สืบค้นงานวิจัย
การแยก Human growth Hormone ที่ผลิตจากยีสต์ Pichia pastoris ให้บริสุทธิ์โดยกระบวนการทางโครมาโทกราฟี
ธีรพัชร อ่อนดี - มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
ชื่อเรื่อง: การแยก Human growth Hormone ที่ผลิตจากยีสต์ Pichia pastoris ให้บริสุทธิ์โดยกระบวนการทางโครมาโทกราฟี
ชื่อเรื่อง (EN): Development of a Chromatographic Process for Purification of Recombinant Human Growth Hormone Produced from Pichia pastoris
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: ธีรพัชร อ่อนดี
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Teerapat Ondee
บทคัดย่อ: งานวิจัยนี้ได้นำเสนอกระบวนการแยก human growth hormone (hGH) ที่ผลิตจาก Pichia pastoris ให้บริสุทธิ์โดยเทคนิคทางโครมาโทกราฟี hGH ที่นำมาศึกษานั้นได้มาจากการเลี้ยง Pichia pastoris ในแบบที่เรียกว่า high cell density และผ่านการเหวี่ยงแยก (centrifuge) เพื่อแยกกากเซลล์ออกไป น้ำหมักที่ได้จะมี hGH ผสมอยู่ซึ่งจะนำมาแยกด้วยเทคนิคทางโครมาโทกราฟีต่อไป การแยกโปรตีนด้วยเทคนิคทางโครมาโทกราฟีแบ่งได้ 3 ขั้นตอน คือ 1) Capture 2) Intermediate purification และ 3) Polishing โดยในงานวิจัยนี้ใช้เทคนิคที่เป็น Anion exchange Chromatography ทั้ง 3 ขั้นตอน แต่ใช้ตัวแลกเปลี่ยนไออน (ion exchange) ต่างกัน คือ 1) Capture ใช้ Q Sepharose Fast Flow 2) Intermediate purification ใช้ DEAE Sepharose Fast Flow และ 3) Polishing ใช้ SOURE30Q เนื่องจากทั้ง 3 ขั้นตอนเป็น Anion exchange Chromatography ตัวอย่าง hGH ก่อนเข้าคอลัมน์ต้องผ่านกระบวน การ Buffer exchange หรือ Desalt เพื่อเตรียม hGH ให้อยุ่ในสภาวะที่เหมาะสมสำหรับการแยกด้วยเทคนิคโครมาโทกราฟีสำหรับขั้นตอนนั้นๆ สภาวะที่ เหมาะสมจะได้จากการทำ columm screening, scouting flow rate, scounting pH buffer,scouting slope gradient และหา dynamics capacity ของตัวแลก เปลี่ยนไอออน (ion exchange) นอกจากนี้ในงานวิจัยนี้ได้ทำการขยายขนาด (scale up) ของคอลัมน์ที่ใช้ในการแยก hGH โดยนำ linear flow rate ที่ได้จาก การทำ scouting flow rate ในคอลัมน์เล็กมาใช้จากการศึกษาพบว่าต้องใช้การแยก 4 ขั้นตอนกอบด้วย 1) ใช้ Q Sepharose Fast Flow 2) ใช้ DEAE Sepharose Fast Flow และ 3) ใช้ SOURE30Q และ 4)ใช้ SOURE30Q (เลือก fraction ที่มี hGH มาทำซ้ำ) จึงจะได้ความบริสุทธิ์ (purity) มากกว่า 99 เปอร์เซนต์ (วัดโดย SDS-PAGE silver stain และ ค่าการแยกกลับของโปรตีนทั้งหมด (overall total protein recovery) 52.36 เปอร์เซ็นต์ (วัดโดยวิธี Bradford) ส่วนขยายขนาด (scale up) คอลัมน์พบว่าสามารถใช้ค่า linear flow rate จากคอลัมน์เล็กมาใช้หาค่า flow rate สำหรับคอล้มน์ใหญ่ได้เป็นอย่างดี นอกจากนี้ได้มีการนำตัวอย่าง ที่แยกได้ไปวัดค่า host cell protein (HCP) โดยมาตราฐานของ host cell protein (HCP) ของ Pichia pastoris กำหนดไว้ไม่เกิน 10 ppm และค่า host cell protein (HCP) ของ hGH ได้จากงานวิจัยนี้มีค่าเฉลี่ย 0.0272 ppm ซึ่งต่ำกว่ามาตราฐาน
บทคัดย่อ (EN): Q Sepharose Fast Flow, DEAE Sepharose Fast Flow and SOURCE30Q were used to purify the human growth hormone. For each step of the purification process, a buffer exchange process or a desalting process was used to prepare the human growth hormone. Scouting procedures for column screening, buffer flow rate, pH buffer, and buffer gradient were carried out to obtain the chromatographic process condition. The dynamic capacities of ion exchangers were also obtained. Moreover, a scale up of the chromatographic process by using a linear flow rate from the scouting flow rate in the small column was studied. The results indicated that four chromatographic methods can be used to purify the human growth hormone contained in the supernatant. The four methods consist of 1) Q Sepharose Fast Flow 2) DEAE Sepharose Fast Flow 3) SOURCE30Q and 4) SOURCE30Q (hGH fraction reloaded). The high purity of the human growth hormone was obtained at more than 99 percent detected by the silver stain SDS-PAGE and the overall total protein recovery was 52.36 percent detected by the Bradford method. The host cell protein of Pichia pas/oris in the product was measured by HCP kit. The value of the host cell protein was 0.027 ppm which was lower than the regulation ?1 Oppm).
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://dcms.thailis.or.th/dcms/dccheck.php?Int_code=54&RecId=10536&obj_id=31734
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
คำสำคัญ (EN): Purification
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
รายละเอียด: งานวิจัยนี้ได้นำเสนอกระบวนการแยก human growth hormone (hGH) ที่ผลิตจาก Pichia pastoris ให้บริสุทธิ์โดยเทคนิคทางโครมาโทกราฟี hGH ที่นำมาศึกษานั้นได้มาจากการเลี้ยง Pichia pastoris ในแบบที่เรียกว่า high cell density และผ่านการเหวี่ยงแยก (centrifuge) เพื่อแยกกากเซลล์ออกไป น้ำหมักที่ได้จะมี hGH ผสมอยู่ซึ่งจะนำมาแยกด้วยเทคนิคทางโครมาโทกราฟีต่อไป การแยกโปรตีนด้วยเทคนิคทางโครมาโทกราฟีแบ่งได้ 3 ขั้นตอน คือ 1) Capture 2) Intermediate purification และ 3) Polishing โดยในงานวิจัยนี้ใช้เทคนิคที่เป็น Anion exchange Chromatography ทั้ง 3 ขั้นตอน แต่ใช้ตัวแลกเปลี่ยนไออน (ion exchange) ต่างกัน คือ 1) Capture ใช้ Q Sepharose Fast Flow 2) Intermediate purification ใช้ DEAE Sepharose Fast Flow และ 3) Polishing ใช้ SOURE30Q เนื่องจากทั้ง 3 ขั้นตอนเป็น Anion exchange Chromatography ตัวอย่าง hGH ก่อนเข้าคอลัมน์ต้องผ่านกระบวน การ Buffer exchange หรือ Desalt เพื่อเตรียม hGH ให้อยุ่ในสภาวะที่เหมาะสมสำหรับการแยกด้วยเทคนิคโครมาโทกราฟีสำหรับขั้นตอนนั้นๆ สภาวะที่ เหมาะสมจะได้จากการทำ columm screening, scouting flow rate, scounting pH buffer,scouting slope gradient และหา dynamics capacity ของตัวแลก เปลี่ยนไอออน (ion exchange) นอกจากนี้ในงานวิจัยนี้ได้ทำการขยายขนาด (scale up) ของคอลัมน์ที่ใช้ในการแยก hGH โดยนำ linear flow rate ที่ได้จาก การทำ scouting flow rate ในคอลัมน์เล็กมาใช้จากการศึกษาพบว่าต้องใช้การแยก 4 ขั้นตอนกอบด้วย 1) ใช้ Q Sepharose Fast Flow 2) ใช้ DEAE Sepharose Fast Flow และ 3) ใช้ SOURE30Q และ 4)ใช้ SOURE30Q (เลือก fraction ที่มี hGH มาทำซ้ำ) จึงจะได้ความบริสุทธิ์ (purity) มากกว่า 99 เปอร์เซนต์ (วัดโดย SDS-PAGE silver stain และ ค่าการแยกกลับของโปรตีนทั้งหมด (overall total protein recovery) 52.36 เปอร์เซ็นต์ (วัดโดยวิธี Bradford) ส่วนขยายขนาด (scale up) คอลัมน์พบว่าสามารถใช้ค่า linear flow rate จากคอลัมน์เล็กมาใช้หาค่า flow rate สำหรับคอล้มน์ใหญ่ได้เป็นอย่างดี นอกจากนี้ได้มีการนำตัวอย่าง ที่แยกได้ไปวัดค่า host cell protein (HCP) โดยมาตราฐานของ host cell protein (HCP) ของ Pichia pastoris กำหนดไว้ไม่เกิน 10 ppm และค่า host cell protein (HCP) ของ hGH ได้จากงานวิจัยนี้มีค่าเฉลี่ย 0.0272 ppm ซึ่งต่ำกว่ามาตราฐาน
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

ธีรพัชร อ่อนดี. "การแยก Human growth Hormone ที่ผลิตจากยีสต์ Pichia pastoris ให้บริสุทธิ์โดยกระบวนการทางโครมาโทกราฟีDevelopment of a Chromatographic Process for Purification of Recombinant Human Growth Hormone Produced from Pichia pastoris". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี. 2550

ธีรพัชร อ่อนดี. "การแยก Human growth Hormone ที่ผลิตจากยีสต์ Pichia pastoris ให้บริสุทธิ์โดยกระบวนการทางโครมาโทกราฟีDevelopment of a Chromatographic Process for Purification of Recombinant Human Growth Hormone Produced from Pichia pastoris". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี. 2550. Print.



TARR Wordcloud:
การแยก Human growth Hormone ที่ผลิตจากยีสต์ Pichia pastoris ให้บริสุทธิ์โดยกระบวนการทางโครมาโทกราฟี
ธีรพัชร อ่อนดี
มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
2550
การเปรียบเทียบต้นทุนจากการผลิตกระดาษสาสำหรับกระบวนการผลิตทั่วไปกับกระบวนการที่เป็นมิตรกับสิ่งแวดล้อมของคลัสเตอร์หัตถกรรมต้นเปา อำเภอสันกำแพง จังหวัดเชียงใหม่ ผลิตภาพของปัจจัยการผลิตโดยรวมของการผลิตอ้อยเพื่อใช้ผลิตเอทานอลใน อำเภอแม่สอด จังหวัดตาก การลดค่าซีโอดีในน้ำเสียจากกระบวนการผลิตผลไม้กระป๋องโดยใช้ยีสต์ การศึกษากระบวนการผลิตและประสิทธิภาพปุ๋ยน้ำหมักต่อ การผลิตข้าวของเกษตรกรในอำเภอบางปะกง จังหวัดฉะเชิงเทรา การศึกษากระบวนการผลิตแป้งขนมตาลสำเร็จรูป. การลดเวลานำในการผลิตและงานระหว่างผลิตในการผลิตตู้นิรภัยโดยใช้เทคนิคการผลิตแบบลีน การจัดการผลิตแบบกะและวิเคราะห์ทางเศรษฐศาสตร์ของกระบวนการผลิตไบโอดีเซลขนาด 200,000 ลิตรต่อวัน การผลิตและการทำให้ starch-binding amylase จาก alkaliphilic Bacillus sp. SS-8 บริสุทธิ์และศึกษาสมบัติต่าง ๆ ของเอนไซม์บริสุทธิ์ การผลิตและศึกษาสมบัติของบีตา-กาแล็กโทซิเดสบริสุทธิ์จากยีสต์ทนร้อน Kluyveromyces sp. CK8 การวางแผนการผลิตเพื่อเพิ่มผลผลิตของโรงงานผลิตอาหารเสริม
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair