สืบค้นงานวิจัย
การทำให้บริสุทธิ์และการศึกษาคุณสมบัติของฮีโมไซยานินและการโคลนยีนฮีโมไซยานินของกุ้งแชบ๊วย
ประภาพร อุทารพันธุ์ - มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
ชื่อเรื่อง: การทำให้บริสุทธิ์และการศึกษาคุณสมบัติของฮีโมไซยานินและการโคลนยีนฮีโมไซยานินของกุ้งแชบ๊วย
ชื่อเรื่อง (EN): Purification and Characterization of Hemocyanin and Cloning of Hemocyanin Gene of Banana Shrimp (Penaeus merguiensis)
บทคัดย่อ: บทคัดย่อ ฮีโมไซยานินเป็นโปรตีนที่มีคอปเปอร์เป็นองค์ประกอบ พบมากในฮีโมลิมฟ์ของครัสเตเชียน ฮีโมไซยานินถูกพบเป็นสารตั้งต้นของสายเปปไทด์ที่มีฤทธิ์ต้านเชื้อราหรือถูกเปลี่ยนไปเป็นเอนไซม์ ฟีนอลออกซิเดส ซึ่งเป็นเอนไซม์ที่มีบทบาทสำคัญในระบบภูมิคุ้มกันของครัสเตเชียน บ่งชี้ว่าฮีโมไซยานินน่าจะมีบทบาทเกี่ยวข้องกับระบบภูมิคุ้มกันด้วย ในงานวิจัยนี้ได้ทำให้ฮีโมไซยานินบริสุทธ์จากฮีโมลิมฟ์ของกุ้งแชบ๊วยด้วยวิธีอัลตราเซนตริฟิวจ์และโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรฟอรีซิส (PAGE) แบบเตรียม ฮีโมไซยานินบริสุทธ์ปรากฏโปรตีน 1 แถบ ใน PAGE แบบไม่แปลงสภาพ และมีหน่วยย่อย 2 ขนาด (79.4 และ 75 kDa) ใน SDS-PAGE จากการวิเคราะห์โดยโครมาโทกราฟีแบบเจลฟิลเทรชันพบฮีโมไซยานินบริสุทธ์มีมวลโมเลกุล 457 kDA แอนติบอดีต่อฮีโมไซยานินบริสุทธ์มีความจำเพาะสูงต่อฮีโมไซยานินในฮีโมลิมฟ์และถูกใช้ในการพัฒนาเทคนิค ELISA จากการวิเคราะห์โดยวิธี ELISA พบฮีโมไซยานินมีปริมาณคิดเป็น 85% ของโปรตีนทั้งหมดในฮีโมลิมฟ์ของกุ้งปกติ ได้โคลนยีนฮีโมไซยานินจากตับของกุ้งแชบ๊วยด้วยวิธี RT-PCR และ 5’ และ 3’ RACE พบว่า cDNA สายเต็มของยีนฮีโมไซยานินประกอบด้วย 2,128 คู่เบส มี 1 open reading frame ที่ยาว 1,983 คู่เบส ซึ่ง encode สายเปปไทด์ที่มีกรดอะมิโน 661 หน่วย โครงสร้างปฐมภูมิของยีนฮีโมไซยานินมี signal peptide 1 สายที่มีกรดอะมิโน 20 หน่วย และมี histidine 6 หน่วย ที่ใช้ยึดตำแหน่งจับ Cu2+ 2 ตำแหน่ง จากการ BLAST พบ cDNA ของยีนฮีโมไซยานินของกุ้งแชบ๊วยเหมือนกับของกุ้งขาว Penaeus vannamei มากที่สุด (90%) เมื่อวิเคราะห์ด้วยวิธี RT-PCR เชิงปริมาณ พบยีนฮีโมไซยานินมีการแสดงออกเฉพาะในตับ ไม่พบในเนื้อเยื่ออื่นๆ เพื่อศึกษาการตอบสนองของยีนฮีโมไซยานินต่อการเหนี่ยว นำด้วยเชื้อก่อโรค ได้บ่มชิ้นตับด้วย Vibrio harveyi พบการแสดงออกของยีนฮีโมไซยานินเพิ่มขึ้นจนมีค่าสูงสุดที่ 2.5 ชั่วโมง หลังการบ่ม จากการฉีดกุ้งด้วย V. harveyi พบการแสดงออกของยีนฮีโมไซยานินถูกกระตุ้นให้เพิ่มขึ้น และโปรตีนฮีโมไซยานินในฮีโมลิมฟ์มีปริมาณเพิ่มขึ้นจนมีค่าสูงสุดที่ 12 ชั่วโมง หลังการฉีด จากผลการทดลองเหล่านี้บ่งชี้ว่าฮีโมไซยานินถูกกระตุ้นให้เพิ่มขึ้นได้และอาจเกี่ยวข้องในระบบภูมิคุ้มกันของกุ้งเพื่อตอบสนองต่อแบคทีเรียก่อโรค
บทคัดย่อ (EN): Hemocyanin is a copper binding protein present mainly in hemolymph of crustaceans. It is found to be a precursor of anti-fungal peptides or converted to contain phenoloxidase activity. Physiological role of phenoloxidase is involved in the innate immune system of crustaceans. These suggest that hemocyanin may also play a role in immune response. In this study, hemocyanin (HC) was purified from hemolymph of banana shrimp Penaeus merguiensis by ultracentrifugation and preparative polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Purified HC showed a single band in Native PAGE and arranged in a doublet of 79.4 and 75 kDa in SDS-PAGE. It was estimated to have Mr of 457 kDa by gel filtration chromatography. Polyclonal antibody raised against purified HC was highly specific to HC in hemolymph and used to develop enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). By ELISA analysis, HC content was 85% of total hemolymph protein of normal shrimp. HC gene was cloned from hepatopancreas of P. merguiensis by means of reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and 5’ and 3’ rapid amplification of cDNA ends (RACE). The full-length cDNA of HC gene consists of 2,128 bp with one 1,983 bp open reading frame, encoding 661 amino acids. Its deduced amino acid sequence contains a putative signal peptide of 20 amino acids and 6 histidine residues that stabilize 2 Cu2+ binding sites. By BLAST analysis, P. merguiensis HC cDNA showed closely identity to that of Penaeus vannamei (90%). RT-PCR analysis revealed that HC transcript was expressed only in hepatopancreas, but not in other tissues. To study the responses of HC gene in Vibro harveyi challenge, the hepatopancreas fragments were incubated with the bacterium. A semi-quantitative RT-PCR demonstrated that the expression of HC increased and reached the maximum at 2.5 h post-incubation. After challenging whole shrimp by injection with V. harveyi, the expression of HC gene was up-regulated. Moreover, HC protein content in the hemolymph also increased to the highest at 12 h post-injection. These results indicate that HC is inducible and may be involved in a shrimp immune response to pathogenic bacteria.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
คำสำคัญ: กุ้งแชบ๊วย
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

ประภาพร อุทารพันธุ์. "การทำให้บริสุทธิ์และการศึกษาคุณสมบัติของฮีโมไซยานินและการโคลนยีนฮีโมไซยานินของกุ้งแชบ๊วยPurification and Characterization of Hemocyanin and Cloning of Hemocyanin Gene of Banana Shrimp (Penaeus merguiensis)". มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์. 2553

ประภาพร อุทารพันธุ์. "การทำให้บริสุทธิ์และการศึกษาคุณสมบัติของฮีโมไซยานินและการโคลนยีนฮีโมไซยานินของกุ้งแชบ๊วยPurification and Characterization of Hemocyanin and Cloning of Hemocyanin Gene of Banana Shrimp (Penaeus merguiensis)". มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์. 2553. Print.



TARR Wordcloud:
การทำให้บริสุทธิ์และการศึกษาคุณสมบัติของฮีโมไซยานินและการโคลนยีนฮีโมไซยานินของกุ้งแชบ๊วย
ประภาพร อุทารพันธุ์
มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
30 กันยายน 2553
การทำให้บริสุทธิ์และการศึกษาคุณสมบัติของไวเทลโลจีนินและการโคลนยีนไวเทลโลจีนินจากตับของกุ้งแชบ๊วย การศึกษาฤทธิ์ต้านการอักเสบและฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของยาตารับริดสีดวงมหากาฬ สรุปชุดโครงการวิจัยและพัฒนาเทคโนโลยีการเลี้้ยงกุ้งแชบ๊วย (Penaeus merguiensis) เพื่อการส่งออก ปีงบประมาณ 2545 - 2547 การเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของแร่ธาตุบางชนิดในพลาสมาของกุ้งขาววัยรุ่น (Litopenaeus vannamei) ในสภาวะช็อก การผลิตรีคอมบิแนนท์ฮีโมไซยานินของกุ้งก้ามกรามและการทดสอบฤทธิ์ต้านไวรัสMrNV และแบคทีเรียชนิดต่างๆ การศึกษายีนของไวรัสตัวแดงดวงขาวและกุ้งกุลาดำที่เกี่ยวข้องกับกลไกการตายของเซลล์ การโคลนและผลิตโปรตีนไฟโคไซยานินจากไซยาโนแบคทีเรีย การเปลี่ยนแปลงสรีระเคมีในรอบวงจรลอกคราบของกุ้งขาว(Litopenaeus vannamei) วิธีที่เหมาะสมในการลำเลียงกุ้งขาว (Litopenaeus vannamei) ให้มีชีวิตแบบแห้งที่อุณหภูมิต่ำ การวิเคราะห์การทำงานของยีนที่ใช้ในการสังเคราะห์สารเคอร์คูมินอยด์ในขมิ้นชันโดย RNA interference
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair