สืบค้นงานวิจัย
การพัฒนาเทคนิคเพื่อตรวจเชื้อปนเปื้อนในเนื้อไก่สด
มารินา เกตุทัต-คาร์นส์ - มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีสุรนารี
ชื่อเรื่อง: การพัฒนาเทคนิคเพื่อตรวจเชื้อปนเปื้อนในเนื้อไก่สด
ชื่อเรื่อง (EN): Development of foodborne pathogens detection in fresh chicken meat
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: มารินา เกตุทัต-คาร์นส์
บทคัดย่อ: เทลนิคโอสิ โกนิวกลีโอไทค์อเรย์ ในการวิจัยนี้ เป็นเทกนิตที่ใช้การจับอู่เบสอย่างจำเพาะของสาย ดีเอ็นเอเปีหมายจากเชื้อกับดีเอ็นเอติดตามสายสั้น (DNA probes) ที่อยูบนแผ่นอเรย์ ซึ่งจะสามารถใช้ ตรวจเชื้อก่อโรดทางเดินอาหารจำนวนมากได้ ด้วยเวลาอันรวคเร็วในขั้นตอนเคียว การศึกษานี้ได้ทำการ คัดเลือกดีเอ็นเอติดตามสายสั้ที่มีความจำเพาะต่อดีเอ็นเอเป้าหมายจากเชื้อ ให้มีความเหมาะสม เพื่อ นำมาใช้ในการตรวจหาเบกที่เรียบ่งนี้คุณภาพค้านตวามปลอดภัยของเนื้อไก่สดเพื่อการบริโภก โดยติด ฉลากสายคีเอ็นเอเป้าหมาขจากเชื้อ ด้วยเทคนิดการติดฉลากด้วยสาร digoxigenin (DIG) หลังจากทำการ เพิ่มปริมาณ ของสายคีเอ็นเอเป้าหมาย ซึ่งสามารถตรวจสอบการเกิดการจับคู่อย่างชำเพาะของสายดีเอ็นเอ เป้หมายจากเชื้อ กับดีเอ็นเอติดตามสายสั้นที่อยูบนแผ่นอเรย์ได้ด้วยตาเปล่า ในเบื้องดันผู้วิจัย ได้ใช้ยืน 16S RNA ที่มีความงำเพาะต่อเชื้อ Escherichia coli, Saimonelila spp. Stephylococcus aureus, Listeria monocytogenes และ Clostridum perfringens เป็นยืนเป้าหมายต้นแบบ พบว่าความเข้มข้นที่เหมาะสม ของคีเอ็นเอติดตามสายสั้นบนเผ่นอเรย์ คือ 200 พิโกโมล การใช้ 168 RNA เป็นยืนเป้าหมายเพียงยืน เตียวนั้น สามารถตรวจเชื้อต่างสายพันธุ์กันได้ถึง ร สายพันธุ์ ที่ปริมาณดีเอ็นเองากจีโนมของแต่ละเชื้อ ต่ำสุดที่ 1 นาโนกรัม อย่างไรก็ตามการดรวจหาแบกทีเรียดังกลำวสามารถทำได้เพียงระดับสกุลท่านั้น รวมทั้งยังพา การเกิดปฏิกิริยาข้ามกันกับแบกทีเรียที่ไม่ใช่เป้าหมายที่แยกได้จากอาหารที่ใช้เพิ่มจำนวน เชื้อเป้าหมายอีกด้วย ดังนั้นผู้วิจัยจึงพัฒนาเทดนิดโอลิโกนิวคลีไอไทค์อเรย์ ร่วมกับเทดนิดที่เพิ่มปริมาณ ยืนเป้าหมายอื่นที่มีความจำเพาะต่อเชื้อเป้าหมายร่วมด้วย โดยการใช้เทกนิตมัลติเพล็กข์พีซีอาร์ และพีซี อาร์ดั้งเคิม ในการประเมินผลเทดนิดที่พัฒนาขึ้นมานี้ ใช้เชื้อเป้าหมาย 4 เชื้อ คือ E. col. L. monocytogenes, Saimonella spp. และ Shigeila spp. พบว่าสามารถตรวจพบแบคที่เรียเป้าหมายด้วย เทคนิคมัสติเพล็กซ์พีซีอาร์โดยใช้ยืน นsPA, p7A, fmY และ pa! ซึ่งมีดวามงำเพาะกับเชื้อ E. col, I monocytogenes, Samonelia spp. และ Shigella spp. ตามสำดับ และหลังจากใช้เทคนิด มัลติเพล็กซ์พืซี อาร์ หรือ พีซีอาร์ดั้งเคิมร่วมกับเทคนิตโอลิโกนิวคลีโอไหตัอเรย์ ในการตรวจเชื้อเป้าหมาย พบว่าสามารถ แยกความแตกต่างของเชื้อเป้าหมายได้ไนระดับสกุล และระดับสายพันธุ์ โดยมีความผิดพลาดในการแปล ผลต่ำ และเมื่อเปรียบเทียบระหว่างการใช้เทคนิดมัสติเพล็กซ์พีรีอาร์ หรือ พีชีอาร์ดั้งเดิมร่วมกับเทคนิดโอ สิโกนิวดดีโอไหค์อเรย์ พบว่าประสิทธิภาพในการเพิ่มปริมามยืนเป้าหมายด้วยเทคนิดพีซีอาร์ดั้งเดิมนั้น ดีกว่า ทำให้สามารถตรวจเชื้อเป้าหมายทั้ง 4 เชื้อ ได้พร้อมกัน ทั้งในตัวอย่างที่เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อบริสุทธิ์ และในตัวอย่างเนื้อไก่สด ในงานวิจัชนี้พบว่าการใช้ เทคนิดมัฤติเพล็กซ์พีซีอาร์ และ พีซีอาร์ดั้งเคิม ร่วมกับเทกนิกโอลิโกนิวคโอไทค์งเรย์ สามารถตรวจเชื้อทั้ง 4 เชื้อ ได้ในปริมาณตีเอ็นเอจากจีโนมของ แต่ละเชื้อต่ำสุดที่ 1 พาโนกรัม และที่ 0.1 นาโนกรัม ตามสำคับ นอกจากนั้น ยังได้นำเทดนิดนี้ไป ประยุกต์ใช้ในการตรวจเชื้อในเนื้อไก่สด 10 ตัวอย่าง ผลการวิจัยพบว่หลังจากเพิ่มงำนวนเซลล์ของเชื้อ เป้าหมายโดยใช้อาหารที่จำพาะ และ การเพิ่มปริมาณยืนเป้าหมายโดยใช้เทดนิกพืซีอาร์ดั้งเดิม ร่วมกับ เทดนิดโอลิโกนิวคสีโอไทค์อรย์แล้ว สามารถตรวงเชื้อไส้ทั้ง 4 เชื้อพร้อมกัน ในตัวอย่างเนื้อไก่สด 25 กรัม ในขณะที่การใช้ทคนิด มัลติ!พล็กซ์พืชื่อาร์ ร่วมกับเทคนึคโอลิโกหิวคดีโอไทค์อเรย์ สามารถตรวจ ไส้เพียง 3 เชื้อ พร้อมกัน ได้แก่ E. cot, L. momogtogenes, Saimonella จากตัวอย่างเดียวกัน ทั้งนี้การใช้ เทคนิดพีซีอาร์ ดั้งเดิมร่วมกับเทดนิดโอลิโกนิวดสีไอไทค์อเรย์ สามารถใช้ตรวจเชื้อ Sh. boydi ที่ปนเปื้อน ในเนื้อ ไก่สด 25 กรัม ที่ระดับกวามเข้มขันเริ่มต้นต่ำสุดอย่างน้อย 3 เซลล์ และ L. monocylogenes ที่ ระดับความเข้มข้นเริ่มดันต่ำสุดอย่างน้อย 10 เซลส์ ขึ้นไป
บทคัดย่อ (EN): Oligonucleotide array hybridization based methods can be used for screening of multiple foodborne pathogens. Several target pathogens can be monitored in a single step of DNA hybridization using suitable specific probes on an array matrix. In this investigation, screenings of suitable probes for specific detection of foodborne pathogens prevalence in fresh chicken meat were performed using post-PCR labeled target regions. The hybridization signals of non-radioactive labeling digoxigenin (DIG) incorporated into the PCR target regions were observed by naked eyes. The target regions of 16S rRNA gene specific for Escherichia coli, Salmonella spp. Staprylococcus aureus, Listeria monocytogenes, and Clostridium perfringens, were used as models. The optimum concentration of the oligonucleotide probes was found to be 200 pmol. The detection using only 16S rRNA gene as target gene was carried out to detect multiple target bacteria at as low as 1 ng in the mixed genomic DNA from the 5 bacterial species. Although the results showed that a large number of target bacteria can be detected with easy result interpretation by oligonucleotide array hybridization but some of thein can be differentiated in only the genus level and some crossreactivities were found from the non- target bacteria isolated from the enrichment culture. Therefore, oligonucleotide array combined with multiplex PCR (m-PCR) or conventional PCR using specific genes as targets were developed to specifically detect dominant foodborne pathogens in chicken meat. Target bacteria including E. coli, L. monocytogenes, Salmonella spp, and Shigella spp. were used as models for the evaluation of these combined methods. M-PCR targeting the uspA, prfA, fimY, and ipaH was successfully used to detect E. coli, L. monocytogenes, Salmonella spp., and Shigella spp., respectively. The combination of m-PCR or conventional PCR with oligonucleotide array revealed discriminatory power among genera and species of E. coli, L. monocytogenes, Salmonella spp., and Shigella spp. with low or no incident of false negative results. The efficiency of the conventional PCR amplification is more sensitive than that of m-PCR for amplification of target genes. The m-PCR- and conventional PCR-oligonucleotide array could detect all 4 target bacteria at as low as 1 ng and 0.1 ng of each in the mixed genomic DNA extracted from pure cultures, respectively. The application of oligonucleotide anray was tested with 10 fresh chicken meat samples. Combination of target bacterial enrichment and DNA amplification demonstrated that the conventional PCR-oligonucleotide array could be used for simultaneously detection of all 4 target bacteria in fresh chicken meat samples while m-PCR-oligonucleotide array could simultancously detect only E. coli, Salmonella sp., and L. monocytogenes in the same samples. Conventional PCRoligonucleotide array was able to detect Sh. boydii and L. monocytogenes at initial concentration of at least 3 and 10 cells in 25 g sample, respectively.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีสุรนารี
คำสำคัญ (EN): chicken meat
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

มารินา เกตุทัต-คาร์นส์. "การพัฒนาเทคนิคเพื่อตรวจเชื้อปนเปื้อนในเนื้อไก่สดDevelopment of foodborne pathogens detection in fresh chicken meat". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีสุรนารี. 2557

มารินา เกตุทัต-คาร์นส์. "การพัฒนาเทคนิคเพื่อตรวจเชื้อปนเปื้อนในเนื้อไก่สดDevelopment of foodborne pathogens detection in fresh chicken meat". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีสุรนารี. 2557. Print.



TARR Wordcloud:
การพัฒนาเทคนิคเพื่อตรวจเชื้อปนเปื้อนในเนื้อไก่สด
มารินา เกตุทัต-คาร์นส์
มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีสุรนารี
30 กันยายน 2557
การพัฒนาวิธีการจำแนกเชื้อเลปโตสไปรา ด้วยเทคนิคทางอณูชีววิทยา การตรวจเชื้อไวรัส BHV-1 ด้วยเทคนิค Nested PCR การพัฒนาวัสดุนาโนเพื่อตรวจวิเคราะห์เชื้อ E. coli 0157 การพัฒนาการเก็บรักษาคุณภาพความสดของปลายี่สกเทศ การพัฒนาวิธีตรวจเชื้อ Trichomonas foetus ในน้ำเชื้อโคด้วยเทคนิค PCR การพัฒนาวิธีตรวจเชื้อ Tritrichomonas foetus ในน้ำเชื้อโคด้วยเทคนิค PCR การตรวจวินิจฉัยการติดเชื้อร่วมจากเนื้อเยื่อที่ฝังในพาราฟิน โดยใช้เทคนิค double immunohistochemistry การตรวจชนิดของเชื้อพยาธิที่มีเห็บเป็นพาหะในเลือดสุนัขด้วยเทคนิค high resolution melting analysis การพัฒนาเทคนิคการตรวจวินิจฉัยโรค Streptococcosis ในปลาทะเลเศรษฐกิจ ด้วยเทคนิค PCR การพัฒนาชุดตรวจสารฆ่าแมลงกลุ่มไพรีทรอยด์สังเคราะห์โดยเทคนิค ELISA
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair