สืบค้นงานวิจัย
การศึกษาเกี่ยวกับจีโนมและการสร้าง infectious transcript ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอสายพันธุ์ w
Pongsopee Attasart - มหาวิทยาลัยมหิดล
ชื่อเรื่อง: การศึกษาเกี่ยวกับจีโนมและการสร้าง infectious transcript ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอสายพันธุ์ w
ชื่อเรื่อง (EN): Genome characterization and construction of papaya ringspot virus type W (PRSV-W) infectious transcript
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Pongsopee Attasart
บทคัดย่อ: ไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอเป็นสาเหตุของโรคที่สำคัญในมะละกอในหลายประเทศรวมถึง ประเทศไทย ไวรัสนี้แบ่งเป็นสายพันธุ์ P และ W ซึ่งมีความใกล้เคียงกัน สามารถแยกความแตกต่างจากการก่อ โรคในพืชต่างชนิดกัน การสร้าง RNA transcripts จาก full-length cDNA clones โดยวิธี in vitro หรือ in vivo transcription นับเป็นกุญแจสาํคญั สาํหรบั ใช้ศึกษาไวรัสน ใีนระดบั โมเลกุล จดุ ม่งุหมายของการศกึษานี เพ อื สรา้ง infectious clones ของไวรัส PRSV สายพันธุ์ W และศึกษาจีโนมของไวรัสนี้ จากการศึกษาลำดับนิวคลิโอไทด์ทั งเส้น (10,323 เบส) ของจีโนมไวรัส PRSV-W พบว่านิวคลิโอไทด์ มี ความเหมือนกันกับไวรัส PRSV ที่พบในแหล่งอื่นๆในระดับ 83-95% และมีกรดอะมิโนเหมือนกันในระดับ 91- 97% แต่ไม่พบความแตกต่างของนิวคลิโอไทด์ระหว่างสายพันธุ์ P และ W ที สามารถบ่งชี ถึงการก่อโรคในพืชต่าง ชนิดกัน งานวิจัยนี้ได้สร้างพลาสมิดหลายชนิด ทั้งพลาสมิดที่ประกอบด้วย cDNA ทั้งเส้นของ PRSV-W และ พลาสมิดที่มี cDNA ลูกผสมระหว่าง PRSV-W และ P โดยพลาสมิด T7-fl-W ที่ได้จากการประกอบกันของ cDNA 3 ชิ้นของ PRSV-W และควบคุมโดยโปรโมเตอร์ T7 นั้นไม่เสถียรใน E. coli ขณะที่พลาสมิด pSA1155, pSA1164 และ pSA1273 ประกอบด้วย cDNA สายเต็มของ PRSV-W ควบคุมโดยโปรโมเตอร์ CaMV 35S แบบ partially duplicated และ NOS terminator โดย pSA1155 ได้จากการประกอบกันของ cDNA 3 ส่วน pSA1164 ได้ จากการแทนที่ดีเอ็นเอขนาด 9 กิโลเบสใน pSA1155 ที่ตำแหน่ง KpnI ถึง SacII ด้วยดีเอ็นเอที่เพิ่มจำนวนจาก PRSV-W โดยวิธี RT-PCR pSA1273 คือ pSA1164 ที่มีการเปลี่ยนเบสที่ตำแหน่ง 9,985 ซึ่งทำให้ตำแหน่งในการ ตัดของเอ็นไซม์ PstI หายไป เพื่อใช้แยกโคลนออกจากไวรัสในธรรมชาติ พลาสมิดที่มี cDNA ลูกผสมระหว่าง PRSV -W และ P มี 2 ชนิดคือ pSA1135 ซึ่งควบคุมโดยโปรโมเตอร์ T7 และ pSA1151 ควบคุมโดยโปรโมเตอร์ CaMV 35S แบบ partially duplicated เมื่อนำพลาสมิด pSA1164 และ pSA1273 เข้าพืชโดยวิธี particle gun bombardment พบว่า pSA1164 สามารถก่อโรคใน zucchini ได้สูงถึง 90.0% และในฟักทองได้ 73.3% ขณะที่ pSA1273 ก่อโรคใน zucchini ได้ 50.0% การเกิดโรคใช้เวลานานกว่าไวรัสในธรรมชาติ 1-2 สัปดาห์ ในขณะที่พลาสมิด pSA1151 และ pSA1155 และ capped-in vitro transcript ของพลาสมิด pSA1135 ไม่ก่อให้เกิดโรคในพืชทดสอบเมื อใช้วิธี mechanical inoculation พลาสมิดที่มี cDNA สายเต็มของ PRSV-W ที สามารถก่อโรคในพืชที สร้างขึ นในการศึกษาครั งนี จะ เอื้ออำนวยให้สามารถศึกษาหาส่วนของยีนของไวรัส PRSV-W และ P ที่เกี่ยวข้องกับความจำเพาะในการก่อโรค ในพืชต่างชนิดกัน โดยใช้วิธีการสร้างไวรัสลูกผสมต่อไป
บทคัดย่อ (EN): Papaya ringspot virus (PRSV) causes a serious disease of papaya in many countries including Thailand. Its two closely related strains, P and W, can only be distinguished by host specificity. Synthesis of biologically functional RNA transcripts from the full-length cDNA clones via in vitro or in vivo transcription plays a key role in the further research of PRSV at the molecular level. The aims of this thesis were to generate infectious clones of PRSV-W as well as to characterize the PRSV-W genome. Complete nucleotide sequence of the full-length PRSV-W cDNA (10,323 bp) was determined. Overall similarity with other isolates of PRSV of 83-95% at nucleotide level and 91-97% at amino acid level were observed. There was no consistent sequence difference between PRSV-P and PRSV-W isolates that would obviously account for their host range difference. Several plasmids containing the full-length of a Thai isolate of PRSV-W cDNA and chimeric cDNA of PRSV-W and PRSV-P was constructed. The plasmid T7-fl-W, containing the full-length of three overlapping PRSV-W cDNA under the control of T7 promoter was not stable in the E.coli host system. Plasmids, pSA1155, pSA1164 and pSA1273, containing the full-length PRSV-W cDNA under the control of partially duplicated CaMV 35S promoter and NOS terminator were constructed. The pSA1155 was obtained by assembling three overlapping cDNA fragments while the pSA1164 was obtained by replacement of the 9 kb KpnI-SacII fragment of pSA1155 with the corresponding RT-PCR amplified fragment of PRSV-W. The pSA1273, where the PstI recognition site at position 9,985 of pSA1164 was removed, was also constructed in order to distinguish cloned cDNA from the native virus. Chimeric cDNA clones were also constructed downstream from the T7 promoter (pSA1135) and from the partially duplicated 35S promoter (pSA1151). High infectivity of pSA1164 on zucchini (90.0%) and on pumpkin (73.3%) plants while 50.0% infectivity of pSA1273 on zucchini were obtained by particle gun bombardment. A one to two week delay of symptom development was observed when compared with the native viral infection, whereas no symptoms were observed using mechanical inoculation of tested plants with capped in vitro transcript of pSA1135 or with DNA of pSA1151 and pSA1155. The infectious cDNA copy of the PRSV-W genome produced in this study would provide the possibility to map the viral sequences involved in the host specificity of type P and W by construction of chimeric viruses in future experiments
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://dcms.thailis.or.th/dcms/dccheck.php?Int_code=126&RecId=390&obj_id=253
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยมหิดล
คำสำคัญ (EN): Genomes
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยมหิดล
รายละเอียด: ไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอเป็นสาเหตุของโรคที่สำคัญในมะละกอในหลายประเทศรวมถึง ประเทศไทย ไวรัสนี้แบ่งเป็นสายพันธุ์ P และ W ซึ่งมีความใกล้เคียงกัน สามารถแยกความแตกต่างจากการก่อ โรคในพืชต่างชนิดกัน การสร้าง RNA transcripts จาก full-length cDNA clones โดยวิธี in vitro หรือ in vivo transcription นับเป็นกุญแจสาํคญั สาํหรบั ใช้ศึกษาไวรัสน ใีนระดบั โมเลกุล จดุ ม่งุหมายของการศกึษานี เพ อื สรา้ง infectious clones ของไวรัส PRSV สายพันธุ์ W และศึกษาจีโนมของไวรัสนี้ จากการศึกษาลำดับนิวคลิโอไทด์ทั งเส้น (10,323 เบส) ของจีโนมไวรัส PRSV-W พบว่านิวคลิโอไทด์ มี ความเหมือนกันกับไวรัส PRSV ที่พบในแหล่งอื่นๆในระดับ 83-95% และมีกรดอะมิโนเหมือนกันในระดับ 91- 97% แต่ไม่พบความแตกต่างของนิวคลิโอไทด์ระหว่างสายพันธุ์ P และ W ที สามารถบ่งชี ถึงการก่อโรคในพืชต่าง ชนิดกัน งานวิจัยนี้ได้สร้างพลาสมิดหลายชนิด ทั้งพลาสมิดที่ประกอบด้วย cDNA ทั้งเส้นของ PRSV-W และ พลาสมิดที่มี cDNA ลูกผสมระหว่าง PRSV-W และ P โดยพลาสมิด T7-fl-W ที่ได้จากการประกอบกันของ cDNA 3 ชิ้นของ PRSV-W และควบคุมโดยโปรโมเตอร์ T7 นั้นไม่เสถียรใน E. coli ขณะที่พลาสมิด pSA1155, pSA1164 และ pSA1273 ประกอบด้วย cDNA สายเต็มของ PRSV-W ควบคุมโดยโปรโมเตอร์ CaMV 35S แบบ partially duplicated และ NOS terminator โดย pSA1155 ได้จากการประกอบกันของ cDNA 3 ส่วน pSA1164 ได้ จากการแทนที่ดีเอ็นเอขนาด 9 กิโลเบสใน pSA1155 ที่ตำแหน่ง KpnI ถึง SacII ด้วยดีเอ็นเอที่เพิ่มจำนวนจาก PRSV-W โดยวิธี RT-PCR pSA1273 คือ pSA1164 ที่มีการเปลี่ยนเบสที่ตำแหน่ง 9,985 ซึ่งทำให้ตำแหน่งในการ ตัดของเอ็นไซม์ PstI หายไป เพื่อใช้แยกโคลนออกจากไวรัสในธรรมชาติ พลาสมิดที่มี cDNA ลูกผสมระหว่าง PRSV -W และ P มี 2 ชนิดคือ pSA1135 ซึ่งควบคุมโดยโปรโมเตอร์ T7 และ pSA1151 ควบคุมโดยโปรโมเตอร์ CaMV 35S แบบ partially duplicated เมื่อนำพลาสมิด pSA1164 และ pSA1273 เข้าพืชโดยวิธี particle gun bombardment พบว่า pSA1164 สามารถก่อโรคใน zucchini ได้สูงถึง 90.0% และในฟักทองได้ 73.3% ขณะที่ pSA1273 ก่อโรคใน zucchini ได้ 50.0% การเกิดโรคใช้เวลานานกว่าไวรัสในธรรมชาติ 1-2 สัปดาห์ ในขณะที่พลาสมิด pSA1151 และ pSA1155 และ capped-in vitro transcript ของพลาสมิด pSA1135 ไม่ก่อให้เกิดโรคในพืชทดสอบเมื อใช้วิธี mechanical inoculation พลาสมิดที่มี cDNA สายเต็มของ PRSV-W ที สามารถก่อโรคในพืชที สร้างขึ นในการศึกษาครั งนี จะ เอื้ออำนวยให้สามารถศึกษาหาส่วนของยีนของไวรัส PRSV-W และ P ที่เกี่ยวข้องกับความจำเพาะในการก่อโรค ในพืชต่างชนิดกัน โดยใช้วิธีการสร้างไวรัสลูกผสมต่อไป
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

Pongsopee Attasart. "การศึกษาเกี่ยวกับจีโนมและการสร้าง infectious transcript ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอสายพันธุ์ wGenome characterization and construction of papaya ringspot virus type W (PRSV-W) infectious transcript". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2552

Pongsopee Attasart. "การศึกษาเกี่ยวกับจีโนมและการสร้าง infectious transcript ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอสายพันธุ์ wGenome characterization and construction of papaya ringspot virus type W (PRSV-W) infectious transcript". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2552. Print.



TARR Wordcloud:
การศึกษาเกี่ยวกับจีโนมและการสร้าง infectious transcript ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอสายพันธุ์ w
Pongsopee Attasart
มหาวิทยาลัยมหิดล
27 กรกฎาคม 2552
การวิเคราะห์ยีนถ่ายทอดไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอดัดแปรพันธุกรรม การใช้ไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอเพื่อผลิตและนำเสนอแอนติเจนแปลกปลอมอย่างเป็นระบบ การใช้ไวรัสใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอเป็นยีนพาหะเพื่อผลิตโปรตีนแปลกปลอมในพืชแบบชั่วคราว การถ่ายยีนสร้างโปรตีน cylindrical inclusion ของเชื้อไวรัสจุดวงแหวนในมะละกอเข้าสู่พืช การใช้โปรตีนเรืองแสงสีเขียวในการศึกษาตำแหน่งภายในเซลล์ของโปรตีน P3 ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวน / Sarasate Eiamtanasate การควบคุมโรคใบจุดของข้าวพันธุ์ปทุมธานี 1 โดยใช้สารสกัดจากเชื้อราคีโตเมียม การตรวจวิเคราะห์ยีนโปรตีนเปลือกหุ้มของเชื้อไวรัสจุดวงแหวนที่ถ่ายฝากในมะละกอดัดแปรพันธุกรรม G2 การสร้างสายพันธุ์ Bacillus thuringiensis subsp. aizawai ที่ผลิตเอนไซม์ไคติเนสในระยะเซลล์สร้างสปอร์ แบบจำลองทางคณิตศาสตร์ของผู้ป่วยโรคไข้หวัดนกในประเทศไทยโดยจำแนกตามโครงสร้างอายุและสายพันธุ์ที่มีการกลายพันธุ์ การเปรียบเทียบสมรรถภาพการผลิตและองค์ประกอบซากของไก่เนื้อสายพันธุ์การค้า 3 สายพันธุ์ที่นิยมเลี้ยงในประเทศไทย
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair