สืบค้นงานวิจัย
การสกัดและการศึกษาคุณสมบัติของ recombinant dengue envelope protein ที่ผลิตได้จาก Baculovirus Expression Insect Cell Systems
สิริรัตน์ อนันตวรสกุล - มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
ชื่อเรื่อง: การสกัดและการศึกษาคุณสมบัติของ recombinant dengue envelope protein ที่ผลิตได้จาก Baculovirus Expression Insect Cell Systems
ชื่อเรื่อง (EN): Purification and Characterization of Recombinant Dengue Envelope Protein from Baculovirus Expression Insect Cell Systems
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: สิริรัตน์ อนันตวรสกุล
บทคัดย่อ (EN): Envelope protein is a structural protein of Dengue virus, a major cause of pediatric morbidity and mortality dengue hemorrhagic fever (DHF). This antigenic protein contains epitopes that induced neutralizing, hemagglutinin antibodies and elicited protective immune response in dengue virus patient. This study focused on purification and characterization of recombinant envelope protein produced from Baculovirus Expression Insect Cell System that is aimed to be used as protein antigen for diagnosis of dengue infection.In the Baculovirus Expression Insect Cell System, insect cells were used as host for the production of recombinant envelope protein when being infected by genetic engineered recombinant envelope baculovirus that dengue envelope gene was inserted into baculovirus genome. The recombinant envelope protein was detected in infected cells by Western blot analysis using monoclonal antibody (3H5) specific to dengue envelope protein. The recombinant envelope protein at molecular mass of approximately 57.8 kDa was identified. When compared its molecular weight with recombinant envelope protein produced by E. coli (55.3 kDa), it was suggested that recombinant envelope protein from insect cells might be a glycosylated protein.Purifications of recombinant envelope protein were performed using cation exchange chromatography and metal ion affinity chromatography (IMAC). Recombinant envelope protein bound to cation exchanger under native condition and could be eluted by elute buffer contained 0.25 M NaCl. Recombinant envelope protein was found to bind to Co2+ immobilized resin (IMAC) under denaturing condition and could be eluted by elute buffer contained 0.2 M imidazole. These results suggested that recombinant envelope protein could therefore be partially purified by both methods. The recombinant envelope protein is a glycoprotein as confirmed by N-glycosidase F treatment. The stability of recombinant envelope protein kept at -20?C (in infected Sf-9 cells) for 0-6 months was examined. After 2 months, the stability of recombinant envelope protein declined, to the level of 71% within 6 months. The interactions between recombinant envelope protein and monoclonal antibodies, specific to various epitopes of dengue envelope protein were studied. The recombinant envelope protein from insect cell was shown to be a better antigen than the recombinant envelope protein from bacteria. In addition, the recombinant envelope protein from insect cell was shown to be specifically reacted with pooled convalescent sera but not with pooled normal sera as demonstrated by dot blot analysis. These results indicated the possibility of using the recombinant envelope protein for the development of a new dengue virus diagnostic kit in the future.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://dcms.thailis.or.th/dcms/dccheck.php?Int_code=54&RecId=5543&obj_id=16018
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
คำสำคัญ (EN): Recombinan
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
รายละเอียด: Envelope protein is a structural protein of Dengue virus, a major cause of pediatric morbidity and mortality dengue hemorrhagic fever (DHF). This antigenic protein contains epitopes that induced neutralizing, hemagglutinin antibodies and elicited protective immune response in dengue virus patient. This study focused on purification and characterization of recombinant envelope protein produced from Baculovirus Expression Insect Cell System that is aimed to be used as protein antigen for diagnosis of dengue infection.In the Baculovirus Expression Insect Cell System, insect cells were used as host for the production of recombinant envelope protein when being infected by genetic engineered recombinant envelope baculovirus that dengue envelope gene was inserted into baculovirus genome. The recombinant envelope protein was detected in infected cells by Western blot analysis using monoclonal antibody (3H5) specific to dengue envelope protein. The recombinant envelope protein at molecular mass of approximately 57.8 kDa was identified. When compared its molecular weight with recombinant envelope protein produced by E. coli (55.3 kDa), it was suggested that recombinant envelope protein from insect cells might be a glycosylated protein.Purifications of recombinant envelope protein were performed using cation exchange chromatography and metal ion affinity chromatography (IMAC). Recombinant envelope protein bound to cation exchanger under native condition and could be eluted by elute buffer contained 0.25 M NaCl. Recombinant envelope protein was found to bind to Co2+ immobilized resin (IMAC) under denaturing condition and could be eluted by elute buffer contained 0.2 M imidazole. These results suggested that recombinant envelope protein could therefore be partially purified by both methods. The recombinant envelope protein is a glycoprotein as confirmed by N-glycosidase F treatment. The stability of recombinant envelope protein kept at -20?C (in infected Sf-9 cells) for 0-6 months was examined. After 2 months, the stability of recombinant envelope protein declined, to the level of 71% within 6 months. The interactions between recombinant envelope protein and monoclonal antibodies, specific to various epitopes of dengue envelope protein were studied. The recombinant envelope protein from insect cell was shown to be a better antigen than the recombinant envelope protein from bacteria. In addition, the recombinant envelope protein from insect cell was shown to be specifically reacted with pooled convalescent sera but not with pooled normal sera as demonstrated by dot blot analysis. These results indicated the possibility of using the recombinant envelope protein for the development of a new dengue virus diagnostic kit in the future.
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

สิริรัตน์ อนันตวรสกุล. "การสกัดและการศึกษาคุณสมบัติของ recombinant dengue envelope protein ที่ผลิตได้จาก Baculovirus Expression Insect Cell SystemsPurification and Characterization of Recombinant Dengue Envelope Protein from Baculovirus Expression Insect Cell Systems". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี. 2545

สิริรัตน์ อนันตวรสกุล. "การสกัดและการศึกษาคุณสมบัติของ recombinant dengue envelope protein ที่ผลิตได้จาก Baculovirus Expression Insect Cell SystemsPurification and Characterization of Recombinant Dengue Envelope Protein from Baculovirus Expression Insect Cell Systems". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี. 2545. Print.



TARR Wordcloud:
การสกัดและการศึกษาคุณสมบัติของ recombinant dengue envelope protein ที่ผลิตได้จาก Baculovirus Expression Insect Cell Systems
สิริรัตน์ อนันตวรสกุล
มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
2545
Optimization of Recombinant Hemagglutinin Protein Production from Baculovirus Expression Vector System การศึกษาการแสดงออกของยีนไคติเนสจาก Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus [HaNPV] สายพันธุ์ไทยใน baculovirus expression insect cell system ผลิตภาพของปัจจัยการผลิตโดยรวมของการผลิตอ้อยเพื่อใช้ผลิตเอทานอลใน อำเภอแม่สอด จังหวัดตาก การลดเวลานำในการผลิตและงานระหว่างผลิตในการผลิตตู้นิรภัยโดยใช้เทคนิคการผลิตแบบลีน การวางแผนการผลิตเพื่อเพิ่มผลผลิตของโรงงานผลิตอาหารเสริม การเคลื่อนย้ายการใช้ปัจจัยการผลิตจากการผลิตขี้โยไปเป็นการผลิตฝิ่น ในเขตปกครองพิเศษ 6 รัฐฉาน ประเทศพม่า การเพิ่มผลิตภาพในสายการผลิตแหวนและกำไลทองคำ ในการผลิตเม็ดสี การศึกษาความเป็นไปได้ในการตั้งโรงงานผลิตเอทานอลขนาดเล็กจากมันสำปะหลังเพื่อใช้ผลิตเป็นแก๊สโซฮอล์ การจัดทำระบบการประสานงานและการติดต่อสื่อสารในฝ่ายผลิตสำหรับโรงงานผลิตบรรจุภัณฑ์พลาสติก
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair