สืบค้นงานวิจัย
การพัฒนาเทคนิคโอลิโกนิวคลีโอไทด์อาร์เรย์เพื่อตรวจเชื้อก่อโรคปนเปื้อนในนม
ชนิดา กุประดิษฐ์ - มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีราชมงคลอีสาน
ชื่อเรื่อง: การพัฒนาเทคนิคโอลิโกนิวคลีโอไทด์อาร์เรย์เพื่อตรวจเชื้อก่อโรคปนเปื้อนในนม
ชื่อเรื่อง (EN): Development of oligonucleotide array for foodborne pathogen detection in milk
บทคัดย่อ: นมและผลิตภัณฑ์นมเป็นแหล่งการปนเปื้อนของเชื้อก่อโรคได้หลายชนิด โดยเฉพาะอย่างยิ่ง Bacillus cereus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Salmonella spp. และ Staphylococcus aureus ดังนั้นจึงควรพัฒนาวิธีการที่รวดเร็วซึ่งสามารถตรวจเชื้อก่อโรคทั้ง 5 เชื้อนี้ได้พร้อม ๆ กัน ในงานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาการใช้เทคนิคมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ ซึ่งใช้ยีนที่มีความจำเพาะเป็นยีนเป้าหมายร่วมกับเทคนิคโอลิโกนิวคลิโอไทด์อาร์เรย์ทำให้สามารถตรวจเชื้อก่อโรคในนมได้ โพรบที่มีความเหมาะสมในการตรวจเชื้อทั้ง 5 เชื้อถูกคัดเลือกโดยใช้เทคนิคการติดฉลากดีเอ็นเอเป้าหมายด้วยวิธี post-PCR labeling ซึ่งสามารถสังเกตสัญญาณที่เกิดไฮบริไดเซชั่นได้ด้วยตาเปล่า โดยเชื้อเป้าหมายที่ใช้ในการทดสอบเทคนิคที่พัฒนาขึ้นคือ B. cereus, E. coli, L. monocytogenes, Salmonella spp. และ S. aureus ผลการทดลองพบว่ายีนที่เหมาะสมในการทำมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์คือ enterotoxin FM, uspA, prfA, fimY และ eap โดยให้ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ที่มีความจำเพาะขนาด 513, 884, 398, 315 และ 230 bp ซึ่งพบในเชื้อ B. cereus, E. coli, L. monocytogenes, Salmonella spp. และ S. aureus ตามลำดับ โดยความเข้มข้นของไพร์เมอร์ที่เหมาะสมในการทำมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์คือ 0.04 ?M enterotoxin FM, 0.12 ?M uspA, 0.16 ?M prfA, 0.04 ?M fimY และ 0.2 ?M eap นอกจากนี้ยังพบว่าที่สภาวะดังกล่าวไม่พบการเกิดปฏิกิริยาข้าม (cross-reactivities) กับเชื้อที่ไม่ใช่เชื้อเป้าหมายที่แยกได้จากน้ำนมด้วย หลังจากนำผลิตภัณฑ์ที่ได้จากมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ไปทำให้บริสุทธิ์และติดฉลาก จากนั้นนำไปไฮบริไดซ์กับโพรบเพื่อคัดเลือกโพรบที่มีความจำเพาะ พบว่ารูปแบบการเกิดไฮบริไดเซชั่นของเชื้อ B. cereus และ S. aureus มีความแตกต่างกันระหว่างเชื้อมาตรฐานและเชื้อที่แยกได้ ซึ่งแสดงให้เห็นว่าลำดับนิวคลิโอไทด์ในดีเอ็นเอเป้าหมายของเชื้อดังกล่าวเกิดการแปรผันทางพันธุกรรม ดังนั้นจึงเลือกทั้ง 5 โพรบสำหรับใช้ในการตรวจเชื้อดังกล่าวในขั้นต่อไป สำหรับการตรวจเชื้อ E. coli, L. monocytogenes และ Salmonella spp. คัดเลือกโพรบ EC1-EC5 (33-100% accuracy), LM1-LM4 (12.5-100% accuracy) และ SM1-SM3 (33-100% accuracy) ตามลำดับ เพื่อใช้ในการตรวจเชื้อดังกล่าวในขั้นต่อไป งานในขั้นต่อไปจะหาสภาวะที่เหมาะสมในการเพิ่มปริมาณเชื้อเป้าหมายทั้งหมดจากน้ำนมในอาหาร enrichment จากนั้นจะเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอเป้าหมายจากแต่ละเชื้อด้วยเทคนิคมัลติเพล็กซ์พีซีอาร์ตามด้วยการติดฉลากและไฮบริไดเซชั่นกับโพรบที่มีความเหมาะสมจากงานวิจัยนี้ สุดท้ายเทคนิคที่พัฒนาขึ้นนี้จะถูกใช้ในการตรวจเชื้อหลายเชื้อในตัวอย่างน้ำนม และประเมินค่าความแม่นยำและค่าความไวของเทคนิคที่พัฒนาขึ้น
บทคัดย่อ (EN): Milk and dairy products can harbor varieties of foodborne pathogens especially Bacillus cereus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Salmonella spp., and Staphylococcus aureus. A rapid method for simultaneous detection of five major foodborne pathogens in milk was developed. In this investigation, the combination of multiplex PCR (m-PCR) using specific genes as targets and oligonucleotide array hybridization were performed to specifically detect dominant foodborne pathogens in milk. The suitable probes for specific detection of five foodborne pathogens were screened and selected using post-PCR labeled target regions. Target bacteria including B. cereus, E. coli, L. monocytogenes, Salmonella spp., and S. aureus were used as models for the evaluation of these combined methods. The hybridization signals of non-radioactive labeling digoxigenin (DIG) incorporated into the PCR target regions were observed by naked eyes. M-PCR targeting the enterotoxin FM, uspA, prfA, fimY, and eap genes were successfully used to detect B. cereus, E. coli, L. monocytogenes, Salmonella spp., and S. aureus, respectively. The optimum concentrations of the primers in the m-PCR reaction were 0.04 ?M enterotoxin FM, 0.12 ?M uspA, 0.16 ?M prfA, 0.04 ?M fimY, and 0.2 ?M eap primers. The expected PCR products of 513, 884, 398, 315, and 230 bp were detected from the specific amplification of B. cereus, E. coli, L. monocytogenes, Salmonella spp., and S. aureus, respectively. Cross amplification from non-target bacteria isolated from raw milk samples were not detected. The target regions of m-PCR amplified products were purified, labeled, and used for specific probe selection. After hybridization, the difference of hybridization patterns were observed among isolated and reference strains of B. cereus and S. aureus. These results indicated that their target regions should contained the variation of nucleotide sequences. Therefore, all five probes of B. cereus and S. aureus were selected for further application step. For specific detection of E. coli, L. monocytogenes, and Salmonella spp., high accuracy of specific probes, including EC1-EC5 (33-100% accuracy), LM1-LM4 (12.5-100% accuracy) and SM1-SM3 (33-100% accuracy), were selected for detection of E. coli, L. monocytogenes, and Salmonella spp., respectively. For further works, optimization of the enrichment steps of all target bacteria from milk sample will be performed. Then, the DNA target regions of each bacterium will be amplified by m-PCR follow by hybridization with the suitable probes obtained from this work. Finally, the developed method will be applied to detect multiple pathogens in milk sample. The accuracy and sensitivity of the developed method will be measured.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีราชมงคลอีสาน
คำสำคัญ: นมสด
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

ชนิดา กุประดิษฐ์. "การพัฒนาเทคนิคโอลิโกนิวคลีโอไทด์อาร์เรย์เพื่อตรวจเชื้อก่อโรคปนเปื้อนในนมDevelopment of oligonucleotide array for foodborne pathogen detection in milk". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีราชมงคลอีสาน. 2560

ชนิดา กุประดิษฐ์. "การพัฒนาเทคนิคโอลิโกนิวคลีโอไทด์อาร์เรย์เพื่อตรวจเชื้อก่อโรคปนเปื้อนในนมDevelopment of oligonucleotide array for foodborne pathogen detection in milk". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีราชมงคลอีสาน. 2560. Print.



TARR Wordcloud:
การพัฒนาเทคนิคโอลิโกนิวคลีโอไทด์อาร์เรย์เพื่อตรวจเชื้อก่อโรคปนเปื้อนในนม
ชนิดา กุประดิษฐ์
มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีราชมงคลอีสาน
30 กันยายน 2560
การเสริมแคลเซียมโซปในสูตรอาหารข้นสำเร็จรูปต่อการขุนโคหย่านมเพศผู้และการพัฒนาเทคนิค NIRs เพื่อการประเมินคุณภาพเนื้อ การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่ออโกลนีมา (Aglaonema) โดยใช้เทคนิค Temporary Immersion การพัฒนาไพรเมอร์เพื่อตรวจเชื้อ Shigella spp. ที่ปนเปื้อนในอาหาร โดยเทคนิคพีซีอาร์ ผลของการใช้นมสด นมเทียม และนมสดกับอาหารผสมในการผลิตเนื้อลูกวัว เชื้อก่อโรคใน...กะปิ เชื้อก่อโรคในน้ำปลา การพัฒนาเทคนิค Multiplex PCR ในการตรวจเชื้อแบคทีเรียก่อโรคในปลาในแหล่งน้าสาธารณะหนองประจักษ์ จ.อุดรธานี เชื้อก่อโรคในซาลาเปา เชื้อก่อโรคกับไข่เยี่ยวม้า เชื้อก่อโรคใน... น้ำพริก
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair