คลังข้อมูลการวิจัยการเกษตรไทย

ผู้แต่ง รศ.ดร.อุไรวรรณ อินทมาโส

เผยแพร่โดย

สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)

เผยแพร่เมื่อ 2558

หน่วยงาน สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)

งานวิจัยที่แนะนำ การพัฒนาแผ่นแปะแก้ปวดจากสารสกัดไพลและสารเมือกจากเมล็ดแมงลัก โครงการพัฒนาต้นแบบชุดวัดระดับน้ำเพื่อหาอัตราการซึมผ่านผิวดินรายงานผ่านแอปพลิเคชัน การศึกษาชีววิทยาประมง สังคมเศรษฐกิจ และระบบนิเวศที่เกี่ยวข้องต่อการฟื้นฟูทรัพยากรปูม้าตามแนวทางการพัฒนาทางการประมง (Fishery improvement program: FIP) ในบริเวณอ่าวบ้านดอน จังหวัดสุราษฏร์ธานี

คัดลอก URL

ชื่อเรื่อง:	การพัฒนาวัคซีนต่อต้านการติดเชื้อ nervous necrosis virus ในปลากะรัง ด้วยยีสต์อาร์มมิ่งเทคโนโลยี
ชื่อเรื่อง (EN):	The development of vaccines against an infection of nervous necrosis virus in Epinephelus spp. by yeast arming technology
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ:	รศ.ดร.อุไรวรรณ อินทมาโส
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN):	Uraiwan Intamaso
หน่วยงานสังกัดผู้แต่ง:	คณะสหเวชศาสตร์ มหาวิทยาลัยบูรพา
บทคัดย่อ:	Nervous necrosis virus (RGNNV) ที่ทำให้เกิดโรค viral nervous necrosis (VN) อาจทำให้ลูกปลามี โอกาสตายได้เกือบถึง 100% ปัจจุบันยังไม่มีการรักษา และมาตรการการควบคุมต่างๆ ที่มีประสิทธิภาพ ดังนั้นการ ผลิต NNV vaccine จึงอาจเป็นทางเลือกหนึ่งในการป้องกันการติดเชื้อ NNV โครงการวิจัยนี้มีจุดมุ่งหมายในการ สร้าง recombinant yeast ด้วยเทคนิค yeast arming technology โดยการ RNA2 epitope ของ.ชื้อ NNV นำเสนอไว้บนผิวเซลล์ของยีสต์ Pichio postonis โดยมี AGa1 โปรตีนของ S cerevisice ยึดเกาะไว้ ลูกปลาที่มี อาการว่ายน้ำผิดปกติ ถูกนำมาพิสูจน์การติดเชื้อด้วยปฏิกิริยา RT-PCR โดยใช้คู่ของ primer ที่จับจำเพาะที่ coat protein RNA2 ของ NNV และ ยืนยันผลด้วยวิธี DNA sequencing ชิ้นส่วนของ AGCCL1 ที่เชื่อมต่อกับNNVENA2 มีขนาด ประมาณ 2,100 bp ถูกใส่ใน pPIC9K vector กลายเป็น pPIC9K-AGOLI-NNVRNA2 recombinant plasmid un linealized plasmid เข้าไปใน P. postoris GS115 (mut'His') ด้วยวิธี electroporation แล้ว คัดเลือก yeast transformants ที่มี phenotype Mut'His' และดื้อต่อยา geniticin meสอบกาs integration ของยืนเป้าหมายภายในโครโมโซมด้วยปฏิกิริยา PCR นำ recombinant yeast มาเพาะเลี้ยงใน buffered- methanol complex medium (BMMY) ที่เหนี่ยวน้ำด้วย 0.5% methanol เป็นเวลา 6 วัน การแสดงออกของ โปรตีนเป้าหมายที่ทดลอบด้วยวิธี dot blot และยืนยันผลด้วยวิธี western blot ด้วย polyclonal antibody ที่ จำเพาะต่อ NNV ใน crude extract พบโปรตีนเป้าหมายมีน้ำหนักพอๆ กับโปรตีนที่สที่สกัดจากปลาที่ติดเชื้อ การ ทดสอบด้วยวิธี immunofluorescense labeling สามารถยืนยันได้ว่า RNA2NNV เป็น conformational epitope ที่แสดงบนผิวของ recombinant yeast จริง และน่าสามารถนำ recombinant yeast ที่สร้างได้นี้มา พัฒนาเป็น oral vaccine เพื่อป้องกันการติดเชื้อ RGNNV ในลูกปลาได้
บทคัดย่อ (EN):	Nervous necrosis virus (NNV) causes viral nervous necrosis (VNN) that may lead to nearly 100% fatality in fingerlings and juveniles. Currently, there is no effectivetherapy and yet measures for infection control available. Therefor a NNV vaccine have been considered an option for preventing NNV infection. This aim of this research project is to generate a yeast recombinant yeast by yeast arming technology. NNVRNA2 epitopes were displayed on the surface of Pichia pastoris using AG1 anchoring protein of S cerevisiae. Fingerlings or juveniles which showed clinical signs of abnormal swimming patterns were proved NNV infection by RT-PCR using a pair of primer specific to coat protein NNVRNA2 and confirmed by DNA sequencing. The DNA fragment containing AG1 linked to NNVRNA2, 2,100 bp in length, was inserted into pPIC9K vector to generate pPIC9K-AG1-NNVRNA2 recombinant plasmid. Linearlized plasmids were electroporated into P. pastoris GS115 (mut+His- ) and yeast transformant isolates that had Muts-His+ and geniticin resistance phenotype were selected to determine the integration of the target gene by PCR reaction. The recombinant yeast was cultured in buffered-methanol complex medium (BMMY) through an induction of the culture with 0.5% methanol for 6 days. The target gene expression was determined by dot blot and confirmed by western blot with polyclonal antibody specific to NNV. The target protein had similar molecular weight to that for infected fishes was found. Immunofluorescense labeling confirmed that the NNVRNA2 epitope actually displayed on recombinant yeast surface. Thus it is possible to use of the constructed recombinant yeast as an oral vaccine to prevent RGNNV infection in fingerlings and juveniles.
บทคัดย่อ:	ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN):	th
เผยแพร่โดย:	สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)
คำสำคัญ:	การแสดงออกของยีน
คำสำคัญ (EN):	Protein expression
เจ้าของลิขสิทธิ์:	คณะสหเวชศาสตร์ มหาวิทยาลัยบูรพา
ข้อมูลทรัพยสินทางปัญญา
ประเภทIP	อนุสิทธิบัตร
รายชื่อสิ่งประดิษฐ์	รีคอมบิวแนนท์ยีสต์ที่มีการสร้างโปรตีนของเชื้อก่อโรคบนผิวเซลล์ และกรรมวิธีการผลิต
เลขที่คำขอ	1903000358
วันที่ยื่นคำขอ	2019-02-07 12:00:00
เลขที่ประกาศ
วันที่จดทะเบียน
เลขที่จดทะเบียน
วันที่ประกาศ
สถานะปัจจุบัน	เชิงพาณิชย์