สืบค้นงานวิจัย
ทรานสฟอร์เมชั่นของสาหร่ายเกลียวทอง (Spirulina platensis)
ศรีสุพร กนกศิลป์ - มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
ชื่อเรื่อง: ทรานสฟอร์เมชั่นของสาหร่ายเกลียวทอง (Spirulina platensis)
ชื่อเรื่อง (EN): Transformatiom Spirulina platensis
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: ศรีสุพร กนกศิลป์
บทคัดย่อ (EN): The aim of the thesis is to develop a gene transfersystem for Spirulina platensis Italy strain. The methodused was a transformation system using chemical transformationand electroporation as means to introduce DNA into the cells.Plasmids used were choloramphenicol based vectors derived fromplasmids o f Escherichia coli namely pKT210, pBR328,pACYC184 a n d pSI4. pSI4, in particular, was a hybrid plasmidbetween pKK232-8, a promoter probe containing chloramphenicolacetyltransferase gene (CAT), and a piece of promoter DNA fromS.platensis front of the CAT gene.For chemical transformation, spheroplasts o f S.platensiswere employed as a host and the plasmids used were pKT210,pBR328, pACYC184. After incubation in 40% PEG and 10 mM CaC12,the transformation mix was illuminated at room temperature underwhite fluorescent 1 ight of about 35.4 )1E/m2/s for 24 hoursbefore plating onto Zarouk medium supplemented with 10 pg/mlchloramphenicol. The results showed that there was notransformant appeared on the selection plate.Subsequently, transformation system by electroporationwas developed for S.platensis Italy strain. S.platensiswas electrotransformed to chloramphenicol resistance usingchloramphenicol based vectors the same as those used for thechemical transformation including pSI4. For electroporation,cells in the early log phase (either in the form of trichome orsonicated cells) at a concentration of 3 x lo7 cells in40 pl of 1 mM HEPES, pH 7.2, mixed with 2 ~1 of vector (5 pg)was applied with a single electric pulse by an electroporationdevice at a field strength of 4 kV/cm, 200 Ohms, a capacitance of25 UF, and a time constant of 5 ms. After the application of thepulse, the suspension of the cells was diluted with 1 millilitre ofZarouk medium and illuminated at room temperature under whitefluorescent light of about 35.4 U/m2/s for 24 hours. Transformantswere selected by plating the transformation mix onto a Zarouk agarplate supplemented with chloramphenicol (5 pg/ml). Chloramphenicolresistant colonies appeared within 5 days with a frequency of 343and 860 transformants per microgram of DNA for pACYC184 and pSI4,respectively, while there was no transformants on the selectionplate when electrotransformed 5. platensis with pACYC184 andpKT210. The transformant survived on the selection plate for 16 to20 days. However, the transformants obtained were unstable uponsubculturing into the medium containing chloramphenicol at aconcentration of 5 ug/ml.It is necessary to allow 24 hours incubation for thetransformants to express the chloramphenicol resistant gene beforeexposing to chloramphenicol on the regeneration medium.To investigate whether these chloramphenicol resistance wasa result of the transformed gene, DNA of the transformants fromplasmid pS14 w a s amplified using PCR technique. It was found thatplasmid pSI4 e x i s t e d i n the cells of the transformants. However,when the DNA of the transformants which were subsequentlytransferred to the medium without chloramphenicol was tested bySouthern hybridization, there was no sign of the plasmid. This mayexplain the instability of the transformants.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://dcms.thailis.or.th/dcms/dccheck.php?Int_code=54&RecId=4481&obj_id=12815
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
รายละเอียด: The aim of the thesis is to develop a gene transfersystem for Spirulina platensis Italy strain. The methodused was a transformation system using chemical transformationand electroporation as means to introduce DNA into the cells.Plasmids used were choloramphenicol based vectors derived fromplasmids o f Escherichia coli namely pKT210, pBR328,pACYC184 a n d pSI4. pSI4, in particular, was a hybrid plasmidbetween pKK232-8, a promoter probe containing chloramphenicolacetyltransferase gene (CAT), and a piece of promoter DNA fromS.platensis front of the CAT gene.For chemical transformation, spheroplasts o f S.platensiswere employed as a host and the plasmids used were pKT210,pBR328, pACYC184. After incubation in 40% PEG and 10 mM CaC12,the transformation mix was illuminated at room temperature underwhite fluorescent 1 ight of about 35.4 )1E/m2/s for 24 hoursbefore plating onto Zarouk medium supplemented with 10 pg/mlchloramphenicol. The results showed that there was notransformant appeared on the selection plate.Subsequently, transformation system by electroporationwas developed for S.platensis Italy strain. S.platensiswas electrotransformed to chloramphenicol resistance usingchloramphenicol based vectors the same as those used for thechemical transformation including pSI4. For electroporation,cells in the early log phase (either in the form of trichome orsonicated cells) at a concentration of 3 x lo7 cells in40 pl of 1 mM HEPES, pH 7.2, mixed with 2 ~1 of vector (5 pg)was applied with a single electric pulse by an electroporationdevice at a field strength of 4 kV/cm, 200 Ohms, a capacitance of25 UF, and a time constant of 5 ms. After the application of thepulse, the suspension of the cells was diluted with 1 millilitre ofZarouk medium and illuminated at room temperature under whitefluorescent light of about 35.4 U/m2/s for 24 hours. Transformantswere selected by plating the transformation mix onto a Zarouk agarplate supplemented with chloramphenicol (5 pg/ml). Chloramphenicolresistant colonies appeared within 5 days with a frequency of 343and 860 transformants per microgram of DNA for pACYC184 and pSI4,respectively, while there was no transformants on the selectionplate when electrotransformed 5. platensis with pACYC184 andpKT210. The transformant survived on the selection plate for 16 to20 days. However, the transformants obtained were unstable uponsubculturing into the medium containing chloramphenicol at aconcentration of 5 ug/ml.It is necessary to allow 24 hours incubation for thetransformants to express the chloramphenicol resistant gene beforeexposing to chloramphenicol on the regeneration medium.To investigate whether these chloramphenicol resistance wasa result of the transformed gene, DNA of the transformants fromplasmid pS14 w a s amplified using PCR technique. It was found thatplasmid pSI4 e x i s t e d i n the cells of the transformants. However,when the DNA of the transformants which were subsequentlytransferred to the medium without chloramphenicol was tested bySouthern hybridization, there was no sign of the plasmid. This mayexplain the instability of the transformants.
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

ศรีสุพร กนกศิลป์. "ทรานสฟอร์เมชั่นของสาหร่ายเกลียวทอง (Spirulina platensis)Transformatiom Spirulina platensis". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี. 2536

ศรีสุพร กนกศิลป์. "ทรานสฟอร์เมชั่นของสาหร่ายเกลียวทอง (Spirulina platensis)Transformatiom Spirulina platensis". มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี. 2536. Print.



TARR Wordcloud:
ทรานสฟอร์เมชั่นของสาหร่ายเกลียวทอง (Spirulina platensis)
ศรีสุพร กนกศิลป์
มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี
2536
การกลายพันธุ์และการคัดเลือกสาหร่ายเกลียวทอง (Spirulina platensis)ที่มีความผิดปกติในการเติมพันธะคู่ การควบคุมโครงสร้างและการแสดงออกของยีนไฟโคบิลิโซมของสาหร่ายเกลียวทอง (Spirulina platensis C1) โดยการขาดไนโตรเจน ผลของอุณหภูมิต่อการแสดงออกของยีน 12 DESATURASE (desA) ใน SPIRULINA PLATENSIS C1 การผลิตปุ๋ยกากตะกอนน้ำเสียอุตสาหกรรมผลิตเส้นก๋วยเตี๋ยวเพื่อการเพาะเลี้ยงสาหร่ายเกลียวทอง การระบุหน้าที่ให้กับโปรตีนของ Spirulina platensis โดยใช้ Peptide Mass Fingerprinting ผลของความเข้มแสงและความเป็นกรด-เบสต่อการเจริญของ Spirulina platensis และ Chlorella vulgaris การมีส่วนร่วมจัดการทรัพยากรดินของเกษตรกรตำบลธาตุทอง อำเภอบ่อทอง จังหวัดชลบุรี คุณลักษณะการส่งถ่ายอิเล็กตรอนในกระบวนการสังเคราะห์แสงของ Spirulina platensis พันธุ์กลายสายพันธ์ I22 ผลของเบอร์เบอรีน (berberine) ต่อการสังเคราะห์แสงและการเติมพันธะคู่ของกรดไขมันไม่อิ่มตัวใน spirulina platensis ผลของสารสกัดบัวบกและทองพันชั่งต่อการเปลี่ยนแปลงระบบภูมิคุ้มกันที่เหนี่ยวนำโดยสารพิษจากเชื้อรา
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair