สืบค้นงานวิจัย
ระบบการย้ายยีนเข้าสู่พลาสติดเพื่อการผลิตเวชภัณฑ์ในต้นยาสูบ
Tarinee Tungsuchat - มหาวิทยาลัยมหิดล
ชื่อเรื่อง: ระบบการย้ายยีนเข้าสู่พลาสติดเพื่อการผลิตเวชภัณฑ์ในต้นยาสูบ
ชื่อเรื่อง (EN): Transplastomic system for production of pharmaceutical product in tobacco
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Tarinee Tungsuchat
บทคัดย่อ: วิธีการย้ายยีนเข้าสู่พลาสติดได้มีการพัฒนาและใช้กันอย่างแพร่หลายมาเป็นเวลามากกว่า 10 ปี พลาสติดเป็นเป้าหมายที่น่าสนใจ ในการตัดต่อเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมและการผลิตโปรตีนสายผสม เนื่องจากการย้ายยีนเข้าสู่พลาสติดมีข้อได้เปรียบหลายด้านเมื่อ เทียบกับการย้ายยีนเข้าสู่นิวเคลียส งานวิจัยนี้ได้ทำการศึกษาเกี่ยวกับการย้ายยีนและระบบการกระตุ้นยีนให้แสดงออกในพลาสติด รวมถึงศึกษาเกี่ยวกับการผลิตโปรตีนสายผสมในพลาสติดที่สังเคราะห์แสง สำหรับระบบการกระตุ้นให้ยีนแสดงออกในพลาสติดนั้น เราได้ใช้ระบบ CRE-loxP site-specific recombination ในการทดสอบระบบนี้ ยีนเครื่องหมายสำหรับต้าน spectinomycin หรือยีน aadA ได้เชื่อมต่อกับยีน gfp* ที่ไม่แสดงออก แล้วทำการย้ายยีนเข้าสู่จีโนมของพลาสติด ยีนaadA เป็นเสมือน sequence ที่กั้นกลาง และยีนนี้ถูกขนาบข้างด้วย lox-P site 2 อันที่เหมือนกันและไปในทิศทางเดียวกัน ในสภาวะที่ไม่มีเอนไซม์ CRE ยีน gfp* จะ สังเคราะห์ mRNAได้ แต่จะไม่สามารถถอดรหัสเป็นโปรตีนได้เนื่องจากขาด AUG ซึ่งเป็นรหัสเริ่มต้นในการถอดรหัสจาก mRNA เป็นโปรตีน ดังนั้นจึงไม่สามารถตรวจพบ GFP โปรตีนได้ในสภาวะดังกล่าว ในสภาวะกระตุ้นยีน aadA จะถูกตัดออกไปโดยเอนไซม์ CRE เป็นผลให้ยีน gfp* ถูกกระตุ้นและถอดรหัสเป็นโปรตีนได้โดยยีน gfp* จะเลื่อนขึ้นมาต่อกับรหัส AUG ของยีน aadA ระบบการ กระตุ้นให้ยีนแสดงออกในพลาสติดนี้จะสามารถช่วยในการศึกษา function ของยีนในพลาสติด และ การแสดงออกของโปรตีนสาย ผสมในพลาสติดได้ สำหรับการผลิตโปรตีนสายผสมในพลาสติดนั้น ยีน surface antigen ของไวรัสตับอักเสบบี หรือ HBsAg ได้ถูกนำมาใช้เป็น ต้นแบบ โปรตีนห่อหุ้มของไวรัสตับอักเสบบี ประกอบไปด้วยส่วนที่เป็น surface antigen ซึ่งเป็นโปรตีน transmembrane ประเภท หนึ่ง HBsAgได้ถูกนำไปทำเป็นวัคซีน และผลิตเป็นการค้าในยีสต์ ในการตรวจสอบว่าโปรตีนของไวรัสสามารถผลิตในคลอโร- พลาสท์ของต้นยาสูบได้หรือไม่นั้น ยีนจำลอง HBsAgPt ได้ถูกสังเคราะห์ขึ้นและทำการย้ายยีนนี้เข้าสู่พลาสติดของต้นยาสูบ ผลการ ทดลองบ่งชี้ว่า มีการสะสมโปรตีน HBsAg ในยีนที่มีการถอดรหัสร่วมกับ N-terminus ของ ยีน ATP-ase เบต้า subunit (atpB)ในพลา- สติดเท่านั้น ซึ่งอาจเป็นไปได้ว่า การเชื่อมต่อยีนกับ N-terminus จะช่วยทำให้โปรตีนสายผสมของ HBsAg มีเสถียรภาพดีขึ้น นอกจากนี้พบว่า โปรตีนสายผสมมีการสะสมใน soluble fraction น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05% ของโปรตีนทั้งหมด และใน membrane fraction ในปริมาณน้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.01% ของโปรตีนทั้งหมด พลาสติดที่มีการสะสมของโปรตีนที่เชื่อมต่อกับส่วนของ atpB นั้นพบว่าเม็ดสีขาดหายไป ซึ่งการขาดหายไปของเม็ดสีนี้ไม่เคยมีรายงานมาก่อนแม้ว่าปริมาณสะสมของโปรตีนอื่น ๆ ในพลาสติดจะ มากถึง 20% ของปริมาณโปรตีนจากเซลล์ทั้งหมด การขาดหายไปของเม็ดสีในพืชที่มีการสะสมโปรตีนสายผสม atpB-HBsAg นี้อาจ อธิบายได้ว่าโปรตีนสายผสมนี้ไปรบกวนการรวมตัวของ ATP-ase complex และ/หรือ โปรตีนสายผสมไปแทรกตัวอยู่ใน photosynthetic membranes การทดลองนี้อาจจะเป็นก้าวแรกที่นำไปสู่การผลิต HBsAg โปรตีนในระดับการค้า และอาจจะใช้ ประโยชน์ในการศึกษาการแสดงออกของโปรตีน membrane ในคลอโรพลาสท์
บทคัดย่อ (EN): subunit, suggesting stabilization of the recombinant HBsAg by the N-terminal fusion. The recombinant protein accumulated in both the soluble (<0.05% of total protein) and membrane fractions (<0.01% of total protein). Plastids containing the atpB-HBsAg fusion protein were pigment deficient. No comparable pigment deficiency was reported in plastids expressing other proteins, even if the recombinant protein accumulated in excess of 20% of the total soluble cellular protein. Pigment deficiency of the atpB-HBsAg expressing plants may be caused by interference with the assembly of ATP-ase complex and/or by insertion of the fusion protein into the photosynthetic membranes. The experiments reported here provide a useful starting point for developing a possible commercial system for HBsAg expression and will be a useful model to study expression of membrane proteins in chloroplasts.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://dcms.thailis.or.th/dcms/dccheck.php?Int_code=126&RecId=4210&obj_id=3584
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยมหิดล
คำสำคัญ (EN): Tobacco
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยมหิดล
รายละเอียด: วิธีการย้ายยีนเข้าสู่พลาสติดได้มีการพัฒนาและใช้กันอย่างแพร่หลายมาเป็นเวลามากกว่า 10 ปี พลาสติดเป็นเป้าหมายที่น่าสนใจ ในการตัดต่อเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมและการผลิตโปรตีนสายผสม เนื่องจากการย้ายยีนเข้าสู่พลาสติดมีข้อได้เปรียบหลายด้านเมื่อ เทียบกับการย้ายยีนเข้าสู่นิวเคลียส งานวิจัยนี้ได้ทำการศึกษาเกี่ยวกับการย้ายยีนและระบบการกระตุ้นยีนให้แสดงออกในพลาสติด รวมถึงศึกษาเกี่ยวกับการผลิตโปรตีนสายผสมในพลาสติดที่สังเคราะห์แสง สำหรับระบบการกระตุ้นให้ยีนแสดงออกในพลาสติดนั้น เราได้ใช้ระบบ CRE-loxP site-specific recombination ในการทดสอบระบบนี้ ยีนเครื่องหมายสำหรับต้าน spectinomycin หรือยีน aadA ได้เชื่อมต่อกับยีน gfp* ที่ไม่แสดงออก แล้วทำการย้ายยีนเข้าสู่จีโนมของพลาสติด ยีนaadA เป็นเสมือน sequence ที่กั้นกลาง และยีนนี้ถูกขนาบข้างด้วย lox-P site 2 อันที่เหมือนกันและไปในทิศทางเดียวกัน ในสภาวะที่ไม่มีเอนไซม์ CRE ยีน gfp* จะ สังเคราะห์ mRNAได้ แต่จะไม่สามารถถอดรหัสเป็นโปรตีนได้เนื่องจากขาด AUG ซึ่งเป็นรหัสเริ่มต้นในการถอดรหัสจาก mRNA เป็นโปรตีน ดังนั้นจึงไม่สามารถตรวจพบ GFP โปรตีนได้ในสภาวะดังกล่าว ในสภาวะกระตุ้นยีน aadA จะถูกตัดออกไปโดยเอนไซม์ CRE เป็นผลให้ยีน gfp* ถูกกระตุ้นและถอดรหัสเป็นโปรตีนได้โดยยีน gfp* จะเลื่อนขึ้นมาต่อกับรหัส AUG ของยีน aadA ระบบการ กระตุ้นให้ยีนแสดงออกในพลาสติดนี้จะสามารถช่วยในการศึกษา function ของยีนในพลาสติด และ การแสดงออกของโปรตีนสาย ผสมในพลาสติดได้ สำหรับการผลิตโปรตีนสายผสมในพลาสติดนั้น ยีน surface antigen ของไวรัสตับอักเสบบี หรือ HBsAg ได้ถูกนำมาใช้เป็น ต้นแบบ โปรตีนห่อหุ้มของไวรัสตับอักเสบบี ประกอบไปด้วยส่วนที่เป็น surface antigen ซึ่งเป็นโปรตีน transmembrane ประเภท หนึ่ง HBsAgได้ถูกนำไปทำเป็นวัคซีน และผลิตเป็นการค้าในยีสต์ ในการตรวจสอบว่าโปรตีนของไวรัสสามารถผลิตในคลอโร- พลาสท์ของต้นยาสูบได้หรือไม่นั้น ยีนจำลอง HBsAgPt ได้ถูกสังเคราะห์ขึ้นและทำการย้ายยีนนี้เข้าสู่พลาสติดของต้นยาสูบ ผลการ ทดลองบ่งชี้ว่า มีการสะสมโปรตีน HBsAg ในยีนที่มีการถอดรหัสร่วมกับ N-terminus ของ ยีน ATP-ase เบต้า subunit (atpB)ในพลา- สติดเท่านั้น ซึ่งอาจเป็นไปได้ว่า การเชื่อมต่อยีนกับ N-terminus จะช่วยทำให้โปรตีนสายผสมของ HBsAg มีเสถียรภาพดีขึ้น นอกจากนี้พบว่า โปรตีนสายผสมมีการสะสมใน soluble fraction น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05% ของโปรตีนทั้งหมด และใน membrane fraction ในปริมาณน้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.01% ของโปรตีนทั้งหมด พลาสติดที่มีการสะสมของโปรตีนที่เชื่อมต่อกับส่วนของ atpB นั้นพบว่าเม็ดสีขาดหายไป ซึ่งการขาดหายไปของเม็ดสีนี้ไม่เคยมีรายงานมาก่อนแม้ว่าปริมาณสะสมของโปรตีนอื่น ๆ ในพลาสติดจะ มากถึง 20% ของปริมาณโปรตีนจากเซลล์ทั้งหมด การขาดหายไปของเม็ดสีในพืชที่มีการสะสมโปรตีนสายผสม atpB-HBsAg นี้อาจ อธิบายได้ว่าโปรตีนสายผสมนี้ไปรบกวนการรวมตัวของ ATP-ase complex และ/หรือ โปรตีนสายผสมไปแทรกตัวอยู่ใน photosynthetic membranes การทดลองนี้อาจจะเป็นก้าวแรกที่นำไปสู่การผลิต HBsAg โปรตีนในระดับการค้า และอาจจะใช้ ประโยชน์ในการศึกษาการแสดงออกของโปรตีน membrane ในคลอโรพลาสท์
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

Tarinee Tungsuchat. "ระบบการย้ายยีนเข้าสู่พลาสติดเพื่อการผลิตเวชภัณฑ์ในต้นยาสูบTransplastomic system for production of pharmaceutical product in tobacco". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2549

Tarinee Tungsuchat. "ระบบการย้ายยีนเข้าสู่พลาสติดเพื่อการผลิตเวชภัณฑ์ในต้นยาสูบTransplastomic system for production of pharmaceutical product in tobacco". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2549. Print.



TARR Wordcloud:
ระบบการย้ายยีนเข้าสู่พลาสติดเพื่อการผลิตเวชภัณฑ์ในต้นยาสูบ
Tarinee Tungsuchat
มหาวิทยาลัยมหิดล
2549
การศึกษาคุณสมบัติของยีนมะเร็งของไวรัส HPV16 : ความหลากหลายของยีน แหล่งที่อยู่และหน้าที่การกระตุ้นการแสดงออกของยีน การปรับปรุงประสิทธิภาพการผลิตแผ่นคริสตัลแบลงค์โดยใช้ระบบผลิตแบบลีน การศึกษาขั้นต้นของการใช้ระบบเก็บความร้อนแฝงเพื่ออนุรักษ์พลังงานในกระบวนการอบแห้ง การศึกษาเปรียบเทียบคุณภาพน้ำเชื้อและต้นทุนการผลิตน้ำเชื้อของสุกรพ่อพันธุ์ที่เลี้ยงภายในโรงเรือนระบบเปิด และโรงเรือนระบบปิดแบบระเหยไอเย็นจากน้ำ ผลกระทบของมาตราการว่าด้วยการควบคุมยาสูบที่มีต่อเกษตรกรชาวไร่ยาสูบในจังหวัดเชียงใหม่ การผลิตไฮโดรเจนจากน้ำมันปาล์ม การผลิตเอนไซม์ Class C [beta]-Lactamase จากพลาสมิดในเชื้อแบคทีเรียกรัมลบ ประสิทธิภาพของระบบบำบัดร่วมระหว่างฟิล์มชีวะกับระบบตะกอนเร่งในการบำบัดน้ำเสียชุมชน การศึกษาโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับกลไกการควบคุมการถอดรหัสของยีนที่ไม่แสดงออกในพืชที่ผ่านการถ่ายยีน การศึกษาประสิทธิภาพของการยื่นสูตรการผลิตระบบอิเล็กทรอนิคส์ ตามมาตรา 19 ทวิ
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair