สืบค้นงานวิจัย
การพัฒนาชุดทดสอบสำหรับตรวจหาเชื้อ Burkhloderia pseudomallei โดยเทคนิค hybridization
วงศ์อนันต์ ณรงค์วาณิชการ - กรมปศุสัตว์
ชื่อเรื่อง: การพัฒนาชุดทดสอบสำหรับตรวจหาเชื้อ Burkhloderia pseudomallei โดยเทคนิค hybridization
ชื่อเรื่อง (EN): Development of detection kit for Burkhloderia pseudomallei by hybridization technique
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: วงศ์อนันต์ ณรงค์วาณิชการ
บทคัดย่อ: ชุดทดสอบสำหรับตรวจหาเชื้อ Burkholderia pseudomallei ด้วยเทคนิคไฮบริไดเซชั่นร่วมกับโครมาโตกราฟีได้รับการพัฒนาขึ้น ขั้นแรกทำการสังเคราะห์ตัวติดตามที่ติดและไม่ติดฉลากสารปลอดรังสี Biotin และมีความจำเพาะต่อเชื้อ B. pseudomallei ขึ้น ต่อมาเตรียมแผ่นทดสอบด้วยการหยดดีเอ็นเอสายเดี่ยวของเชื้อตัวอย่าง ตัวติดตามที่ติดและไม่ติดฉลากสารปลอดรังสีลงไปบนแผ่นไนล่อนก่อนตรึงด้วยการฉายแสงอุลตร้าไวโอเลต จากนั้นนำแผ่นทดสอบใส่ในหลอดที่แช่ในอ่างน้ำร้อนอุณหภูมิ 70oC ซึ่งภายในหลอดมีตัวติดตามที่ติดฉลากผสมกับสารละลายไฮบริไดเซชั่นอยู่ 25 ?l และจะถูกดูดซึมขึ้นไปบนแผ่นทดสอบอย่างรวดเร็วด้วยหลักการโครมาโตกราฟีที่มีความร้อนเป็นตัวเร่ง ตัวติดตามที่ติดฉลากที่ถูกดูดซึมขึ้นไปนั้น จะทำปฏิกิริยาไฮบริไดเซชั่นกับดีเอ็นเอที่ติดบนแผ่นทดสอบ จากนั้นป้องกันพื้นผิวส่วนอื่นของแผ่นทดสอบโดยล้างตัวติดตามที่ติดฉลากที่มากเกินออกไป ภายหลังจากนำแผ่นทดสอบไปแช่ในสารละลาย streptavidin-alkaline phosphatase และ NBT/BCIP ตามลำดับ จึงสามารถสังเกตผลการทดสอบได้ ในกรณีที่เป็นเชื้ออื่นๆ จะไม่พบการเปลี่ยนแปลงใดๆ แต่ถ้าเป็นเชื้อ B. pseudomallei จะเห็นสีม่วงหรือน้ำเงินติดอยู่ตรงตำแหน่ง ที่หยดดีเอ็นเอเชื้อตัวอย่าง เช่นเดียวกับตำแหน่งที่หยดตัวติดตามที่ติดฉลากลงไปเพื่อควบคุมปฏิกิริยาการเกิดสี และตำแหน่งที่หยดตัวติดตามที่ไม่ติดฉลากลงไปเพื่อควบคุมตัวติดตามที่ติดฉลากที่ผสมอยู่ในสารละลายไฮบริไดเซชั่น ดังนั้น ชุดทดสอบที่ได้รับการพัฒนาขึ้นโดยเทคนิคไฮบริไดเซชั่นร่วมกับโครมาโตกราฟีนี้ เป็นวิธีที่ใช้ง่าย สะดวก ให้ผลรวดเร็ว อย่างไรก็ตาม ชุดทดสอบนี้สามารถพัฒนาต่อยอดเพื่อให้เหมาะกับการทดสอบเชื้อที่อยู่ในตัวอย่างเนื้อเยื่อหรือรอยโรคต่างๆโดยตรง คำสำคัญ : ชุดทดสอบ, Burkholderia pseudomalei, hybridization 1. กลุ่มชีวเคมีและพิษวิทยา สถาบันสุขภาพสัตว์แห่งชาติ กรมปศุสัตว์ 2. กลุ่มแบคทีเรียและเชื้อรา สถาบันสุขภาพสัตว์แห่งชาติ กรมปศุสัตว์ การพัฒนาชุดทดสอบสำหรับตรวจหาเชื้อ Burkholderia pseudomallei โดยเทคนิค Paper chromatography dot blot hybridization วงศ์อนันต์ ณรงค์วาณิชการ1* วัชรชัย ณรงค์ศักดิ์2 อุบลรัตน์ แทนกลาง2 * ผู้รับผิดชอบบทความ โทร. 02-5798908-14 e-mail: rhchu@hotmail.com
บทคัดย่อ (EN): A rapid test kit based on hybridization and chromatography technique was developed for detection Burkholderia pseudomallei. First biotin labeled probe and non-labeled PCR product specific for B. pseudomallei were synthesized. Next the test strip was prepared by blot single strain of test sample DNA, non-labeled PCR product and probe onto nylon membrane and fixed by UV crosslink. Then the tested strip was placed into 25 ?l hybridization solution contained with biotin labeled probe. Based on chromatographic technique which accelerated by 70oC waterbath, probe will migrate speedy onto nylon membrane and hybridize to a complementary DNA that is immobilized on a nylon strip. After washed out and blocked the excess probe, dip the strip to streptavidin-alkaline phosphatase and NBT/BCIP solution respectively to develop the signal. Negative result mean another microorganisms are nothing shown at the blot position, while B. pseudomallei DNA spot which trap the probe will shown violet or blue color, as same as probe spot for control the developing reaction, and non-labeled PCR product dot for control the probe. This hybridization combine chromatography test kit offers a fast, convenient and simple tool for B. pseudomallei detection. However, additional work will be needed to simplify methods for direct detection of the bacteria in affected tissue samples. Keyword: Burkholderia pseudomalleii, hybridization, test kit 1. Biochemistry and toxicology section, National Institute of Animal Health, Department of Livestock Development 2. Bacteriology section, National Institute of Animal Health, Department of Livestock Development Development of Burkholderia pseudomallei detection kit by paper chromatography dot blot hybridization technique Wonganun Narongwanichgarn1* Wacharachai Narongsak2 Ubonrat Thanklang2 * Correspondence author Tel. 02-5798908-14 e-mail: rhchu@hotmail.com
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: กรมปศุสัตว์
คำสำคัญ: ชุดทดสอบ
คำสำคัญ (EN): Burkholderia pseudomallei
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

วงศ์อนันต์ ณรงค์วาณิชการ. "การพัฒนาชุดทดสอบสำหรับตรวจหาเชื้อ Burkhloderia pseudomallei โดยเทคนิค hybridizationDevelopment of detection kit for Burkhloderia pseudomallei by hybridization technique". กรมปศุสัตว์. 2551

วงศ์อนันต์ ณรงค์วาณิชการ. "การพัฒนาชุดทดสอบสำหรับตรวจหาเชื้อ Burkhloderia pseudomallei โดยเทคนิค hybridizationDevelopment of detection kit for Burkhloderia pseudomallei by hybridization technique". กรมปศุสัตว์. 2551. Print.



TARR Wordcloud:
การพัฒนาชุดทดสอบสำหรับตรวจหาเชื้อ Burkhloderia pseudomallei โดยเทคนิค hybridization
วงศ์อนันต์ ณรงค์วาณิชการ
กรมปศุสัตว์
2551
กรมปศุสัตว์
การพัฒนาชุดเครื่องปั้นเม็ดปุ๋ยชีวภาพแบบจานสำหรับครัวเรือน การทดสอบเทคนิคการเก็บเกี่ยวหน่อไม้ฝรั่ง ชุดทดสอบคุณภาพน้ำนมดิบ การตรวจหาแบคทีเรียในอาหารบางชนิด การพัฒนากระดาษสาสำหรับการกรองฝุ่น การหาเชื้อแบคทีเรียที่มีความไวสูงต่อยาหลายชนิด เพื่อนำมาใช้ตรวจหายาตกค้างในน้ำนม : รายงานผลการวิจัย งานวิจัยเรื่อง ชุดทดสอบหาสารปราบศัตรูพืชที่ตกค้างในผัก รายงานวิจัยฉบับสมบูรณ์ การพัฒนาชุดทดสอบสารฆ่าแมลงที่ตกค้างในผักและผลไม้ การบีบอัดข้อมูลในเครือข่ายตรวจรู้ไร้สายสำหรับประยุกต์ใช้งานด้านเกษตรกรรมด้วยเทคนิคทางปัญญาประดิษฐ์ ปฏิกิริยาการเป็นโรคราน้ำค้างของแตงกวา 4 ชุดทดสอบ
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair