คลังข้อมูลการวิจัยการเกษตรไทย

ผู้แต่ง รองศาสตราจารย์อุไรวรรณ อินทมาโส

เผยแพร่โดย

มหาวิทยาลัยบูรพา

เผยแพร่เมื่อ 17 พฤษภาคม 2560

หน่วยงาน มหาวิทยาลัยบูรพา

คัดลอก URL

ชื่อเรื่อง:	การพัฒนาวัคซีนต่อต้านการติดเชื้อ nervous necrosis virus ในปลากะรัง ด้วยยีสต์อาร์มมิ่งเทคโนโลยี
ชื่อเรื่อง (EN):	The development of vaccines against an infection of nervous necrosis virus in Epinephelus spp. by yeast arming technology
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ:	รองศาสตราจารย์อุไรวรรณ อินทมาโส
บทคัดย่อ:	สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน) หรือ สวก. ได้สนับสนุนทุนวิจัยโครงการ “การพัฒนาวัคซีนต่อต้านการติดเชื้อ nervous necrosis virus ในปลากะรัง ด้วยยีสต์อาร์มมิ่งเทคโนโลยี” แก่ มหาวิทยาลัยบูรพา โดย รศ.ดร.อุไรวรรณ อินทมาโส เป็นหัวหน้าโครงการ มีวัตถุประสงค์เพื่อการสร้าง recombinant yeast ที่มีการแสดงออกของ epitope ของ RGNNV บนผิวเซลล์ และพิสูจน์ conformational epitope ของ recombinant protein ในการพัฒนาเป็นวัคซีนต่อต้านการติดเชื้อ nervous necrosis virusที่ก่อให้เกิดโรคอัมพาตในปลากะรังที่เป็นสัตว์เศรษฐกิจของประเทศ จากการศึกษาวิจัย พบว่า Nervous necrosis virus (RGNNV) ที่ทำให้เกิดโรค viral nervous necrosis (VNN) อาจทำให้ลูกปลามีโอกาสตายได้เกือบถึง 100% ปัจจุบันยังไม่มีการรักษา และมาตรการการควบคุมต่างๆ ที่มีประสิทธิภาพ ดังนั้นการผลิต NNV vaccine จึงอาจเป็นทางเลือกหนึ่งในการป้องกันการติดเชื้อ NNV โครงการวิจัยนี้มีจุดมุ่งหมายในการสร้าง recombinant yeast ด้วยเทคนิค yeast arming technology โดยการ RNA2 epitope ของเชื้อ NNV นำเสนอไว้บนผิวเซลล์ของยีสต์ Pichia pastoris โดยมี AGa1 โปรตีนของ S cerevisiae ยึดเกาะไว้ ลูกปลาที่มีอาการว่ายน้ำผิดปกติ ถูกนำมาพิสูจน์การติดเชื้อด้วยปฏิกิริยา RT-PCR โดยใช้คู่ของ primer ที่จับจำเพาะที่ coat protein RNA2 ของ NNV และ ยืนยันผลด้วยวิธี DNA sequencing ชิ้นส่วนของ AGa1 ที่เชื่อมต่อกับNNVRNA2 มีขนาด ประมาณ 2,100 bp ถูกใส่ใน pPIC9K vector กลายเป็น pPIC9K-AGa1-NNVRNA2 recombinant plasmid นำ linealized plasmid เข้าไปใน P. pastoris GS115 (mut+His-) ด้วยวิธี electroporation แล้วคัดเลือก yeast transformants ที่มี phenotype MutsHis+ และดื้อต่อยา geniticin ทดสอบการ integration ของยีนเป้าหมายภายในโครโมโซมด้วยปฏิกิริยา PCR นำ recombinant yeast มาเพาะเลี้ยงใน buffered-methanol complex medium (BMMY) ที่เหนี่ยวนำด้วย 0.5% methanol เป็นเวลา 6 วัน การแสดงออกของโปรตีนเป้าหมายที่ทดสอบด้วยวิธี dot blot และยืนยันผลด้วยวิธี western blot ด้วย polyclonal antibody ที่จำเพาะต่อ NNV ใน crude extract พบโปรตีนเป้าหมายมีน้ำหนักพอๆ กับโปรตีนที่สกัดจากปลาที่ติดเชื้อ การทดสอบด้วยวิธี immunofluorescense labeling สามารถยืนยันได้ว่า RNA2NNV เป็น conformational epitope ที่แสดงบนผิวของ recombinant yeast จริง และน่าสามารถนำ recombinant yeast ที่สร้างได้นี้มาพัฒนาเป็น oral vaccine เพื่อป้องกันการติดเชื้อ RGNNV ในลูกปลาได้ ประโยชน์ที่จะได้รับของโครงการนี้คือ ลดการนำเข้าวัคซีนจากต่างประเทศที่มีราคาแพง ลดต้นทุนในการเพาะเลี้ยงปลากะรัง เกษตรกรผู้เพาะเลี้ยงปลากะรังมีรายได้เพิ่มขึ้นจาการขายภายในประเทศและส่งออก
บทคัดย่อ:	ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN):	th
เอกสารแนบ:	https://epms.arda.or.th/src/Research/OldSummaryExSummary.aspx?ID=7417
เผยแพร่โดย:	มหาวิทยาลัยบูรพา
คำสำคัญ:	การแสดงออกของโปรตีน
คำสำคัญ (EN):	Protein expression
ข้อมูลทรัพยสินทางปัญญา
ประเภทIP	อนุสิทธิบัตร
รายชื่อสิ่งประดิษฐ์	รีคอมบิวแนนท์ยีสต์ที่มีการสร้างโปรตีนของเชื้อก่อโรคบนผิวเซลล์ และกรรมวิธีการผลิต
เลขที่คำขอ	1903000358
วันที่ยื่นคำขอ	2019-02-07 12:00:00
เลขที่ประกาศ
วันที่จดทะเบียน
เลขที่จดทะเบียน
วันที่ประกาศ
สถานะปัจจุบัน	เชิงพาณิชย์