สืบค้นงานวิจัย
การเปรียบเทียบความไวและความจำเพาะระหว่าง 4 คู่ไพรเมอร์ยีน ที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และ 3 คู่ไพรเมอร์ยีนที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาเรียวทามลูกโซ่โพลีเมอร์เลส สำหรับการตรวจหาเชื้อแบคทีเรีย Brucella canis
เกษกนก ศิรินฤมิตร (กมลพัฒนะ) - มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
ชื่อเรื่อง: การเปรียบเทียบความไวและความจำเพาะระหว่าง 4 คู่ไพรเมอร์ยีน ที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และ 3 คู่ไพรเมอร์ยีนที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาเรียวทามลูกโซ่โพลีเมอร์เลส สำหรับการตรวจหาเชื้อแบคทีเรีย Brucella canis
ชื่อเรื่อง (EN): Comparison sensitivity and specificity between four pairs of primer specific for four different genes using PCR and three pairs of primer specific forthree different genes using real-time PCR for detection ofBrucella canis
บทคัดย่อ: โรคแท้งติดต่อในสุนัขจรจัดเป็นโรคที่มีแหล่งแพร่เชื้อจากสัตว์ที่สำคัญสามารถติดต่อจากสัตว์สู่คนได้ เกิดจากเชื้อ B. canis มีรายงานการตรวจพบเชื้อ B. canis ในสุนัขในประเทศไทยครั้งแรกเมื่อปีพศ. 2542 ต่อมาได้พบว่ามีการติดเชื้อ B. canis เพิ่มมากขึ้นมาตลอด การวินิจฉัยโรคแท้งติดต่อในสุนัขมีหลายวิธีเช่น การเพาะแยกเชื้อ ซีรั่มวิทยา วิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และวิธี real-time PCR เป็นต้น เนื่องจากได้มีการพัฒนาวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และวิธี real-time PCR โดยใช้ไพร์เมอร์ และระบบการรายงานผลที่แตกต่างกัน วัตถุประสงค์ของการศึกษาในครั้งนี้คือ การเปรียบเทียบความไวของวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และวิธี real-time SYBR PCR ของแต่ละคู่ไพร์เมอร์ เพื่อที่จะได้วิธีที่มีความไวที่สุดในการตรวจหาเชื้อ B. canis จากการศึกษาครั้งนี้พบว่าคู่ไพร์เมอร์ 4 คู่ที่ใช้สำหรับวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลสนั้นสามารถตรวจหายีน 16S rRNA, bcsp31, bp26 และ16S-23S-rRNA เชื้อ B. canis ได้อย่างมีความจำเพาะ คู่ไพร์เมอร์ 3 คู่สำหรับวิธี real-time SYBR PCR พบว่ามีคู่ไพร์เมอร์ 2 คู่ (bcsp31 and 16S-23S rRNA) เท่านั้นที่มีความจำเพาะเจาะจง ส่วนคู่ไพร์เมอร์สำหรับยีน alk-B-IS711 ให้ผลไม่จำเพาะ สำหรับวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลสพบว่าคู่ไพร์เมอร์ B4/B5 (bcsp31) มีความไวสูงที่สุดในการตรวจหาพลาสมิดใส่ยีนไว้คือ มีความไวเท่ากับ 104 copy/ปฎิกิริยา or 19.2 fg/ปฎิกิริยา แต่ถ้าใช้ตัวอย่างเลือดสุนัขที่มีการเติมเชื้อ B. canis พบว่าคู่ไพรเมอร์ ITS66/ITS279 (16S-23S rRNA) มีความไวมากที่สุดคือ 104 copy/ปฎิกิริยา สำหรับวิธี real-time SYBR PCR พบว่าคู่ไพร์เมอร์ B4/B5 และ ITS66/ITS279 มีความไวเท่ากันในการตรวจหาพลาสมิดที่มียีนนั้นๆคือ 101 copy/ปฎิกิริยา แต่เมื่อเทียบกับปริมาณความเข้มข้นของ พลาสมิดพบว่าคู่ไพร์เมอร์ B4/B5 มีความไวเท่ากับ 1.92 ? 10-2 fg พลาสมิด/ปฎิกิริยา และคู่ไพร์เมอร์ ITS66/ITS279 มีความไวเท่ากับ 3.78 ? 10-2 fg พลาสมิด/ปฎิกิริยา อย่างไรก็ดีเมื่อใช้ตัวอย่างเลือดสุนัขที่เติมเชื้อ B. canis พบว่าคู่ไพร์เมอร์ B4/B5 (1 ?101 CFU/ปฎิกิริยา) มีความไวสูงกว่า คู่ไพร์เมอร์ ITS66/ITS279 (1 ?102 CFU/ปฎิกิริยา) พบว่าวิธี real-time SYBR PCR มีความไวโดยเฉลี่ยมากกว่าวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลสประมาณ 103 เท่า จากการศึกษาในครังนี้สามารถสรุปได้ว่าคู่ไพร์เมอร์ ITS66/ITS279 มีความเหมาะสมที่สุดในการนำมาใช้ตรวจหาเชื้อ B. canis โดยวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และ คู่ไพร์เมอร์ B4/B5 มีความเหมาะสมที่ที่สุดในการนำมาใช้ตรวจหาเชื้อ B. canis โดยวิธี real-time SYBR PCR และ วิธี วิธี real-time SYBR PCR โดยใช้คู่ไพร์เมอร์ B4/B5 มีความไวสูงที่สุดในวิธีการต่างๆที่นำมาศึกษาในครั้งนี้โรคแท้งติดต่อในสุนัขจรจัดเป็นโรคที่มีแหล่งแพร่เชื้อจากสัตว์ที่สำคัญสามารถติดต่อจากสัตว์สู่คนได้ เกิดจากเชื้อ B. canis มีรายงานการตรวจพบเชื้อ B. canis ในสุนัขในประเทศไทยครั้งแรกเมื่อปีพศ. 2542 ต่อมาได้พบว่ามีการติดเชื้อ B. canis เพิ่มมากขึ้นมาตลอด การวินิจฉัยโรคแท้งติดต่อในสุนัขมีหลายวิธีเช่น การเพาะแยกเชื้อ ซีรั่มวิทยา วิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และวิธี real-time PCR เป็นต้น เนื่องจากได้มีการพัฒนาวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และวิธี real-time PCR โดยใช้ไพร์เมอร์ และระบบการรายงานผลที่แตกต่างกัน วัตถุประสงค์ของการศึกษาในครั้งนี้คือ การเปรียบเทียบความไวของวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และวิธี real-time SYBR PCR ของแต่ละคู่ไพร์เมอร์ เพื่อที่จะได้วิธีที่มีความไวที่สุดในการตรวจหาเชื้อ B. canis จากการศึกษาครั้งนี้พบว่าคู่ไพร์เมอร์ 4 คู่ที่ใช้สำหรับวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลสนั้นสามารถตรวจหายีน 16S rRNA, bcsp31, bp26 และ16S-23S-rRNA เชื้อ B. canis ได้อย่างมีความจำเพาะ คู่ไพร์เมอร์ 3 คู่สำหรับวิธี real-time SYBR PCR พบว่ามีคู่ไพร์เมอร์ 2 คู่ (bcsp31 and 16S-23S rRNA) เท่านั้นที่มีความจำเพาะเจาะจง ส่วนคู่ไพร์เมอร์สำหรับยีน alk-B-IS711 ให้ผลไม่จำเพาะ สำหรับวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลสพบว่าคู่ไพร์เมอร์ B4/B5 (bcsp31) มีความไวสูงที่สุดในการตรวจหาพลาสมิดใส่ยีนไว้คือ มีความไวเท่ากับ 104 copy/ปฎิกิริยา or 19.2 fg/ปฎิกิริยา แต่ถ้าใช้ตัวอย่างเลือดสุนัขที่มีการเติมเชื้อ B. canis พบว่าคู่ไพรเมอร์ ITS66/ITS279 (16S-23S rRNA) มีความไวมากที่สุดคือ 104 copy/ปฎิกิริยา สำหรับวิธี real-time SYBR PCR พบว่าคู่ไพร์เมอร์ B4/B5 และ ITS66/ITS279 มีความไวเท่ากันในการตรวจหาพลาสมิดที่มียีนนั้นๆคือ 101 copy/ปฎิกิริยา แต่เมื่อเทียบกับปริมาณความเข้มข้นของ พลาสมิดพบว่าคู่ไพร์เมอร์ B4/B5 มีความไวเท่ากับ 1.92 ? 10-2 fg พลาสมิด/ปฎิกิริยา และคู่ไพร์เมอร์ ITS66/ITS279 มีความไวเท่ากับ 3.78 ? 10-2 fg พลาสมิด/ปฎิกิริยา อย่างไรก็ดีเมื่อใช้ตัวอย่างเลือดสุนัขที่เติมเชื้อ B. canis พบว่าคู่ไพร์เมอร์ B4/B5 (1 ?101 CFU/ปฎิกิริยา) มีความไวสูงกว่า คู่ไพร์เมอร์ ITS66/ITS279 (1 ?102 CFU/ปฎิกิริยา) พบว่าวิธี real-time SYBR PCR มีความไวโดยเฉลี่ยมากกว่าวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลสประมาณ 103 เท่า จากการศึกษาในครังนี้สามารถสรุปได้ว่าคู่ไพร์เมอร์ ITS66/ITS279 มีความเหมาะสมที่สุดในการนำมาใช้ตรวจหาเชื้อ B. canis โดยวิธีปฎิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และ คู่ไพร์เมอร์ B4/B5 มีความเหมาะสมที่ที่สุดในการนำมาใช้ตรวจหาเชื้อ B. canis โดยวิธี real-time SYBR PCR และ วิธี วิธี real-time SYBR PCR โดยใช้คู่ไพร์เมอร์ B4/B5 มีความไวสูงที่สุดในวิธีการต่างๆที่นำมาศึกษาในครั้งนี้
บทคัดย่อ (EN): Canine brucellosis is one of the important zoonotic disease which causes by Brucella canis (B. canis). Canine brucellosis has been reported in Thailand since 1999. Since then, the number of canine brucellosis has been increasing in Thailand. There are several methods for the diagnosis of canine brucellosis such as bacterial culture, 2ME-MPAT, Polymerase chain reaction (PCR) and Real-time PCR. PCR and real-time PCR have advantages over other techniques by less time consume and able to identify current infection. However, there are several PCR and real-time PCR assays using different primers and detection systems for the detection of Brucella spp. The purpose of this study is to compare the sensitivity of PCR and real-time SYBR PCR using different set of primers for the selection of the appropriate primers and detection system for the diagnosis of canine brucellosis in Thailand. All 4 PCR assays using 4 primer sets for the detection of 16S rRNA, bcsp31, bp26 and 16S-23S-rRNA can amplify targets specifically. For three real-time SYBR PCR assays, 2 primer sets for the amplification of bcsp31 and 16S-23S rRNA can amplify specifically but a primer set for the amplication of alk-B-IS711 gave a non-specific result. According to PCR assays, primers B4/B5 for the amplification of bcsp31 had the highest sensitivity (104 copy/reaction or 19.2 fg/reaction) for the amplification using plasmid containing genes, however, primers ITS66/ITS279 for the amplification of 16-23S rRNA had the highest sensitivity (104 CFU/reaction) for the B. canis-spiked blood samples. According to real-time SYBR PCR assays, primers B4/B5 and ITS66/ITS279 had the sensitivity of 2 ? 101 copy/reaction when using plasmids containing each gene. By plasmid concentration, primers B4/B5 and ITS66/ITS279 had the sensitivity of 1.92 ? 10-2 fg plasmid/reaction and 3.78 ? 10-2 fg plasmid/reaction, respectively. However, primers B4/B5 and ITS66/ITS279 can detect B. canis in spiked blood samples at 1 ?101 CFU/reaction and 1 ?102 CFU/reaction, respectively. Real-time SYBR PCR assay had approximately 103 times more sensitive than PCR assay. According to these results, primers ITS66/ITS279 are appropriate for the detection of B. canis by PCR and primers B4/B5 are appropriate for the detection of B. canis by real-time SYBR PCR assays, respectively. Real-time SYBR PCR assay using primer B4/B5 had the highest sensitivity among the assays and primers using in this studyCanine brucellosis is one of the important zoonotic disease which causes by Brucella canis (B. canis). Canine brucellosis has been reported in Thailand since 1999. Since then, the number of canine brucellosis has been increasing in Thailand. There are several methods for the diagnosis of canine brucellosis such as bacterial culture, 2ME-MPAT, Polymerase chain reaction (PCR) and Real-time PCR. PCR and real-time PCR have advantages over other techniques by less time consume and able to identify current infection. However, there are several PCR and real-time PCR assays using different primers and detection systems for the detection of Brucella spp. The purpose of this study is to compare the sensitivity of PCR and real-time SYBR PCR using different set of primers for the selection of the appropriate primers and detection system for the diagnosis of canine brucellosis in Thailand. All 4 PCR assays using 4 primer sets for the detection of 16S rRNA, bcsp31, bp26 and 16S-23S-rRNA can amplify targets specifically. For three real-time SYBR PCR assays, 2 primer sets for the amplification of bcsp31 and 16S-23S rRNA can amplify specifically but a primer set for the amplication of alk-B-IS711 gave a non-specific result. According to PCR assays, primers B4/B5 for the amplification of bcsp31 had the highest sensitivity (104 copy/reaction or 19.2 fg/reaction) for the amplification using plasmid containing genes, however, primers ITS66/ITS279 for the amplification of 16-23S rRNA had the highest sensitivity (104 CFU/reaction) for the B. canis-spiked blood samples. According to real-time SYBR PCR assays, primers B4/B5 and ITS66/ITS279 had the sensitivity of 2 ? 101 copy/reaction when using plasmids containing each gene. By plasmid concentration, primers B4/B5 and ITS66/ITS279 had the sensitivity of 1.92 ? 10-2 fg plasmid/reaction and 3.78 ? 10-2 fg plasmid/reaction, respectively. However, primers B4/B5 and ITS66/ITS279 can detect B. canis in spiked blood samples at 1 ?101 CFU/reaction and 1 ?102 CFU/reaction, respectively. Real-time SYBR PCR assay had approximately 103 times more sensitive than PCR assay. According to these results, primers ITS66/ITS279 are appropriate for the detection of B. canis by PCR and primers B4/B5 are appropriate for the detection of B. canis by real-time SYBR PCR assays, respectively. Real-time SYBR PCR assay using primer B4/B5 had the highest sensitivity among the assays and primers using in this study
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
คำสำคัญ: การเปรียบเทีย
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

เกษกนก ศิรินฤมิตร (กมลพัฒนะ). "การเปรียบเทียบความไวและความจำเพาะระหว่าง 4 คู่ไพรเมอร์ยีน ที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และ 3 คู่ไพรเมอร์ยีนที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาเรียวทามลูกโซ่โพลีเมอร์เลส สำหรับการตรวจหาเชื้อแบคทีเรีย Brucella canisComparison sensitivity and specificity between four pairs of primer specific for four different genes using PCR and three pairs of primer specific forthree different genes using real-time PCR for detection ofBrucella canis". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2552

เกษกนก ศิรินฤมิตร (กมลพัฒนะ). "การเปรียบเทียบความไวและความจำเพาะระหว่าง 4 คู่ไพรเมอร์ยีน ที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และ 3 คู่ไพรเมอร์ยีนที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาเรียวทามลูกโซ่โพลีเมอร์เลส สำหรับการตรวจหาเชื้อแบคทีเรีย Brucella canisComparison sensitivity and specificity between four pairs of primer specific for four different genes using PCR and three pairs of primer specific forthree different genes using real-time PCR for detection ofBrucella canis". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2552. Print.



TARR Wordcloud:
การเปรียบเทียบความไวและความจำเพาะระหว่าง 4 คู่ไพรเมอร์ยีน ที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลส และ 3 คู่ไพรเมอร์ยีนที่แตกต่างกันโดยการใช้ปฏิกิริยาเรียวทามลูกโซ่โพลีเมอร์เลส สำหรับการตรวจหาเชื้อแบคทีเรีย Brucella canis
เกษกนก ศิรินฤมิตร (กมลพัฒนะ)
มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
30 กันยายน 2552
วิวัฒนาการและการพัฒนาวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เลสเพื่อการตรวจหาเชื้อ Brucella canis ในสุนัข การพัฒนาปฏิกิริยาเรียลทามรีเวอร์สทรานคริปชั่นลูกโซ่โพลีเมอร์เรส สำหรับการตรวจหาปริมาณเชื้อ Feline leukaemia virus การพัฒนาปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรสแบบมัลติเพล็กซ์สำหรับการตรวจเชื้อ Ehrlichia canis Hepatozoon canis และ Babesia canis จากเลือดสุนัข การพัฒนาเทคนิคปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรสแบบมัลติเพล็กซ์เพื่อตรวจหา Babesia spp. และ Ehrlichia canis ในเลือดของสุนัข การใช้สารสกัดจากเปลือกมังคุดเพื่อเป็นสารต้านเชื้อแบคทีเรียในยางธรรมชาติ การใช้เชื้อแบคทีเรียอาศัยในเนื้อเยื่อพืชเพื่อเป็นปุ๋ยชีวภาพสำหรับการปลูกข้าวเพื่อลดความเครียดที่เกิดจากสภาวะน้ำท่วม และสภาวะขาดน้ำ การตรวจวินิจฉัยพยาธิเม็ดเลือดในสุนัขชนิดเออริเชีย เคนิส และบาบีเซีย สปีชี่ส์ โดยการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรสสำหรับศูนย์ชันสูตรโรคสัตว์ มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีราชมงคลตะวันออก การตรวจหาเชื้อแบคทีเรีย Salmonella spp. Vibrio cholerae และ Escherichia coli ในฟาร์มเลี้ยงปลานิลในจังหวัดชลบุรี การศึกษาหาความหลากหลายในระดับรหัสพันธุกรรมใน Arthrospira โดยวิธีการเปรียบเทียบจีโนม: ก้าวแรกสู่การหาตำแหน่งจีโนมเครื่องหมายสำหรับการจัดจำแนกสายพันธุ์ แบบบูรณาการ การวิจัยและพัฒนาการเลี้ยงกุ้งขาวแวนนาไม โดยการเปรียบเทียบวิธีการเลี้ยงแบบพัฒนาหนาแน่นสูง ที่แตกต่างกัน 2 วิธี
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair