สืบค้นงานวิจัย
การค้นหาตำแหน่ง epitope บน non-structural protein ของเชื้อ Watermelon silver mottle virus ที่ถูกจับอย่างจำเพาะเจาะจงโดยโมโนโคลนอลแอนติบอดี
นุชนาถ วารินทร์ - สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
ชื่อเรื่อง: การค้นหาตำแหน่ง epitope บน non-structural protein ของเชื้อ Watermelon silver mottle virus ที่ถูกจับอย่างจำเพาะเจาะจงโดยโมโนโคลนอลแอนติบอดี
ชื่อเรื่อง (EN): Epitope mapping on non-structural protein of Watermelon silver mottle virus specific to monoclonal antibody
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: นุชนาถ วารินทร์
หน่วยงานสังกัดผู้แต่ง:
  1. สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
บทคัดย่อ: ทอสโพไวรัส (Tospovirus) เป็นไวรัสสาเหตุโรคพืชที่ก่อให้เกิดความเสียหายแก่พืชเศรษฐกิจหลายชนิดทั่วโลก ในประเทศไทยมีรายงานการพบเชื้อทอสโพไวรัส 4 ชนิด ได้แก่ Capsicum chlorosis virus (CaCV), Watermelon silver mottle virus (WSMoV), Melon yellow spot virus (MYSV) และ Tomato necrotic ringspot virus (TNRV) ซึ่งไวรัสในกลุ่มนี้สร้างความเสียหายให้กับพืชเศรษฐกิจหลายชนิดเช่น พืชตระกูลแตง ถั่วลิสง พริก และมะเขือเทศ การตรวจจำแนกเชื้อทอสโพไวรัสให้ได้ถึงระดับสปีชี่ส์นับว่ามีความสำคัญอย่างยิ่งสำหรับการศึกษาด้านระบาดวิทยาของโรค เพื่อการจัดการควบคุมโรคที่มีประสิทธิภาพและคัดเลือกพันธุ์พืชต้านทานโรค การตรวจจำแนกไวรัสพืชด้วยเทคนิคทางซีรั่มวิทยาเป็นเทคนิคที่นิยมใช้อย่างกว้างขวางและสามารถจำแนกไวรัสได้ถึงระดับ strain หรือ serotypes ทีมงานวิจัยได้พัฒนาโมโนโคลนอลแอนติบอดี (MAb) ต่อ non-structural protein (NSs protein) ของเชื้อ WSMoV และได้ MAb ที่สามารถทำปฏิกิริยาได้อย่างจำเพาะเจาะจงกับเชื้อ WSMoV การยื่นจดสิทธิบัตรและตีพิมพ์ผลงานวิจัยดังกล่าว จำเป็นต้องทราบคุณลักษณะที่บ่งบอกอัตลักษณ์ของ MAb นั้นๆ ได้แก่ ข้อมูลตำแหน่ง epitope บนแอนติเจนที่ถูกจับโดยแอนติบอดี การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อค้นหาตำแหน่ง epitope บน NSs protein ของเชื้อ WSMoV ที่ถูกจับอย่างจำเพาะเจาะจงโดย MAb 3 ชนิด คือ MAb 18C9, MAb 18D11 และ MAb 8G7 โดยเบื้องต้นศึกษาการทำปฏิกิริยากันของ MAb 18C9, MAb 18D11 และ MAb8G7 กับ NSs protein ของ WSMoV โดยแบ่งศึกษา NSs protein ออกเป็น 6 ส่วน คือ ส่วน N-terminal region (WNSsN), middle region (WNSsM), C-terminal region (WNSsC), N-terminal-middle region (WNSsNM), middle-C-terminal region (WNSsMC) และ N-terminal ร่วมกับ C-terminal region (WNSsNC) โดยสังเคราะห์ DNA fragments ที่ควบคุมการสังเคราะห์ NSs protein 6 ส่วนดังกล่าวด้วยเทคนิค PCR เชื่อมต่อ DNA fragments เข้ากับ expression vector pQE80-L และเคลื่อนย้ายเข้าสู่เซลล์ E. coli DH5&alpha; ศึกษาการแสดงออกของยีนด้วยระบบการสังเคราะห์โปรตีนในเซลล์ E. coli ทำโปรตีนให้บริสุทธิ์ ตรวจสอบโปรตีนด้วยวิธี SDS-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) และตรวจสอบการทำปฏิกิริยากับ MAb 3 ชนิด ด้วยวิธี western blot analysis หรือ PTA- ELISA เมื่อทราบส่วนของโปรตีนที่ทำปฏิกิริยากับ MAb จึงค้นหา epitope บน NSs protein ส่วนนั้นๆ ให้ละเอียดยิ่งขึ้นด้วยวิธี bacterial expressed fusion protein โดยสังเคราะห์ DNA fragment ที่มีขนาดเล็กลงจาก DNA fragment ส่วนที่ทำปฏิกิริยากับ MAb ด้วยเทคนิค PCR และนำมาเชื่อมต่อเข้ากับพลาสมิด pQE80-L ที่มียีน GFP เชื่อมต่ออยู่ (pQE80-L-GFP) เพื่อสังเคราะห์ NSs protein ร่วมกับ GFP (fusion protein NSs-GFP) ศึกษาการแสดงออกของยีน NSs ร่วมกับ GFP และทำโปรตีนให้บริสุทธิ์ ตรวจสอบ fusion protein NSs-GFP ด้วยเทคนิค SDS-PAGE และตรวจสอบการทำปฏิกิริยากับ MAb 3 ชนิด และ RAs-GFP ด้วยวิธี western blot analysis หรือ PTA-ELISA วิเคราะห์หา epitope ที่สามารถทำปฏิกิริยากับ MAb ได้อย่างจำเพาะเจาะจง และยืนยันผลของ epitope ที่วิเคราะห์ได้โดยการสังเคราะห์ synthetic peptide จาก amino acid sequence ของ epitope และตรวจสอบความจำเพาะเจาะจงในการจับกันระหว่าง synthetic peptide กับ MAbs ทั้ง 3 ชนิด</p>
บทคัดย่อ (EN): Tospoviruses are plant viruses that cause severe damage to several economic crops worldwide. Four species of tospoviruses, Capsicum chlorosis virus (CaCV), Watermelon silver mottle virus (WSMoV), Melon yellow spot virus (MYSV) and Tomato necrotic ringspot virus (TNRV) were reported In Thailand. They cause severe damage to cucurbits, peanuts, peppers and tomatoes. The species of plant virus diagnosis are important for the epidemiology study and plant breeding for virus resistance. Serological technique is one of the most widely used for plant virus detection and identification of viral strains or serotypes. Monoclonal antibody (MAb) specific to WSMoV, produced from non-structural (NSs) protein of WSMoV was obtained from our research. Patent and publication of MAb need to know the features that indicate the MAb such as epitope of MAb. In this study, epitope of three MAbs specific to WSMoV such as MAb 18C9, MAb 18D11 and MAb 8G7 will be mapped on the NSs protein. The DNA fragments of WSMoV-NSs corresponding to N-terminal region (WNSsN), middle region (WNSsM), C-terminal region (WNSsC) ), N-terminal-middle region (WNSsNM), middle-C-terminal region (WNSsMC) and N-terminal with C-terminal region (WNSsNC) will be amplified by PCR, cloned into the expression vector pQE-80L and transformed into E. coli DH5&alpha;. NSs protein will be produced from positive clones by protein expression in E. coli. The expressed protein will be produced, purified using Ni-NTA agarose resin column and analysed using SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The expressed protein will be tested with three MAbs by western blot analysis or PTA-ELISA. The expressed NSs protein that specific with MAb will be used to study epitope mapping using bacterial expressed fusion protein further. The DNA fragments corresponding to different NSs protein portion will be cloned into pQE80-L plus with GFP (pQE80-L-GFP) to produced fusion protein NSs-GFP in E. coli DH5&alpha;. The fusion protein will be expressed, purified and tested against three MAbs for epitope mapping and RAs-GFP by western blot analysis or PTA-ELISA. To confirm the specific epitope of MAbs, amino acid sequence of epitope will be used to synthesize. The synthetic peptide of NSs protein will be tested with three MAbs specific to WSMoV.</p>
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
คำสำคัญ: WSMoV
คำสำคัญ (EN): WSMoV
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

นุชนาถ วารินทร์. "การค้นหาตำแหน่ง epitope บน non-structural protein ของเชื้อ Watermelon silver mottle virus ที่ถูกจับอย่างจำเพาะเจาะจงโดยโมโนโคลนอลแอนติบอดีEpitope mapping on non-structural protein of Watermelon silver mottle virus specific to monoclonal antibody". สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ. 2561

นุชนาถ วารินทร์. "การค้นหาตำแหน่ง epitope บน non-structural protein ของเชื้อ Watermelon silver mottle virus ที่ถูกจับอย่างจำเพาะเจาะจงโดยโมโนโคลนอลแอนติบอดีEpitope mapping on non-structural protein of Watermelon silver mottle virus specific to monoclonal antibody". สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ. 2561. Print.



TARR Wordcloud:
การค้นหาตำแหน่ง epitope บน non-structural protein ของเชื้อ Watermelon silver mottle virus ที่ถูกจับอย่างจำเพาะเจาะจงโดยโมโนโคลนอลแอนติบอดี
นุชนาถ วารินทร์
สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
2561
การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะเพื่อการวินิจฉัย Vibrio parahaemolyticus ที่ทำให้เกิดโรคตายด่วนในกุ้ง การสำรวจระดับแอนติบอดีต่อโรคคลามัยเดียในโคเขต1 การสำรวจระดับแอนติบอดีต่อโรคคลามัยเดียในโคเขต 1 การผลิตโมโนโคลนอลที่จำเพาะต่ออะฟลาทอกซินเพื่อการพัฒนาชุดตรวจสอบแบบรวดเร็ว การตรวจหาแอนติบอดีต่อเชื้อ Caprine arthritis encephalitis virus ในซีรัมของแพะภาคใต้ของประเทศไทย การยกระดับเลือดโคพันธุ์บราห์มันในโคพื้นเมืองของเกษตรกรรายย่อยบนที่สูงโดยใช้ฮอร์โมนคุมสัดและเทคนิคผสมเทียม การพัฒนาวิธีอีไลซ่า สำหรับตรวจหาแอนติบอดีต่อเชื้อ Neospora caninum ในโค การเฝ้าระวังโรคไข้หวัดนกในสัตว์ปีก ใน 3 จังหวัดภาคตะวันออกเฉียงเหนือโดยการตรวจหาแอนติบอดีที่จำเพาะต่อเชื้อไวรัสสายพันธุ์ H5N1 การพัฒนาวิธีตรวจหาเชื้อ Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis ในสัตว์เคี้ยวเอื้อง ด้วยเทคนิคอณูชีวโมเลกุล คู่มือมาตรฐานกำหนดตำแหน่งของข้าราชการในสังกัดกรมปศุสัตว์
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair