สืบค้นงานวิจัย
การพัฒนาชุดตรวจสอบสารพิษเชื้อราในอาหารเพื่อคุณภาพชีวิตที่ดีและลดการพึ่งพาเทคโนโลยีจากต่างประเทศ
สุวรรณา กลัดพันธุ์ - มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
ชื่อเรื่อง: การพัฒนาชุดตรวจสอบสารพิษเชื้อราในอาหารเพื่อคุณภาพชีวิตที่ดีและลดการพึ่งพาเทคโนโลยีจากต่างประเทศ
ชื่อเรื่อง (EN): Development of Mycotoxin Rapid Test Kits for Good Quality of Life and Sustainable Technology
บทคัดย่อ: ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่ออะฟลาทอกซิน (AFT) โดยใช้ B1-BSA เป็นแอนติเจนฉีดกระตุ้นให้กับหนูเม้าส์พันธุ์ BALB/c นำเซลล์ม้ามมาเชื่อมกับเซลล์มัยอีโลมา คัดเลือกเซลล์ลูกผสมที่มีการผลิตแอนติบอดีต่อ AFB1 ได้ 36 หลุม หลังจากทำ limiting dilution และคัดเลือกไฮบริโดมาจำนวน 4 โคลน ที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี (MAb) รหัส AFT1, AFT3, AFT4 และ AFT5 มาทดสอบความจำเพาะกับอนุพันธุ์ของอะฟลาทอกซินได้แก่ B1, B2, G1, G2 และ M พบว่า โคลน AFT1 และ AFT3 มีปฏิกิริยาข้ามสูงกับ M1 (115% และ 91.53% ตามลำดับ) ในขณะที่โคลน AFT5 มีปฏิกิริยาข้ามกับ B2 สูงกว่าอนุพันธุ์อื่น (44.2%) และไม่มีปฏิกิริยาข้ามกับกับอนุพันธ์ G1 และ G2 สำหรับโคลน AFT4 นั้นพบว่าไม่มีปฏิกิริยาแข่งขันกับอนุพันธ์ใดๆ เลย รวมถึง B1 ด้วย ซึ่งอาจเป็นไปได้ว่าโคลน AFT4 มีความจำเพาะต่ออิพิโทปใหม่ที่เกิดจากปฏิกิริยาการพ่วง AFB1 กับ BSA carrier โมโนโคลนอลแอนติบอดีทั้ง 4 โคลนสร้างอิมมูโนโกลบูลินชนิด IgG1 และสร้าง lampda light cahin การเพิ่มปริมาณ MAb-AFT4 ทั้งแบบ in vivo และ in vitro ได้แอนติบอดีรวมทั้งสิ้น 95.86 มิลลิกรัม ซีราลีโนนเป็นสารพิษที่ผลิตจากเชื้อรา Fusarium หลายสายพันธุ์ และทำให้เกิดปัญหาการปนเปื้อนกับเมล็ดและวัตถุดิบอาหารสัตว์ทั่วโลก วิธีการวิเคราะห์ซีราลีโนนโดยทั่วไปใช้เทคนิคโครมาโตกราฟี ได้แก่ thin layer chromatography (TLC), high performance liquid chromatography (HPLC) หรือ gas chromatography (GC) ซึ่งเป็นวิธีที่ต้องการผู้ชำนาญ เครื่องมือเฉพาะทาง และใช้เวลาในการวิเคราะห์นาน งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อผลิตชุดตรวจสอบแบบรวดเร็ว immunochromatographic strip (ICS) ซึ่งใช้งานง่ายและน่าเชื่อถือ โดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อซีราลีโนนจากไฮบริโดมาโคลน ZN1 นำมาเพิ่มปริมาณ เตรียมให้บริสุทธิ์ และพ่วงกับอนุภาคทองเพื่อใช้เป็นแอนติบอดีในการตรวจสอบ ทดสอบความสามารถในการทำปฏิกิริยาด้วยวิธี dot immunobinding assay (DIBA) การเตรียม ICS ใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่พ่วงอนุภาคทองพ่นที่บริเวณ conjugate release pad ส่วนที่ test line และ control line ฉีดพ่นด้วยZEA-BSA และ rabbit anti-mouse antibody ตามลำดับ เมื่อทดสอบกับสารสกัดจากข้าวโพดและถั่วลิสงไม่พบปฏิกิริยารบกวนจากสารสกัดวัตถุดิบทั้งสอง วิธีการสกัด ZEA จากวัตถุดิบใช้ 70% Methanol และเจือจางใน sample buffer อัตราส่วน 1:4 ค่า cut-off ของการวิเคราะห์ตัวอย่างข้าวโพดที่มีการเติมซีราลีโนน คือ 100 ไมโครกรัม/กิโลกรัม การตรวจสอบด้วย ICS ใช้เวลา 15 นาทีในการเกิดปฏิกิริยา การทดสอบโดยใช้ตัวอย่างข้าวโพดที่ทราบปริมาณซีราลีโนนพบว่า ICS ให้ผลสอดคล้องกับผลที่ได้จากวิธี cELISA และ TLC
บทคัดย่อ (EN): Monoclonal antibodies against aflatoxin were raised by immunizing B1-BSA into BALB/c mice and the spleen cells were removed for fusion with myeloma cells. Thirty six hybridomas secreting anti-AFB1 antibody were selected and introduced into limiting dilution. Four hybridoma clones including AFT1, AFT3, AFT4 and AFT5 were characterized for cross reactivity with aflatoxin derivatives, e.g. B1, B2, G1, G2 and M1. The result showed that AFT1 and AFT3 cross reacted highly with M1 (115% and 91.53%, respectively) whereas AFT5 crossed reacted with B2 more than other derivatives (44.2%) but not with G1 and G2. However no cross reaction with any derivatives including B1 was observed with AFT4. This may due to the neotope on the toxin conjugate was the reactive site for this antibody. All the MAbs studied in this research are IgG1 and produce lambda light chain. In vivo as well as in vitro scale up production were carried out in which total yield of 95.86 mg was achieved.Zearalenone (ZEA) is a mycotoxin produced by a variety of Fusarium fungi and can cause serious problems in grains and feedstuffs worldwide. Commonly used techniques for ZEA analysis are typically chromatographic methods such as thin layer chromatography (TLC), high performance liquid chromatography (HPLC) or gas chromatography (GC) which requires highly qualified personnel, tedius assay time and sophisticated instrumentation. This research aims to develop a rapid, reliable and easy-to-use immunochromatographic assay (ICA) by using anti-ZEA monoclonal antibody (MAb). The hybridoma clone ZN1 was selected and large scale production of this MAb had been conducted. After purification, MAb was conjugated with colloidal gold as the detector reagent and tested on nitrocellulose membrane for its reactivity by dot immunobinding assay (DIBA). To develop the ICS, MAb-gold conjugate was sprayed onto the conjugate release pad while ZEA-BSA and rabbit anti-mouse antibody were sprayed onto the test line and control line, respectively. No interference when tested with corn or groundnut extract was recorded. A simple extraction was carried out using 70% Methanol and then diluted in sample buffer at 1:4 ratio. The cut-off value for the spiked corn was 100 ug/kg and the assay required 15 min for color development. When known samples were tested, the results obtained from ICS were in good agreement with those obtained by cELISA and TLC.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
คำสำคัญ: แอนติบอดี
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

สุวรรณา กลัดพันธุ์. "การพัฒนาชุดตรวจสอบสารพิษเชื้อราในอาหารเพื่อคุณภาพชีวิตที่ดีและลดการพึ่งพาเทคโนโลยีจากต่างประเทศDevelopment of Mycotoxin Rapid Test Kits for Good Quality of Life and Sustainable Technology". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2552

สุวรรณา กลัดพันธุ์. "การพัฒนาชุดตรวจสอบสารพิษเชื้อราในอาหารเพื่อคุณภาพชีวิตที่ดีและลดการพึ่งพาเทคโนโลยีจากต่างประเทศDevelopment of Mycotoxin Rapid Test Kits for Good Quality of Life and Sustainable Technology". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2552. Print.



TARR Wordcloud:
การพัฒนาชุดตรวจสอบสารพิษเชื้อราในอาหารเพื่อคุณภาพชีวิตที่ดีและลดการพึ่งพาเทคโนโลยีจากต่างประเทศ
สุวรรณา กลัดพันธุ์
มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
30 กันยายน 2552
การผลิตโมโนโคลนอลที่จำเพาะต่ออะฟลาทอกซินเพื่อการพัฒนาชุดตรวจสอบแบบรวดเร็ว การเพิ่มศักยภาพของชุดตรวจสอบสารพิษเชื้อราซีราลีโนนและอิมมูโนแอฟฟินิตีคอลัมน์สำหรับอะฟลาทอกซินเพื่อการผลิตเชิงพาณิชย์ การถ่ายทอดเทคโนโลยีเพื่อพัฒนาเครือข่ายวนเกษตร สารพิษในอาหาร การเพิ่มศักยภาพของชุดตรวจสอบสารพิษเชื้อราซีราลีโนนและอิมมูโนแอฟฟินิตีคอลัมน์สำหรับอะฟลาทอกซินเพื่อการผลิตเชิงพาณิชย์ การผลิตฟักทองญี่ปุ่นพร้อมปรุงในภาชนะบรรจุสำหรับการจำหน่ายปลีก : คุณภาพระหว่างการเก็บรักษา การใช้ประโยชน์จากเชื้อราในการควบคุมโรคพืช อาหารสัตว์กับการพัฒนาคุณภาพชีวิตเยาวชนไทย การพัฒนาคุณภาพชีวิตที่มีผลต่อการพัฒนาเศรษฐกิจ ปลาทะเลแห้ง... กับสารพิษจากเชื้อรา
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair