สืบค้นงานวิจัย
การติดตามการเปลี่ยนแปลงของกล้าเชื้อแบคทีเรียโปรไบโอติก Lactobacillus plantarum ในระหว่างการหมักกุ้งส้มโดยการติดยีน Green Fluorescent Protein (gfp)
ศุภศิลป์ มณีรัตน์ - มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
ชื่อเรื่อง: การติดตามการเปลี่ยนแปลงของกล้าเชื้อแบคทีเรียโปรไบโอติก Lactobacillus plantarum ในระหว่างการหมักกุ้งส้มโดยการติดยีน Green Fluorescent Protein (gfp)
ชื่อเรื่อง (EN): Monitoring of probiotic bacteria starter culture Lactobacillus plantarum during shrimp fermentation (Kung-Som) using Green Fluorescent Protein (gfp) gene
บทคัดย่อ: กุ้งส้ม เป็นอาหารหมักชนิดหนึ่งที่นิยมบริโภคกันมากในภาคใต้ของประเทศไทย งานวิจัยครั้งนี้ศึกษาความหลากหลายของแบคทีเรียในผลิตภัณฑ์กุ้งส้ม โดยสุ่มเก็บตัวอย่างกุ้งส้มจากตลาดในจังหวัดสงขลา จำนวน 10 ตัวอย่าง นำมาวิเคราะห์โดยใช้เทคนิค PCR-DGGE ร่วมกับการใช้ primer 2 คู่ คือ ตำแหน่ง V3 ของ 16S rDNA และยีน rpoB เพื่อศึกษาประสิทธิภาพของ primer ทั้ง 2 คู่ ในการจำแนกชนิดของแบคทีเรียในกุ้งส้ม จากการตรวจวิเคราะห์พบว่า ตำแหน่ง V3 ของ 16S rDNA และยีน rpoB สามารถแยกแยะความแตกต่างระหว่างแบคทีเรียแลกติกและแบคทีเรียแกรมบวกอื่นๆในกุ้งส้มได้ และพบว่าผลิตภัณฑ์กุ้งส้มประกอบไปด้วย แบคทีเรียกลุ่มหลัก คือ แบคทีเรียกลุ่มแลกติกและกลุ่ม coagulase negative cocci เช่น Staphylococcus piscifermentans เป็นต้น กุ้งส้มประกอบไปด้วยกรดอะมิโนกลูตามิกสูง ซึ่งแบคทีเรียแลกติกสามารถใช้กรดกลูตามิกเป็นสับสเตรทในการสังเคราะห์สารกาบาได้ ดังนั้นงานวิจัยชิ้นนี้ได้ทำการแยกและคัดเลือกแบคทีเรียแลกติกที่มีความสามารถในการผลิตสารกาบาจากกุ้งส้ม พบว่า แบคทีเรียแลกติกสายพันธุ์ CS3 ผลิตสารกาบาได้สูงที่สุด เมื่อนำมาจำแนกสายพันธุ์โดยใช้เทคนิคทางชีวเคมี (การหมักน้ำตาล) และ เทคนิคทางชีวโมเลกุล (หาลำดับเบสในส่วนของ 16S rDNA) พบว่า จัดเป็นสายพันธุ์ Lactobacillus futsaii ซึ่งยังไม่มีการรายงานมาก่อนว่าสายพันธุ์นี้มีความสามารถผลิตสารกาบา นอกจากนี้ยังได้ศึกษายีนที่ควบคุมการสร้างกาบา (glutamate decarboxylase gene) โดยเทคนิค PCR พบว่า ยีนนี้มี open reading frame ขนาด 1,410 คู่เบส และสามารถถอดรหัสได้ 469 อะมิโน อีกทั้งทำนายโครงสร้างสามมิติโดยใช้โปรแกรม SWISS-MODEL จากนั้นทำการโคลนยีนเข้าสู่เวกเตอร์ pColdI และศึกษาการแสดงออกของโปรตีนในแบคทีเรีย Escherichia coli BL21 (DE3) หลังจากการทำบริสุทธิ์รีคอมบิแนนซ์โปรตีนโดยใช้ โครมาโตกราฟีแบบจำเพาะ (Ni-NTA column) และวิเคราะห์ขนาดรีคอมบิแนนซ์โปรตีนโดยวิธี SDS-PAGE พบว่า รีคอมบิแนนซ์โปรตีนมีขนาดประมาณ 53 กิโลดาลตัล ซึ่งมีค่าใกล้เคียงตามที่ทำนายกับโปรแกรม ExPASy จากผลการทดลองดังกล่าว สามารถใช้เป็นข้อมูลพื้นฐานในการประยุกต์ใช้เชื้อแบคทีเรียแลกติกสายพันธุ์ CS3 เพื่อทดแทนการใช้สารกาบาสังเคราะห์ในอุตสาหกรรมอาหารได้
บทคัดย่อ (EN): Kung-Som is one of several traditional Thai fermented shrimp products, especially popular in the southern part of Thailand. This is the first report to reveal the bacterial communities in the finished product of Kung-Som. Ten Kung-Som samples were evaluated using the polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) methodology combined with appropriated primers to study the dynamics of the bacterial population. Two primers sets (V3; 341f(GC)-518r and rpoB; rpoB1698f(GC)-rpoB2014r primers) were considered as a possible tool for study the communities of bacteria. PCR-DGGE analysis of both the V3-region and rpoB amplicon was successfully applied to discriminate between lactic acid bacteria (LAB) and other Gram positive strains in the bacterial communities of Kung-Som products. These preliminary results concluded that the main microbiology of finished product of Kung-Som was LAB and coagulase negative cocci (CNC). Kung-Som presents a high glutamic acid which is a major substrate for biosynthesis of natural ?-aminobutyric acid (GABA) by LAB. The GABA-producing LAB from Kung-Som products were isolated, screened and identified. The strain CS3 showed the highest GABA-producing ability among the screened strains. Based on an API-CHL50 fermentation and phylogenetic trees of 16S rDNA sequence, the strain CS3 belonged to genus Lactobacillus futsaii. Newly L. futsaii CS3 with high GABA-synthesizing capacity was first discovered in the present report. The open reading frame (ORF) of glutamate decarboxylase (gad) gene was cloned by PCR. It was 1,410 bp encoding a polypeptide of 469 amino acids. In addition, the non-crystallization structure of L. futsaii CS3 glutamate decarboxylase enzyme (GAD) was also predicted by SWISS-MODEL server. The entire ORF sequence of gad gene was cloned into pColdI expression vector and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3). The gad gene with His6-Tag was expressed. The recombinant GAD was purified using a Ni-NTA column. SDS-PAGE analysis revealed that it had a molecular weight of approximately 53 kDa, which corresponded to the predicted size of the deduced protein (53.64 kDa). The results of these findings offer a way of replacing chemical GABA by natural GABA in fermented foods or functional foods. Moreover, it preliminary provides useful details for development of the molecular mechanism regulating GABA metabolism in valuable LAB.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
คำสำคัญ: กุ้งส้ม
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

ศุภศิลป์ มณีรัตน์. "การติดตามการเปลี่ยนแปลงของกล้าเชื้อแบคทีเรียโปรไบโอติก Lactobacillus plantarum ในระหว่างการหมักกุ้งส้มโดยการติดยีน Green Fluorescent Protein (gfp)Monitoring of probiotic bacteria starter culture Lactobacillus plantarum during shrimp fermentation (Kung-Som) using Green Fluorescent Protein (gfp) gene". มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์. 2557

ศุภศิลป์ มณีรัตน์. "การติดตามการเปลี่ยนแปลงของกล้าเชื้อแบคทีเรียโปรไบโอติก Lactobacillus plantarum ในระหว่างการหมักกุ้งส้มโดยการติดยีน Green Fluorescent Protein (gfp)Monitoring of probiotic bacteria starter culture Lactobacillus plantarum during shrimp fermentation (Kung-Som) using Green Fluorescent Protein (gfp) gene". มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์. 2557. Print.



TARR Wordcloud:
การติดตามการเปลี่ยนแปลงของกล้าเชื้อแบคทีเรียโปรไบโอติก Lactobacillus plantarum ในระหว่างการหมักกุ้งส้มโดยการติดยีน Green Fluorescent Protein (gfp)
ศุภศิลป์ มณีรัตน์
มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
30 กันยายน 2557
ผลิตภัณฑ์เมล่อนอบกรอบเสริมเชื้อโปรไบโอติก การเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของแร่ธาตุบางชนิดในพลาสมาของกุ้งขาววัยรุ่น (Litopenaeus vannamei) ในสภาวะช็อก การพัฒนาผลิตภัณฑ์ต้นแบบของโปรไบโอติกแบคทีเรียและการตรวจสอบประสิทธิภาพในการลดการท้องเสียในลูกสุกร การพัฒนาผลิตภัณฑ์ต้นแบบของโปรไบโอติกแบคทีเรียและการตรวจสอบประสิทธิภาพในการลดการท้องเสียในลูกสุกร พรีไบโอติก และโปรไบโอติก การคัดเลือกแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์กลูตามิเนสจากกุ้งส้มและการผลิตกุ้งส้มโดยใช้กล้าเชื้อที่คัดเลือกได้ การคัดหาโปรไบโอติกแบคทีเรียและจัดจำแนกสายพันธุ์โดยเทคนิค 16s DNA ของแลคติกแอซิดแบคทีเรียจากผักดองพื้นบ้านของไทย การคัดแยกเชื้อจุลินทรีย์โปรไบโอติกจากมูลไก่ประดู่หางดำ การพัฒนาน้ำหมักชีวภาพจากสมุนไพรด้วยเชื้อจุลินทรีย์กลุ่มโปรไบโอติคในชุมชนสะลวง อำเภอแม่ริม จังหวัดเชียงใหม่ การเสริมแบคทีเรียกรดแลคติกต่อลักษณะทางกายภาพ องค์ประกอบทางเคมี และผลผลิตจากกระบวนการหมักของทางใบปาล์มน้ำมันหมัก
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair