สืบค้นงานวิจัย
การโคลนและวิเคราะห์ยีนไซโคลฟิลินจากข้าวฟ่างและการถ่ายยีนเข้าสู่ยาสูบ
สภาวดี ง้อเหรียญ - กรมวิชาการเกษตร
ชื่อเรื่อง: การโคลนและวิเคราะห์ยีนไซโคลฟิลินจากข้าวฟ่างและการถ่ายยีนเข้าสู่ยาสูบ
ชื่อเรื่อง (EN): Cloning and Characterization of Cyclophilin Gene from Sorghum bicolor (L.) Moench and Its Transformation into Tobacco Plant
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: สภาวดี ง้อเหรียญ
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Suphwadee Ngorian
บทคัดย่อ: การโคลนยีนไซโคลฟิลิน (Cyclophilin : CyP) ซึ่งเป็นยีนที่เกี่ยวข้องกับการสร้างระบบภูมิคุ้มกัน และยับยั้งขบวนการที่ก่อให้เกิดความเสียหายแก่พืช ซึ่งช่วยให้พืชดำรงชีวิตอยู่ได้ในสภาวะที่ไม่เหมาะสม ดำเนินการวิจัยที่ห้องปฏิบัติการ สำนักวิจัยและพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ จ.ปทุมธานี ระหว่างเดือนตุลาคม พ.ศ. 2551 – กันยายน พ.ศ. 2553 งานวิจัยในครั้งนี้ได้ทำการโคลนยีน CyP จากข้าวฟ่าง ซึ่งเป็นพืชที่มีลักษณะทนแล้ง โดยทำการออกแบบไพรเมอร์ที่มีความจำเพาะกับยีน CyP จากฐานข้อมูล NCBI ได้แก่ CyP4 (forward) + CyP4 (reverse) นำมาทำปฏิกิริยา PCR กับจีโนมิกดีเอ็นเอของข้าวฟ่าง 2 พันธุ์ ได้แก่ อู่ทอง 1 (UT 1) และ สุพรรณบุรี 60 (SPR 60) ได้ยีนขนาด 1,062 คู่เบส (genbank accession no EU 722309) เมื่อนำข้อมูลที่ได้มาวิเคราะห์โครงสร้างของยีนโดยใช้โปรแกรม EMBL-EBI database บนอินเทอร์เน็ต พบว่ายีน CyP ที่ได้มีส่วนประกอบครบทั้งยีน ซึ่งประกอบด้วย ลำดับเบสในส่วนของ open reading frame (ORF) มีขนาดเท่ากับ 519 คู่เบส 5’UTR มีขนาด 130 คู่เบส 3’UTR มีขนาด 143 คู่เบส และพบลำดับนิวคบีโอไทด์ที่เป็น AATAA motif สามารถแปลเป็นรหัสเปปไทด์ได้จำนวน 712 amino acid จากนั้นทำการโคลนยีนในส่วนที่มีการแสดงออกโดยการทำปฏิกิริยา PCR กับจีดนมิกดีเอ็นเอของข้าวฟ่างร่วมกับไพรเมอร์ที่มีความจำเพาะกับยีน ได้แก่ CyPXbal (forward) + CyPKpnl (forward) ซึ่งได้เติมลำดับเบสที่เป็นตำแหน่งจดจำของเอนไซม์ตัดจำเพาะ Xbal และ Kpnl เพื่อบังคับทิศทางของการแปลรหัส ได้ยีน CyP ขนาด 519 คู่เบส ทำการเชื่อมต่อยีน CyP เข้ากับ plant expression vector (pCAMBIA2300) ที่ประกอบด้วยโปรโมเตอร์ (35SCaMV) และเทอร์มิเนเตอร์ (NOS) ได้พลาสามิดสายผสม (pCAMBIA2300 –CyP) ขนาดประมาณ 10 กิโลเบส ถ่ายฝากยีนที่ได้เข้าสู่ใบยาสูบโดยใช้วิธีอะโกรแบคทีเรีย คัดเลือกต้นที่ได้รับการถ่ายยีนบนอาหารคัดเลือกที่เติมสารปฏิชีวะ Kanamycin สามารถคัดเลือกต้นที่ได้รับการถ่ายยีนจำนวน 25 ต้น นำต้นที่ได้รับการคัดเลือกมาตรวจสอบการปรากฎของยีนโดยใช้เทคนิค PCR โดยใช้โพรเมอร์ 2 คู่ ได้แก่ CyPXbal (forward) + CyPkpnl (resverse) และ NOS (forward) + 35SCaMV (reverse) พบว่าต้นยาสูบที่ได้รับการถ่ายยีนมีจำนวนทั้งหมด 10 ต้น
บทคัดย่อ (EN): Cyclophilins are ubiquitous proteins present in all subcellular compartments, which are involve in a variety of processes such as immunosuppression and major biotic and abiotic stresses. The research was made at the laboratory of Biotechnology Research and Development Office, Department o Agriculture, Pathum Thani province during October 2008 – September 2010. In this study, two full-length genomic DNA sequences of sorghum (Sorghum biocolor) encoding cyclophillin (SbCyP) have been isolated from two sorghum varieties named U-Thong 1 (UT1) and Supanburi 60 (SPR 60) via PCR-based method with CyP4 (forward) + CyP4 (reverse). Amino acid sequence of SbCyP disclosed similarity to each other and with that of cyclophillins of various organisms. The gene sequence contains a fragment of 1}062 kb (genbank accession no EU722309), including a 519 bp complete ORF, the 5’UTR of 130 bp, 3’UTR of 413 bp and a typical AATAA motif, encoding the 172 amino acid polypeptide4. A 519-bp fragment of the SbCyP gene was further amplified by PCR-based method with CyPXbal (forward) + CyPKpnl (forward), addition of Xbal and Kpnl restriction sites for protein translation purpose and then ligated into plant expression vector pCAMBIA2300 containing 35SCaMV promoter and NOS terminator to obtain 10 kb - pCAMBIA2300 – CyP expression cassette. The expression cassette was then transferred into Nicotiana tobacum (tobacco) plant by Agrobacterium- mediated transformation with kanamycin antibiotic selection. A total of twenty-five transformed plants were randomly selected and screened for the presentation of transgenes by PCR-based method with two pairs of CyPXbal (forward)+ CyPKpnl (reverse) and NOS (forward) + 35SCaMV (reverse). Ten out of twenty-five selected plants were found to be transgenic tobacco plants.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: กรมวิชาการเกษตร
คำสำคัญ: ยาสูบ
คำสำคัญ (EN): model plant
เจ้าของลิขสิทธิ์: กรมวิชาการเกษตร
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

สภาวดี ง้อเหรียญ. "การโคลนและวิเคราะห์ยีนไซโคลฟิลินจากข้าวฟ่างและการถ่ายยีนเข้าสู่ยาสูบCloning and Characterization of Cyclophilin Gene from Sorghum bicolor (L.) Moench and Its Transformation into Tobacco Plant". กรมวิชาการเกษตร. 2555

สภาวดี ง้อเหรียญ. "การโคลนและวิเคราะห์ยีนไซโคลฟิลินจากข้าวฟ่างและการถ่ายยีนเข้าสู่ยาสูบCloning and Characterization of Cyclophilin Gene from Sorghum bicolor (L.) Moench and Its Transformation into Tobacco Plant". กรมวิชาการเกษตร. 2555. Print.



TARR Wordcloud:
การโคลนและวิเคราะห์ยีนไซโคลฟิลินจากข้าวฟ่างและการถ่ายยีนเข้าสู่ยาสูบ
สภาวดี ง้อเหรียญ
กรมวิชาการเกษตร
2555
การพัฒนาการถ่ายยีนเข้าสู่ข้าวโดยวิธี floral dip รูปแบบการแจกแจงและแผนการสุ่มตัวอย่างแบบซีเควนเชียลของหนอนเจาะสมอฝ้ายในข้าวฟ่าง การประเมินพันธุ์ยาสูบบ่มไอร้อนในสภาพแวดล้อมที่แตกต่างกัน ในประเทศไทย ความลึกและความหนาแน่นของรากข้าวโพดและข้าวฟ่างที่ปลูกภายใต้สภาพการใช้น้ำฝน การวิเคราะห์การทำงานของยีนที่ใช้ในการสังเคราะห์สารเคอร์คูมินอยด์ในขมิ้นชันโดย RNA interference การใช้ค่าวิเคราะห์ดิน ผลผลิตที่คาดหวัง และธาตุอาหารหลักในผลผลิตเพื่อกำหนดอัตราการใส่ปุ๋ยสำหรับข้าว ตำบลบ้านกร่าง อำเภอเมือง จังหวัดพิษณุโลก การพัฒนาเครื่องหีบข้าวฟ่างหวานระดับชุมชน การผลิตข้าวโพดและข้าวฟ่างเพื่อคุณภาพชีวิตและสิ่งแวดล้อมที่ดี การปรับปรุงพันธุ์ข้าวฟ่าง เออร์กอท-โรคใหม่ของข้าวฟ่างในประเทศไทย
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair