สืบค้นงานวิจัย
การวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่ง โดยเทคนิควิธีการระดับโมเลกุล
พิภัทร เจียมพิริยะกุล - มหาวิทยาลัยแม่โจ้
ชื่อเรื่อง: การวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่ง โดยเทคนิควิธีการระดับโมเลกุล
ชื่อเรื่อง (EN): Molecular Diagnosis of Potato Virus Diseases
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: พิภัทร เจียมพิริยะกุล
บทคัดย่อ: วัตถุประสงค์ของการวิจัยนี้ ก็เพื่อพัฒนาวิธีการตรวจสอบไวรัสสำคัญที่มีการติดเชื้อในมัน ฝรั่ง โดยอาศัยเทคนิควิธีการของ reverse transcription (RT) polymerase chain reaction (PCR) ซึ่งโครงการวิจัยฯ ประสบผลสำเร็จในการพัฒนาการตรวจสอบ Potato virus A (PVA), Potato virus X (PVX), Potato virus Y (PVY) และ Potato leafroll virus (PLRV) โดยอาศัย เทคนิควิธีการระดับโมเลกุลของ RT-PCR โครงการวิจัยฯ ได้ทำการเก็บรวบรวมตัวอย่างใบของมันฝรั่งที่แสดงลักษณะอาการที่คาด ว่ามีการติดเชื้อไวรัสได้จำนวน 1,120 ตัวอย่าง จากแปลงเพาะปลูกของเกษตรกรในจังหวัด เชียงใหม่ เชียงราย และตาก ซึ่งเป็นจังหวัดในภาคเหนือ และจากโรงเรือนเพาะปลูกพืชทดลองของ โครงการ ในช่วงเวลาตั้งแต่เดือนธันวาคม 2550 ถึงเดือนกรกฎาคม 2552 โดยทำการตรวจวินิจฉัย ในเบื้องต้นและตรวจสอบยืนยันการติดเชื้อไวรัส ด้วยดีเอ็นเอไพร์เมอร์ที่มีความจำเพาะต่อชนิด ไวรัสในวิธีการ RT -PCR ในปีแรกของการศึกษา-วิจัย (ต.ค. 2550 - ก.ย. 2551) นั้น โครงการวิจัย ได้ดำเนินการศึกษา-วิจัย ระบบ RT.PCR ที่เหมาะสมและสามารถประยุกต์ใช้เพื่อการตรวจสอบ ไวรัส 5 ชนิด ของมันฝรั่ง โดยได้มีการพัฒนาขั้นตอน-วิธีการสกัดแยกกรดนิวคลีอิค (total nucleic acid extraction) จากใบมันฝรั่งที่สะดวกและเหมาะสมซึ่งสามารถใช้ได้กับการตรวจสอบไวรัสของ มันฝรั่งทั้งชนิดที่มีสารพันธุกรรมเป็น RNA หรือ DNA และการพัฒนาระบบ RT-PCR เพื่อการ ตรวจสอบไวรัสที่มีหาง poly(A) ที่ปลาย 3 ของ RNA ในปีที่สอง (ต.ค. 2551 - ก.ย. 2552) โครงการวิจัยฯ ได้ทำการพัฒนาวิธีการตรวจสอบ PVA PVX PVY และ PLRV เพื่อให้ได้ระบบ ของRT-PCR ที่เหมาะสม โดยทำการออกแบบดีเอ็นเไพร์เมอร์ที่มีความจำเพาะหรือกึ่งจำเพาะต่อชนิด ของไวรัสทั้งสี่ชนิด โดยอาศัยข้อมูลลำดับนิวคลีโอไทด์ของสารพันธุกรรมของไวรัสแต่ละชนิดจาก ฐานข้อมูลพันธุกรรม GenBank และนำมาใช้เป็นไพร์เมอร์ใน PCR เพื่อทดสอบความจำเพาะ เจาะจง และความไวในการตรวจสอบไวรัสแต่ละชนิด จากการทดสอบ โครงการวิจัยฯได้คัดเลือก และพัฒนาระบบตรวจสอบ PVA PVX PVY และ PLRV ด้วยคู่ดีเอ็นเอไพร์เมอร์ A05F/A04R, X01F/X02R, YO2F/V03R และ R38F/R32R ในวิธี RT-PCR ตามลำดับ นอกจากนี้ โครงการวิจัยฯ ได้ทำการพัฒนาระบบการตรวจวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่งโดยการตรวจสอบ PVY และ PLRV จากเนื้อเยื่อใบ ในหลอดทดลองเดี่ยวในครั้งเดียว โดยวิธีการตรวจสอบไวรัสในลักษณะ duplex RT-PCR ด้วยคู่ไพร์เมอร์ Y02F และ Y03R ร่วมกับ R38F และ R32R โดยใช้ oligo (dT) และ R32R เป็น ไพร์เมอ ในปฏิกิริยาการถอดรหัสแบบย้อนกลับ (RT)ของมันฝรั่ง โดยได้มีการพัฒนาขั้นตอน-วิธีการสกัดแยกกรดนิวคลีอิค (total nucleic acid extraction) จากใบมันฝรั่งที่สะดวกและเหมาะสมซึ่งสามารถใช้ได้กับการตรวจสอบไวรัสของ มันฝรั่งทั้งชนิดที่มีสารพันธุกรรมเป็น RNA หรือ DNA และการพัฒนาระบบ RT-PCR เพื่อการ ตรวจสอบไวรัสที่มีหาง poly(A) ที่ปลาย 3 ของ RNA ในปีที่สอง (ต.ค. 2551 - ก.ย. 2552) โครงการวิจัยฯ ได้ทำการพัฒนาวิธีการตรวจสอบ PVA PVX PVY และ PLRV เพื่อให้ได้ระบบ ของRT-PCR ที่เหมาะสม โดยทำการออกแบบดีเอ็นเไพร์เมอร์ที่มีความจำเพาะหรือกึ่งจำเพาะต่อชนิด ของไวรัสทั้งสี่ชนิด โดยอาศัยข้อมูลลำดับนิวคลีโอไทด์ของสารพันธุกรรมของไวรัสแต่ละชนิดจาก ฐานข้อมูลพันธุกรรม GenBank และนำมาใช้เป็นไพร์เมอร์ใน PCR เพื่อทดสอบความจำเพาะ เจาะจง และความไวในการตรวจสอบไวรัสแต่ละชนิด จากการทดสอบ โครงการวิจัยฯได้คัดเลือก และพัฒนาระบบตรวจสอบ PVA PVX PVY และ PLRV ด้วยคู่ดีเอ็นเอไพร์เมอร์ A05F/A04R, X01F/X02R, YO2F/V03R และ R38F/R32R ในวิธี RT-PCR ตามลำดับ นอกจากนี้ โครงการวิจัยฯ ได้ทำการพัฒนาระบบการตรวจวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่งโดยการตรวจสอบ PVY และ PLRV จากเนื้อเยื่อใบ ในหลอดทดลองเดี่ยวในครั้งเดียว โดยวิธีการตรวจสอบไวรัสในลักษณะ duplex RT-PCR ด้วยคู่ไพร์เมอร์ Y02F และ Y03R ร่วมกับ R38F และ R32R โดยใช้ oligo (dT) และ R32R เป็น ไพร์เมอ ในปฏิกิริยาการถอดรหัสแบบย้อนกลับ (RT)
บทคัดย่อ (EN): The overall purpose of this research was to develop a reverse transcription (RT) polymerase chain reaction (PCR)-based method for detection of viruses in infected potato plant. Potato virus A (PVA), Potato virus X (PVX), Potato virus Y (PVY) and Potato leafroll virus (PLRV) are four different virus species of the most important viruses infecting cultivated potatoes. RT PCR-based methods for detecting the four potato viruses were successfully developed in this study. A total of 1,120 symptomatic leaf samples from field and from greenhouse were collected from December 2007 to July 2009 in three Northern provinces, Chiang Mai, Chiang Rai and Tak, of Thailand. Samples of symptomatic plants were analyzed for virus infection by RT-PCR using specific oligonucleotide primers. In the first year of this research project (Oct 2007 - Sep 2008), optimization and application of a reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) system have been studied for detection of five potato viruses. A nucleic acids extraction protocol was developed for both potato-infecting DNA and RNA viruses. By using an oligo(dT) as a common primer for RNA templates containing a poly(A) tract, a RT-PCR system have been developed for detection of four potato viruses (PVA, PVS, PVX and PvY) which contained a poly(A) tract at their 3-end. In the second year (Oct 2008 - Sep 2009), three viral genera including four potato viruses, potyvirus (PVA and PVY), potexvirus (PVX) and polerovirus (PLRV) were used to develop manifold systems of RT-PCR. Several specific or degenerate oligonucleotide primers were designed on aligned virus sequences published in the GenBank covering the genome of different PVA, PVX, PVY and PLRV isolates, consensus regions were identified. These designed primers were used as either forward or reverse primers in PCR which were tested for their specificity and sensitivity. Four primer pairs, A05F/A04R, X01F/X02R, Y02F/Y03R and R38F/R32R, were preferred and used as a set of virus species-specific primer in PCR for development of RT-PCR methods for detecting PVA, PVX, PVY and PLRV, respectively. Furthermore, merging an oligo(dT) primer with the R32R specific reverse primer can be used to simultaneously prime RT of both polyadenylated and non-polyadenylated RNAs, and PCR for simultaneous detection of two different viruses, PVY and PLRV with a mixture of primers Y02F, Y03R, R38F and R32R, is reported.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยแม่โจ้
คำสำคัญ: มันฝรั่ง
คำสำคัญ (EN): polymerase chain reaction (PCR)
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

พิภัทร เจียมพิริยะกุล. "การวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่ง โดยเทคนิควิธีการระดับโมเลกุลMolecular Diagnosis of Potato Virus Diseases". มหาวิทยาลัยแม่โจ้. 2552

พิภัทร เจียมพิริยะกุล. "การวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่ง โดยเทคนิควิธีการระดับโมเลกุลMolecular Diagnosis of Potato Virus Diseases". มหาวิทยาลัยแม่โจ้. 2552. Print.



TARR Wordcloud:
การวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่ง โดยเทคนิควิธีการระดับโมเลกุล
พิภัทร เจียมพิริยะกุล
มหาวิทยาลัยแม่โจ้
30 กันยายน 2552
การวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่งโดยเทคนิควิธีการระดับโมเลกุล การศึกษาด้านระบาดวิทยาระดับโมเลกุลของไวรัสโรคปากและเท้าเปื่อยที่ระบาดในประเทศไทยและระดับภูมิภาคเอเชียตะวันออกเฉียงใต้ ระหว่างปี พ.ศ.2553-2555 การศึกษาด้านระบาดวิทยาระดับโมเลกุลของไวรัสโรคปากและเท้าเปื่อยที่ระบาดในประเทศไทยและระดับภูมิภาคเอเชียตะวันออกเฉียงใต้ ระหว่างปี พ.ศ. 2553-2555 พันธุศาสตร์โมเลกุลและกลไกระดับโมเลกุลของเอนไซม์ MMP-13 ในช้างเอเชียซึ่งมีความสำคัญเกี่ยวข้องกับโรคข้อเสื่อม การพัฒนา recombinant 3ABC-based ELISA เพื่อวินิจฉัยสัตว์ที่ติดเชื้อไวรัสโรคปากและเท้าเปื่อยออกจากสัตว์ที่ได้รับวัคซีน การพัฒนา recombinant 3ABC-based ELISA เพื่อวินิจฉัยสัตว์ที่ติดเชื้อไวรัสโรคปากและเท้าเปื่อยออกจากสัตว์ที่ได้รับวัคซีน การศึกษาระบาดวิทยาระดับโมเลกุลของไวรัสโรตาของสัตว์ปีกในมูลเป็ดไล่ทุ่ง การศึกษาความหลากหลายทางพันธุกรรมของพืชสกุลฮ่อม (Strobilanthes) ด้วยเทคนิคเซลล์พันธุศาสตร์และชีววิทยาระดับโมเลกุล การพัฒนาเทคนิคระดับโมเลกุลสำหรับตรวจสอบเชื้อสาเหตุโรคขอบใบแห้งที่รวบรวมจากเขตภาคเหนือตอนล่าง และการตรวจสอบปัจจัยทางพันธุกรรมและสารเคมีที่มีผลต่อระดับความต้านทานต่อเชื้อในข้าวสายพันธุ์ กข47 ที่มียีน Xa การพัฒนาเทคนิคระดับโมเลกุลสำหรับตรวจสอบเชื้อสาเหตุโรคขอบใบแห้งที่รวบรวมจากเขตภาคเหนือตอนล่าง และการตรวจสอบปัจจัยทางพันธุกรรมและสารเคมีที่มีผลต่อระดับความต้านทานต่อเชื้อในข้าวสายพันธุ์ กข47 ที่มียีน Xa
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair