สืบค้นงานวิจัย
การคัดเลือกดีเอ็นเอแอปตาเมอร์ที่จำเพาะต่อโปรตีน CP4 EPSPS เพื่อการตรวจสอบถั่วเหลืองดัดแปลงพันธุกรรม
อัจฉราพรรณ ใจเจริญ - กรมวิชาการเกษตร
ชื่อเรื่อง: การคัดเลือกดีเอ็นเอแอปตาเมอร์ที่จำเพาะต่อโปรตีน CP4 EPSPS เพื่อการตรวจสอบถั่วเหลืองดัดแปลงพันธุกรรม
ชื่อเรื่อง (EN): Selection of DNA Aptamers for Detection of CP4 EPSPS Proteinin GM Soybean
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: อัจฉราพรรณ ใจเจริญ
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Adcharapun Chaicharoen
บทคัดย่อ: ถั่วเหลืองดัดแปลงพันธุกรรมต้านทานสารกำจัดวัชพืชไกลโฟเสท ซึ่งมียีน cp4 epsps (5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase) ที่ได้จากแบคทีเรีย Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ CP4 มีการปลูกมากที่สุดในโลก การตรวจติดตามที่แม่นยำ และรวดเร็วจึงเป็นสิ่งจำเป็น เพื่อป้องกันการแพร่กระจายของพืชดัดแปลงพันธุกรรม งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อคัดเลือกดีเอ็นเอแอปตาเมอร์ที่จำเพาะต่อโปรตีน CP4 EPSPS เพื่อนำไปพัฒนาเป็นชุดตรวจสอบถั่วเหลืองดัดแปลงพันธุกรรม โดยนำลำดับกรดอะมิโนของโปรตีน CP4 EPSPS (accession No. AAL67577.1) จากถั่วเหลืองดัดแปลงพันธุกรรม มาแปลงลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนให้มีโคดอนที่เหมาะสมกับการแสดงออกในเซลล์แบคทีเรีย พบว่า โปรตีนลูกผสม CP4 EPSPSที่ผลิตได้ยังคงอิพิโทปที่สามารถทำ ปฏิกิริยากับ แอนติบอดีทางการค้า จึงนำ ไปใช้เป็นแอปตาเจนในการคัดเลือกดีเอ็นเอแอปตาเมอร์ด้วยวิธี Systematic evolution of ligands byexponential enrichment (SELEX) การทดสอบปฏิกิริยากับน้ำคั้นจากเมล็ดถั่วเหลืองดัดแปลงพันธุกรรม คัดเลือกดีเอ็นเอแอปตาเมอร์ ได้ 2 โคลน คือ AptRR-A3 และ AptRR-A5 เมื่อนำ ไปพัฒนาวิธีตรวจสอบแบบ indirect enzyme-linked aptamer assay (ELAA) พบว่า โคลน AptRR-A3ให้ค่า S/N ratio สูงที่สุด คือ 1.56 ส่วนการพัฒนาวิธี sandwich ELAA โดยใช้โคลน AptRR-A5 เป็น capture aptamer และ AptR-A3 เป็น detecting aptamer ให้ค่า S/N ratio สูงที่สุด คือ 1.64 เมื่อนำ วิธี sandwich ELAA ที่พัฒนาขึ้นไปตรวจสอบโปรตีน CP4 EPSPS ในถั่วเหลือง ดัดแปลงพันธุกรรมจำนวน 3 ตัวอย่าง เปรียบเทียบกับชุดตรวจสอบทางการค้า พบว่า วิธี sandwich ELAA ให้ผลที่สอดคล้องกัน แต่ยังคงต้องปรับปรุงประสิทธิภาพให้มีความไวสูงขึ้นต่อไป
บทคัดย่อ (EN): Genetically modified (GM) soybean containing 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (epsps) gene from Agrobacterium tumefaciens strain CP4, which confers resistance to the herbicide glyphosate, have been found with the highest frequency in transgenic plants worldwide. Precise and rapid assay is required to detect the transgenic plants for monitoring the spread of transgenes in the environment. This study focused on the selection of DNA aptamers specific to the CP4 EPSPS protein which can be further applied in the development of GM test kit. The CP4 EPSPS protein (accession No. AAL67577.1) from GM soybean was selected from Genbank and codon optimization was carried out for its gene expression in E. coli. Result showed that the recombinant CP4 EPSPS protein still positively reacted with the commercial antibody, therefore its native epitopes were conserved. This protein was used as an aptagen to select CP4 EPSPS specific DNA aptamers by systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) method. Two DNA aptamers designated AptRR-A3 and AptRR-A5 were selected from the binding affinity test with GM soybean sap. The result showed the highest binding activity at an S/N ratio of 1.64 when using clone AptRR-A5 as capture aptamer and AptRR-A3 as detecting aptamer in sandwich ELAA. Sandwich ELAA was applied to detect CP4 EPSPS protein in three transgenic soybean seed samples and the results were in accordance with those from the commercial enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test kit. However, the sensitivity of the developed sandwich ELAA in this research requires further improvement.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: กรมวิชาการเกษตร
คำสำคัญ: ถั่วเหลืองไบโอเทค
คำสำคัญ (EN): Biotech soybean
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

อัจฉราพรรณ ใจเจริญ. "การคัดเลือกดีเอ็นเอแอปตาเมอร์ที่จำเพาะต่อโปรตีน CP4 EPSPS เพื่อการตรวจสอบถั่วเหลืองดัดแปลงพันธุกรรมSelection of DNA Aptamers for Detection of CP4 EPSPS Proteinin GM Soybean". กรมวิชาการเกษตร. 2561

อัจฉราพรรณ ใจเจริญ. "การคัดเลือกดีเอ็นเอแอปตาเมอร์ที่จำเพาะต่อโปรตีน CP4 EPSPS เพื่อการตรวจสอบถั่วเหลืองดัดแปลงพันธุกรรมSelection of DNA Aptamers for Detection of CP4 EPSPS Proteinin GM Soybean". กรมวิชาการเกษตร. 2561. Print.



TARR Wordcloud:
การคัดเลือกดีเอ็นเอแอปตาเมอร์ที่จำเพาะต่อโปรตีน CP4 EPSPS เพื่อการตรวจสอบถั่วเหลืองดัดแปลงพันธุกรรม
อัจฉราพรรณ ใจเจริญ
กรมวิชาการเกษตร
2561
การสร้างสภาวการณ์โลกร้อนในพื้นที่ไร่ถั่วเหลืองเพื่อประเมินผลกระทบที่มีต่อการเปลี่ยนแปลงคุณภาพสารอาหาร และ การเปลี่ยนแปลงในระดับพันธุกรรม ของถั่วเหลืองพันธุ์สำคัญของประเทศไทย การคัดเลือกฟักทองเพื่อความหลากหลายของทรงผลและคุณภาพผลที่ดี ถั่วเหลือง : อาหารธรรมดาแต่คุณค่ามหาศาล การคัดเลือกพืชบางชนิดที่ไม่สามารถตรึงไนโตรเจนจากอากาศเพื่อใช้เป็นพืชมาตรฐานในการศึกษาปริมาณการตรึงไนโตรเจนของถั่วเหลืองโดย 15 N Dilution Method การใช้ดัชนีทนแล้งคัดพันธุ์ถั่วเหลืองเพื่อปลูกในภาคตะวันออกเฉียงเหนือ การหาตำแหน่งยีนควบคุมปริมาณโปรตีนในถั่วเหลืองโดยเครื่องหมายโมเลกุล SSR เพื่อใช้ปรับปรุงพันธุ์ถั่วเหลืองโปรตีนสูง การปรับปรุงพันธุ์ถั่วเหลืองและถั่วเขียว การจัดการโรคและแมลงเพื่อผลิตถั่วเหลืองและถั่วเหลืองฝักสดอย่างปลอดภัย การเพิ่มระดับของโปรตีนของมันสำ ปะหลังโดยใช้ยีสต์ในกระบวนการหมัก การคัดเลือกสายพันธุ์ถั่วเหลืองที่มีศักยภาพในการตรึงไนโตรเจนสูง
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair