สืบค้นงานวิจัย
การใช้ปฏิกิริยา LAMP ในการเพิ่มความแม่นยำการคัดเพศเอมบริโอโคนม
สุณีรัตน์ เอี่ยมละมัย - มหาวิทยาลัยขอนแก่น
ชื่อเรื่อง: การใช้ปฏิกิริยา LAMP ในการเพิ่มความแม่นยำการคัดเพศเอมบริโอโคนม
ชื่อเรื่อง (EN): Applications of LAMP to increase accuracy of embryo sexing in dairy cows
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: สุณีรัตน์ เอี่ยมละมัย
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Suneerat Eamlamai
หน่วยงานสังกัดผู้แต่ง:
  1. มหาวิทยาลัยขอนแก่น
บทคัดย่อ: การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อเพิ่มความเม่นยำโดยประยุกต์ใช้ปฏิกิริยา LAMP ในการคัดเพศตัวอ่อนโคนม เก็บตัวอย่างรังไข่โคนมจากโรงฆ่าสัตว์ นำมาเจาะดูดโอโอไซต์จากฟอลลิเคิล โอโอไซต์ที่ได้จากรังไข่ที่มี CL และไม่มี CL ประเมินอัตราการเก็บโอโอไซต์ นำโอโอไซต์มาเพาะเลี้ยงในห้องปฏิบัติการด้วย TCM-199 ที่อุณหภูมิ 38.5 องศาเซลเซียส ก๊าซคาร์บอนไดออกไซต์ 5 เปอร์เซ็นต์ และความชื้น 99 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 24 ชั่วโมงจนกระทั่งได้โอโอไซต์ที่เจริญพร้อมปฏิสนธิ ปฏิสนธิโดยใช้น้ำยาเพาะเลี้ยง 2 ชนิด คือ TALP-IVF-SOF และ SAGE mediaT " นำไปเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 38.5 องศาเซลเซียส ก๊าซคาร์บอนไดออกไซต์ 5 เปอร์เซ็นต์ และ ความชื้น 99 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ประเมินอัตราการปฏิสนธิ จากนั้นเพาะเลี้ยงเอ็มบริโอต่อไปอีกจนถึงระยะมอรูล่า ทำการแช่แข็งตัวอ่อนและเก็บตัวอย่างตัวอ่อนที่อุณหภูมิ -196 องศาเซลเซียส เพื่อรอการคัดเพศ สุ่มตัวอย่างเอ็มบริโอโค(n=50) เพื่อสกัด DNA และเพิ่มจำนวน DNA โดยวิธี PCR เก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส แล้วนำตัวอย่างดีเอ็นเอ ไปคัดเพศโดยวิธี LAMP ซึ่งใช้ male-specific primers และ male-female common primers แบ่งเป็น 3 ทรีทเมนต์ ได้แก่ กลุ่มควบคุม LAMP, กลุ่ม LAMP เสริมด้วย ethidium bromnide (EB) ที่ความเข้มข้น 1 มิลลิโมล และ กลุ่ม LAMP เสริมด้วย CuSO4 (CS) ที่ความเข้มข้น 1 โมล การเติมEB จะทำให้เกิดการเปลี่ยนสีโดยเพศผู้จะเป็นสีชมพูอมสัม หากเป็นเพศเมียจะเป็นสีส้ม และการเติม CS จะทำให้มีลักษณะใสในเพศผู้ หากเป็นเพศเมียจะมีลักษณะขุ่น ผลการศึกษาพบว่าอัตราการเก็บโอโอไซต์ ในโคนมจากรังไข่ที่มี CL และไม่มี CL ไม่มีความแตกต่งกันทางสถิติ (P>0.05) น้ำยาเพาะเลี้ยง SAGE media"" ส่งผลให้อัตราการปฏิสนธิภายนอกร่างกายโคดีกว่าน้ำยาเพาะเลี้ยง TALP-IVF-SOF (P<0.05) น้ำยาเพาะเลี้ยงทั้ง 2 ชนิด ไม่ส่งผลต่ออัตราการปฏิสนธิ เปอร์เซ็นต์การคัดเพศในโคนมโดยการเสริม EB ให้ผลดีกว่า การเสริมด้วย CS และกลุ่มควบคุม (P<0.01) (100.0 , 79.3 และ 57.2 เปอร์เซ็นต์) เปอร์เซ็นต์ความแม่นยำในโคโดยการเสริม EB สูงที่สุด รองลงมา คือ การเสริม CS และกลุ่มควบคุม (P>0.05) (42.5, 35.0 และ 22.5 เปอร์เซ็นต์) ดังนั้นสรุปได้ว่า 1) การประยุกต์ใช้ปฏิกิริยา LAMP โดยการเสริม EB ที่ความเข้มข้น 1 มิลลิโมล สามารถเพิ่มความแม่นยำในการคัดเพศตัวอ่อนโคนมได้อย่างมีประสิทธิภาพ 2) การเสริม CS ที่ความเข้มข้น 1 โมล ไม่สามารถเพิ่มความแม่นยำในการคัดเพศตัวอ่อนโคนมได้
บทคัดย่อ (EN): The study was conducted to determine application of Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) reaction to increase accuracy of sexing dairy cows. Ovaries were collected at a local slaughterhouse. Aspirated oocytes from follicle were classified into 2 groups (ovary with CL and without CL). Oocytes were cultured in TCM-199 at 38.5 ?C, 5% CO2 and 99% relative humidity for 24 h. Matured oocytes were placed in fertilization media (TALP-IVF-SOF and SAGE mediaTM). Oocytes were co-incubated with spermatozoa at 38.5 ?C, 5% CO2 and 99% relative humidity for 24 h. Fertilization rates were evaluated and then the embryos were subjected for in vitro culture until morula stage. Then, embryo samples were freezed and stored at -196 ?C. Frozen embryo samples were randomly extracted for total cellular DNA and amplified by PCR method. The amplified DNA samples were stored at -20?C before sexing was determined by modification of LAMP reaction (control), LAMP with the addition of 1mM ethidium bromine (EB), and LAMP with the addition of 1 M CuSO4 (CS). Salmon-pink and orange wine colors were observed in male and female embryos when EB was added. Clear and turbid colors were shown in male and female embryos when CS was applied following the LAMP reaction. The result found that the recovery rates of oocytes in dairy cow from ovaries with CL and without CL were not significantly different. Fertilization rate was greater (P<0.05) embryos cultured with SAGE media compared to TALP-IVF-SOF media. Percentage of sex detection in embryos was greater (P<0.01) in EB supplement than CS and control groups (100.0, 74.3 and 57.2%). Percentages of accuracy of sexing embryo in dairy cow supplemented with EB were greatest, followed by the LAMP+CS and the control respectively. (42.5, 35.0 and 22.5%). Based on this study, the results could be concluded as follows. 1) The LAMP reaction application by using 1 mM EB effectively increased the accuracy of sexing dairy cow embryos. 2) Supplemented with 1 M CS did not increase accuracy of sexing embryos in dairy cow
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยขอนแก่น
คำสำคัญ: โคนม
คำสำคัญ (EN): dairy cows
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

สุณีรัตน์ เอี่ยมละมัย. "การใช้ปฏิกิริยา LAMP ในการเพิ่มความแม่นยำการคัดเพศเอมบริโอโคนมApplications of LAMP to increase accuracy of embryo sexing in dairy cows". มหาวิทยาลัยขอนแก่น. 2557

สุณีรัตน์ เอี่ยมละมัย. "การใช้ปฏิกิริยา LAMP ในการเพิ่มความแม่นยำการคัดเพศเอมบริโอโคนมApplications of LAMP to increase accuracy of embryo sexing in dairy cows". มหาวิทยาลัยขอนแก่น. 2557. Print.



TARR Wordcloud:
การใช้ปฏิกิริยา LAMP ในการเพิ่มความแม่นยำการคัดเพศเอมบริโอโคนม
สุณีรัตน์ เอี่ยมละมัย
มหาวิทยาลัยขอนแก่น
2557
การผสมเทียมโคนมด้วยน้ำเชื้อโคนมแช่แข็งที่ผ่านกระบวนการคัดเพศเมียด้วยปฏิกิริยาไซโตทอกซิคซิตี้ ผลของการใช้หญ้าหมักเป็นอาหารหยาบหลักที่มีผลต่อการเจริญโตบโตของโคนมเพศผู้ โครงการการพัฒนาเทคโนโลยีผลิตน้ำเชื้อโคนมแยกเพศเพื่อใช้ในการผสมเทียม โครงการการพัฒนาเทคโนโลยีผลิตน้ำเชื้อโคนมแยกเพศเพื่อใช้ในการผสมเทียม การเพิ่มอัตราส่วนลูกโคนมเพศเมียและการแก้ไขปัญหาการผสม ไม่ติดในโคนมของสมาชิกสหกรณ์ โคนมภาคตะวันออกเฉียงเหนือ การใช้เทคโนโลยีในการจัดระดับโภชนะในอาหารโคนมเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการผลิต การเพิ่มอัตราส่วนลูกโคนมเพศเมียโดยใช้เทคนิคการคัดแยกเพศน้ำเชื้อร่วมกับการผสมเทียมแบบกำหนดเวลา การใช้ประโยชน์ของวัสดุเหลือใช้จากการเพาะเลี้ยงแมลงวันผลไม้ในอาหารโคนม การตรวจหา Quantitative Trait Loci ที่มีอิทธิพลต่อความสมบูรณ์พันธุ์ในโคนม ผลของอาหารที่ใช้ขุนต่อสมรรถภาพการผลิตและคุณภาพซากของแม่โคนมคัดทิ้ง
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair