA indicated that they could differentiate dengue-1 from other serotypes. The immunization and screening protocols in this study could be applied to generate more Mabs to dengue proteins, especially NS1, which are specific to other serotypes. Those generated Mabs would be applicable to the development of a novel ELISA dengue NS1 serotyping
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://dcms.thailis.or.th/dcms/dccheck.php?Int_code=126&RecId=4264&obj_id=4523
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยมหิดล
คำสำคัญ (EN): Viral Nonstructural Proteins
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยมหิดล
รายละเอียด: โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ เป็นเครื่องมือที่สำคัญในการศึกษาพยาธิสภาพของ โรค และการพัฒนาชุดตรวจวินิจฉัยโรคไข้เลือดออก การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์ในการผลิตเซลล์ไฮบริโดมาที่ สามารถสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะกับโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ โดยเลือกซีโรทัยป์ 1 เป็นตัวแทนใน การศึกษา โดยใช้ไวรัสเด็งกี่และโปรตีน NS1 จากน้ำเลี้ยงเซลล์ที่มีการติดเชื้อไวรัสซีโรทัยป์ 1 ในการฉีดหนู BALB/c 2 ตัวคือ M1 และ M2 ด้วยปริมาณที่แตกต่างกันทุกๆ 2 สัปดาห์ เมื่อตรวจพบปริมาณแอนติบอดีต่อ ไวรัสเด็งกี่ในซีรั่มหนูทั้งสองตัว ได้ทำการเชื่อมเซลล์ม้ามของหนูแต่ละตัวกับเซลล์มะเร็งไมอิโลมาเพื่อสร้างเป็น เซลล์ไฮบริโดมา และทำการคัดเลือกโคลนที่มีการสร้างแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ด้วยวิธี ELISA หรือ DEIA จากไฮบริโดมาทั้งหมดที่ได้จากการเชื่อมเซลล์จำนวน 179 โคลน พบว่ามีเพียงจำนวน 7 โคลนเท่านั้นที่ สร้างแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ และถูกนำมาโคลนให้กลายเป็นเซลล์เดี่ยวโดยวิธี limiting dilution โดย ได้โคลนที่มาจากการทำครั้งที่หนึ่งจำนวน 3 โคลน ได้แก่ M1-69, M1-84 และ M2-35 ส่วนโคลน M1-53 นั้นได้มา หลังจากนำไปโคลนเป็นเซลล์เดี่ยวซ้ำเป็นครั้งที่สอง จากการศึกษาคุณสมบัติของแต่ละโคลนด้วยวิธี Western blot พบว่าโคลน M1-53 และ M1-84 ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะกับโปรตีน NS1 ของไวรัสเด็งกี่ ส่วนโม โนโคลนอลแอนติบอดีจากโคลน M1-69 และ M2-35 นั้นทำปฏิกิริยากับโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ที่ไม่ทราบชนิด จึง ไม่ได้นำมาศึกษาต่อ ผลการตรวจสอบคุณสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดี 53A-1 และ 84A ซึ่งได้มาจาก โคลน M1-53 และโคลน M1-84 ตามลำดับ พบว่าแอนติบอดีทั้งสองมี isotype เป็นชนิด IgG1 มีความจำเพาะต่อ โปรตีน NS1 ของไวรัสเด็งกี่ซีโรทัยป์ 1 และทำปฏิกิริยากับ conformational epitope ของ NS1 เท่านั้น จากการนำ โมโนโคลนอลแอนติบอดีทั้งสองมาประยุกต์ใช้ใน NS1 capture ELISA พบว่าสามารถแยกโปรตีน NS1 ของ ไวรัสเด็งกี่ซีโรทัยป์ 1 จากซีโรทัยป์อื่นๆได้อย่างจำเพาะ ผลที่ได้จากการศึกษานี้สามารถนำไปประยุกต์ใช้ในการ ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่ โดยเฉพาะโปรตีน NS1 ของเด็งกี่ซีโรทัยป์อื่นๆ ได้ ซึ่งอาจนำไปใช้ในการพัฒนาชุดตรวจโปรตีน NS1 ที่สามารถแยกซีโรทัยป์ของไวรัสเด็งกี่ได้ในอนาคต
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

Kroong Yoosook. "การผลิตและคัดกรองไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่Production and screening of hybridoma clones producing monoclonal antibodies specific to dengue virus proteins". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2551

Kroong Yoosook. "การผลิตและคัดกรองไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่Production and screening of hybridoma clones producing monoclonal antibodies specific to dengue virus proteins". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2551. Print.



TARR Wordcloud:
การผลิตและคัดกรองไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโปรตีนของไวรัสเด็งกี่
Kroong Yoosook
มหาวิทยาลัยมหิดล
2551
การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อ Vibrio alginolyticus การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อไกลโคลิปิดที่จำเพาะของเชื้อวัณโรค การผลิตและลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีจำเพาะต่อเม็ดเลือดกุ้งกุลาดำ Penaeus monodon การสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อโปรตีน OprD porin ซึ่งเกี่ยวข้องกับการดื้อยา ผลิตภาพของปัจจัยการผลิตโดยรวมของการผลิตอ้อยเพื่อใช้ผลิตเอทานอลใน อำเภอแม่สอด จังหวัดตาก การลดเวลานำในการผลิตและงานระหว่างผลิตในการผลิตตู้นิรภัยโดยใช้เทคนิคการผลิตแบบลีน การพัฒนาโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโพลีฮีดรินของเชื้อโมโนดอนแบคคูโลไวรัสในกุ้งกุลาดำ การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดที่จำเพาะต่อเชื้อ Aeromonas Hydrophila ที่ก่อโรคในปลา การวางแผนการผลิตเพื่อเพิ่มผลผลิตของโรงงานผลิตอาหารเสริม การเตรียมอิมมูโนเจนโดยวิธีการสามวิธีที่ต่างกันเพื่อผลิตโมโนโคลยอลแอยติบอดรต่อโปรตีน CD4
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair