สืบค้นงานวิจัย
การโคลนและศึกษาคุณลักษณะของ interferon-gamma จากกระบือปลักของไทย
อุคเดช บุญประกอบ - มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
ชื่อเรื่อง: การโคลนและศึกษาคุณลักษณะของ interferon-gamma จากกระบือปลักของไทย
ชื่อเรื่อง (EN): Cloning and characterization of Thai swamp buffalo interferon-gamma
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: อุคเดช บุญประกอบ
บทคัดย่อ: โคลนของ interferon-gamma (IFN-g) cDNAs ได้มาจากส่วน buffy coat ของกระบือปลักไทย (Bubalus bubalis carabanesis) ด้วยเทคนิค RT-PCR ชิ้น cDNA ดังกล่าวกำหนดรหัสการสร้างโปรตีนขนาด 166 กรดอะมิโน ประกอบด้วย signal peptide จำนวน 23 กรดอะมิโน และ mature protein จำนวน 143 กรดอะมิโน การวิเคราะห์ลำดับกรดอะมิโนแสดงให้เห็นว่า IFN-g ของกระบือปลักไทยมีลำดับกรดอะมิโนเหมือน IFN-g ของกระบืออีก 4 ตัว ที่มีรายงานไว้ก่อนหน้านี้ ร้อยละ 99.4–100.0 เหมือนของสัตว์เคี้ยวเอื้องชนิดอื่น ร้อยละ 91.6-97.6 และเหมือนของคน น้อยกว่าร้อบละ 65 การศึกษาแผนภูมิต้นไม้เชิงวงศ์วานวิวัฒนาการของลำดับกรดอะมิโนของ IFN-g แสดงความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดระหว่าง IFN-g ของกระบือ และ IFN-g ของสัตว์กระเพาะรวมชนิดอื่น การเปรียบเทียบลำดับนิวคลีโอไทด์ส่วน IFN-g promoter ของกระบือปลักไทย กระบือแม่น้ำอินเดีย โค แกะ และคน เผยให้เห็นลักษณะอนุรักษ์ของตำแหน่งการจับของโปรตีนที่ควบคุมการถอดรหัสพันธุกรรมที่สำคัญ ชี้ให้เห็นว่าการควบคุมการแสดงออกของยีน IFN-g อาจเหมือนกันในสัตว์เหล่านี้ การผลิตรีคอมบิแนนท์เวคเตอร์ที่มียีน 6xHis-IFN-g fusion อาศัยการเพิ่มจำนวนชิ้น cDNA ที่กำหนดรหัสการสร้าง mature protein ของ IFN-g ของกระบือปลัก ตัดต่อเข้าสู่ pQE-80L vector และเหนี่ยวนำให้แสดงออกในเชื้อ Escherichia coli DH5a การวิเคราะห์ด้วย SDS-PAGE แสดงให้เห็นว่ารีคอมบิแนนท์โปรตีน IFN-g ที่มีน้ำหนักมวลโมเลกุล 18 kDa พบอยู่ในส่วน inclusion bodies เป็นหลัก อย่างไรก็ตามการวิเคราะห์ด้วย Western blotting แสดงให้เห็นแถบโปรตีนเดี่ยวที่มีขนาด 16 kDa แสดงว่าอาจเกิด proteolysis degradation ของรีคอมบิแนนท์โปรตีนดังกล่าวโคลนของ interferon-gamma (IFN-g) cDNAs ได้มาจากส่วน buffy coat ของกระบือปลักไทย (Bubalus bubalis carabanesis) ด้วยเทคนิค RT-PCR ชิ้น cDNA ดังกล่าวกำหนดรหัสการสร้างโปรตีนขนาด 166 กรดอะมิโน ประกอบด้วย signal peptide จำนวน 23 กรดอะมิโน และ mature protein จำนวน 143 กรดอะมิโน การวิเคราะห์ลำดับกรดอะมิโนแสดงให้เห็นว่า IFN-g ของกระบือปลักไทยมีลำดับกรดอะมิโนเหมือน IFN-g ของกระบืออีก 4 ตัว ที่มีรายงานไว้ก่อนหน้านี้ ร้อยละ 99.4–100.0 เหมือนของสัตว์เคี้ยวเอื้องชนิดอื่น ร้อยละ 91.6-97.6 และเหมือนของคน น้อยกว่าร้อบละ 65 การศึกษาแผนภูมิต้นไม้เชิงวงศ์วานวิวัฒนาการของลำดับกรดอะมิโนของ IFN-g แสดงความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดระหว่าง IFN-g ของกระบือ และ IFN-g ของสัตว์กระเพาะรวมชนิดอื่น การเปรียบเทียบลำดับนิวคลีโอไทด์ส่วน IFN-g promoter ของกระบือปลักไทย กระบือแม่น้ำอินเดีย โค แกะ และคน เผยให้เห็นลักษณะอนุรักษ์ของตำแหน่งการจับของโปรตีนที่ควบคุมการถอดรหัสพันธุกรรมที่สำคัญ ชี้ให้เห็นว่าการควบคุมการแสดงออกของยีน IFN-g อาจเหมือนกันในสัตว์เหล่านี้ การผลิตรีคอมบิแนนท์เวคเตอร์ที่มียีน 6xHis-IFN-g fusion อาศัยการเพิ่มจำนวนชิ้น cDNA ที่กำหนดรหัสการสร้าง mature protein ของ IFN-g ของกระบือปลัก ตัดต่อเข้าสู่ pQE-80L vector และเหนี่ยวนำให้แสดงออกในเชื้อ Escherichia coli DH5a การวิเคราะห์ด้วย SDS-PAGE แสดงให้เห็นว่ารีคอมบิแนนท์โปรตีน IFN-g ที่มีน้ำหนักมวลโมเลกุล 18 kDa พบอยู่ในส่วน inclusion bodies เป็นหลัก อย่างไรก็ตามการวิเคราะห์ด้วย Western blotting แสดงให้เห็นแถบโปรตีนเดี่ยวที่มีขนาด 16 kDa แสดงว่าอาจเกิด proteolysis degradation ของรีคอมบิแนนท์โปรตีนดังกล่าว
บทคัดย่อ (EN): The cDNAs of interferon-gamma (IFN-g) were cloned from buffy coat fractions of Thai swamp buffalo (Bubalus bubalis carabanesis) by RT-PCR. The cDNA encodes a putative protein containing 166 amino acids with a 23 amino acid signal peptide and a mature protein with 143 amino acids. Sequence analysis showed that the Thai swamp buffalo IFN-g shared 99.4–100.0% identity at the amino acid level to four previously published buffalo, 91.6-97.6% to other ruminant and less than 65% to human IFN-g sequences. Phylogenetic analysis based on the predicted protein sequences show the close relationship between buffalo IFN-g and other ruminants’ IFN-g. Comparison of the IFN-g promoter sequences of Thai swamp buffalo, Indian river buffalo, cattle sheep and human revealed that the major transcription factor binding sites were highly conserved, indicating that regulation of IFN-g expression in these species may be similar. In order to produce a recombinant expression vector containing 6xHis-bIFN-g fusion gene construct, the cDNA encoding the mature Thai swamp buffalo IFN-g protein was amplified, cloned into a pQE-80L vector, and expressed in Escherichia coli DH5a. SDS-PAGE analysis showed that the recombinant IFN-g protein with molecular weight of 18 kDa was found in inclusion bodies. However, Western blotting showed revealed a singular band at 16 kDa, indicating proteolysis degradation of the recombinant protein.The cDNAs of interferon-gamma (IFN-g) were cloned from buffy coat fractions of Thai swamp buffalo (Bubalus bubalis carabanesis) by RT-PCR. The cDNA encodes a putative protein containing 166 amino acids with a 23 amino acid signal peptide and a mature protein with 143 amino acids. Sequence analysis showed that the Thai swamp buffalo IFN-g shared 99.4–100.0% identity at the amino acid level to four previously published buffalo, 91.6-97.6% to other ruminant and less than 65% to human IFN-g sequences. Phylogenetic analysis based on the predicted protein sequences show the close relationship between buffalo IFN-g and other ruminants’ IFN-g. Comparison of the IFN-g promoter sequences of Thai swamp buffalo, Indian river buffalo, cattle sheep and human revealed that the major transcription factor binding sites were highly conserved, indicating that regulation of IFN-g expression in these species may be similar. In order to produce a recombinant expression vector containing 6xHis-bIFN-g fusion gene construct, the cDNA encoding the mature Thai swamp buffalo IFN-g protein was amplified, cloned into a pQE-80L vector, and expressed in Escherichia coli DH5a. SDS-PAGE analysis showed that the recombinant IFN-g protein with molecular weight of 18 kDa was found in inclusion bodies. However, Western blotting showed revealed a singular band at 16 kDa, indicating proteolysis degradation of the recombinant protein.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
คำสำคัญ: โคลนนิ่ง
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

อุคเดช บุญประกอบ. "การโคลนและศึกษาคุณลักษณะของ interferon-gamma จากกระบือปลักของไทยCloning and characterization of Thai swamp buffalo interferon-gamma". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2553

อุคเดช บุญประกอบ. "การโคลนและศึกษาคุณลักษณะของ interferon-gamma จากกระบือปลักของไทยCloning and characterization of Thai swamp buffalo interferon-gamma". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2553. Print.



TARR Wordcloud:
การโคลนและศึกษาคุณลักษณะของ interferon-gamma จากกระบือปลักของไทย
อุคเดช บุญประกอบ
มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
30 กันยายน 2553
ผลการเหนี่ยวนำการเป็นสัด 2 วิธี ต่อการตั้งท้องในกระบือปลักไทย ความสำคัญของปลักต่อสวัสดิภาพของกระบือปลัก การศึกษาปัจจัยเสี่ยงและการระบาดของพยาธิใบไม้ในตับชนิด Fasciola gigantica ในโคและกระบือที่เลี้ยงในพื้นที่รอบทะเลสาบสงขลา การศึกษาความต้องการโปรตีนในกระบือปลักไทยที่ได้รับฟางข้าวเป็นอาหารหยาบ การประมาณค่าทางพันธุกรรมของลักษณะความสมบูรณ์พันธุ์ในกระบือปลักไทย การตรวจความเป็นพ่อ-แม่-ลูกในกระบือปลักไทยโดย microsatellite markers ผลของโปรเจสตินร่วมกับวิธี Ovsynch เพื่อผสมเทียมแบบกำหนดเวลาต่อการตั้งท้องในกระบือปลักไทย ประสิทธิภาพการผลิตกระบือปลักและกระบือแม่น้ำสายพันธุ์เมซานา การทดสอบความสามารถในการปฏิสนธินอกร่างกายของนำเชื้อกระบือปลักไทยแช่แข็งที่เก็บนานกว่า 15 ปี การโคลนนิ่งเพื่อขยายพันธุ์ปศุสัตว์ไทย
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair