สืบค้นงานวิจัย
การพัฒนาการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีเพื่อใช้ในการตรวจวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัสในกุ้ง
Sorasak Intorasoot - มหาวิทยาลัยมหิดล
ชื่อเรื่อง: การพัฒนาการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีเพื่อใช้ในการตรวจวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัสในกุ้ง
ชื่อเรื่อง (EN): The development of monoclonal antibody for detection of viral infection in shrimp
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Sorasak Intorasoot
บทคัดย่อ: การระบาดของโรคจากเชื้อไวรัสเป็นสาเหตุสำคัญของการสูญเสียรายได้ในการเลี้ยงกุ้งของหลาย ประเทศ ในประเทศไทย โรคตัวแดงดวงขาวและโรคหัวเหลืองซึ่งเกิดจากเชื้อไวรัส White spot syndrome virus (WSSV) และ Yellow head virus (YHV) เป็นสาเหตุสำคัญของการระบาดในฟาร์มเลี้ยงกุ้ง เนื่องจาก กุ้งที่ติดเชื้อไม่สามารถรักษาได้และยังไม่มีวัคซีนที่เหมาะสม วิธีการตรวจวิเคระห์ที่รวดเร็วและน่าเชื่อถือ จะเป็นกลยุทธ์ที่มีประโยชน์อย่างมากต่อการควบคุมการติดเชื้อไวรัสในฟาร์มเลี้ยงกุ้ง วิธีการตรวจโดย อาศัยแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อแอนติเจนบนเชื้อไวรัสจึงได้ถูกพัฒนาขึ้นในการศึกษาครั้งนี้ โมโนโคลนอลแอนติบอดีชนิด IgM ที่มีความจำเพาะต่อโปรตีนเปลือก (gp116) ของไวรัส YHVได้ ถูกคัดเลือกด้วยการทำเซลล์ลูกผสมระหว่างเซลล์มะเร็งกับเซลล์ม้ามของหนูที่ถูกกระตุ้นด้วยอนุภาคไวรัส YHV และยีนของแอนติบอดีในส่วน Variable ของ Light chain และ Heavy chain จากเซลล์ลูกผสมที่ได้ ถูกนำมาเชื่อมต่อเป็น Single chain variable fragment (scFv) โดยให้มีการแสดงออกในแบคทีเรีย ความ ไวและความจำเพาะของโมโนโคลนอลแอนติบอดีและ scFv ได้ถูกประเมินด้วยวิธี ELISA, Dot blotting และ Western blot analysis เมื่อใช้ YHV บริสุทธิ์เป็นแอนติเจนสำหรับวิธี Indirect ELISA และใช้โมโน โคลนอลแอนติบอดีพร้อมกับ scFv เป็นตัวตรวจสอบพบว่าสามารถตรวจหาเชื้อไวรัส YHV ได้ถึงระดับ ต่ำที่สุดที่ 50 และ 45 นาโนกรัม และพบว่า scFV สามารถตรวจพบเชื้อได้ที่ 24 ชั่วโมงหลังจากการฉีดเชื้อ และไม่เกิดปฏิกิริยาข้ามกลุ่มกับเชื้อไวรัสชนิดอื่น ค่าคงที่ของการจับกันระหว่างแอนติเจนกับแอนติบอดี (KA) ของโมโนโคลนอล และ scFV มีค่าประมาณ 1.42 + 0.72 x 109 และ 3.34 + 0.38 x 108 l/mol ตามลำดับ ยีน VP28 ที่สมบูรณ์ของเชื้อไวรัส WSSV ถูกเพิ่มจำนวนโดยวิธี PCR และเชื่อมต่อกับเวคเตอร์ซึ่ง แสดงออกในแบคทีเรีย เมื่อนำโคลนที่คัดเลือกไปหาลำดับนิวคลีโอไทด์พบว่ามีความแตกต่างของนิวคลี โอไทด์จากที่เคยมีรายงานใน GenBank อยู่ 2 ตำแหน่งคือลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 114 (จาก A เป็น T) และ ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 434 (จาก C เป็น T) จากการเปลี่ยนแปลงดังกล่าวส่งผลให้มีการแปลรหัสกรดอะมิ โนเปลี่ยนไปในตำแหน่งที่ 38 จากกรดกลูตามิกเป็นวาลีน และตำแหน่งที่ 145 จากโปรลีนเป็นลิวซีน ตามลำดับ โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ผลิตขึ้นจากเซลล์ม้ามของหนู ซึ่งถูกกระตุ้นด้วนโปรตีน VP28 บริสุทธิ์ จากการคัดเลือกเซลล์ลูกผสมด้วย Western blotting พบว่า 3 โคลนซึ่งผลิตแอนติบอดีจำเพาะต่อ โปรตีน VP28 บริสุทธิ์และสามารถจับได้กับอนุภาคไวรัส WSSV ได้ถูกคัดเลือกและหนึ่งในนั้น (โคลน W10C9) ได้ถูกนำไปศึกษาต่อ ค่า KA มีค่าประมาณ 2.32 + 0.38 x 108 l/mol การตรวจวิเคราะห์ด้วย วิธี Indirect ELISA พบว่าสามารถตรวจหาปริมาณของโปรตีน VP28 บริสุทธิ์และจากอนุภาคไวรัส WSSV ได้ที่ระดับต่ำที่สุดที่ 65 และ 300 นาโนกรัม ตามลำดับ
บทคัดย่อ (EN): The outbreak of the several viral diseases has caused serious losses of shrimp aquaculture in many countries. In Thailand, White spot syndrome virus (WSSV) and Yellow head virus (YHV) are the major viruses that cause the pandemics with catastrophic loss in culture shrimp. Because of the inability to cure these diseases, the rapid and reliable detection methods may be the most useful strategies for controlling virus infection in shrimp farms. On that basis, antibody-based assay was developed in this study. IgM subtype monoclonal antibody specific to YHV gp116 envelop glycoprotein was selected after the fusion of myeloma cells and mouse splenocytes administered by the purified YHV. Single chain variable fragment (scFv) was constructed from hybridomas and characterized for its properties. The sensitivity and specificity of monoclonal and scFv antibodies were demonstrated by ELISA, dot blotting and Western blot analysis. The detection limit of parent monoclonal antibody and scFv antibody analyzed with indirect ELISA were 50 and 45 ng of purified YHV, respectively. Moreover, dot-blot assays revealed that scFv antibody could detect YHV-infected shrimp at 24 h post-infection and also showed specific binding to YHV without cross reaction to other viruses tested. Binding affinity constant (KA) of monoclonal and scFv antibodies was calculated to be 1.42 + 0.72 x 109 and 3.34 + 0.38 x 108 l/mol, respectively The VP28 complete gene encoded the envelope protein of WSSV was amplified with PCR and cloned into pET28a expression vector. Two nucleotide changes obtained from sequencing, A114T and C434T, leading to missense mutations, E38V and P145L respectively, were identified. Monoclonal antibody was produced from mouse immunized with purified rVP28. Three hybridomas producing antibodies specific to both rVP28 and VP28 protein of WSSV analyzed by Western blotting were selected and one of these (clone W10C9) was characterized. Antibody subtyping indicated that W10C9 was IgG2a kappa light chain. The KA was calculated to be 2.32 + 0.38 x 108 l/mol. The detection limit analyzed by indirect ELISA was 65 ng for rVP28 and 300 ng for purified WSSV.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://dcms.thailis.or.th/dcms/dccheck.php?Int_code=126&RecId=3997&obj_id=2992
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยมหิดล
คำสำคัญ (EN): Virus diseases
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยมหิดล
รายละเอียด: การระบาดของโรคจากเชื้อไวรัสเป็นสาเหตุสำคัญของการสูญเสียรายได้ในการเลี้ยงกุ้งของหลาย ประเทศ ในประเทศไทย โรคตัวแดงดวงขาวและโรคหัวเหลืองซึ่งเกิดจากเชื้อไวรัส White spot syndrome virus (WSSV) และ Yellow head virus (YHV) เป็นสาเหตุสำคัญของการระบาดในฟาร์มเลี้ยงกุ้ง เนื่องจาก กุ้งที่ติดเชื้อไม่สามารถรักษาได้และยังไม่มีวัคซีนที่เหมาะสม วิธีการตรวจวิเคระห์ที่รวดเร็วและน่าเชื่อถือ จะเป็นกลยุทธ์ที่มีประโยชน์อย่างมากต่อการควบคุมการติดเชื้อไวรัสในฟาร์มเลี้ยงกุ้ง วิธีการตรวจโดย อาศัยแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อแอนติเจนบนเชื้อไวรัสจึงได้ถูกพัฒนาขึ้นในการศึกษาครั้งนี้ โมโนโคลนอลแอนติบอดีชนิด IgM ที่มีความจำเพาะต่อโปรตีนเปลือก (gp116) ของไวรัส YHVได้ ถูกคัดเลือกด้วยการทำเซลล์ลูกผสมระหว่างเซลล์มะเร็งกับเซลล์ม้ามของหนูที่ถูกกระตุ้นด้วยอนุภาคไวรัส YHV และยีนของแอนติบอดีในส่วน Variable ของ Light chain และ Heavy chain จากเซลล์ลูกผสมที่ได้ ถูกนำมาเชื่อมต่อเป็น Single chain variable fragment (scFv) โดยให้มีการแสดงออกในแบคทีเรีย ความ ไวและความจำเพาะของโมโนโคลนอลแอนติบอดีและ scFv ได้ถูกประเมินด้วยวิธี ELISA, Dot blotting และ Western blot analysis เมื่อใช้ YHV บริสุทธิ์เป็นแอนติเจนสำหรับวิธี Indirect ELISA และใช้โมโน โคลนอลแอนติบอดีพร้อมกับ scFv เป็นตัวตรวจสอบพบว่าสามารถตรวจหาเชื้อไวรัส YHV ได้ถึงระดับ ต่ำที่สุดที่ 50 และ 45 นาโนกรัม และพบว่า scFV สามารถตรวจพบเชื้อได้ที่ 24 ชั่วโมงหลังจากการฉีดเชื้อ และไม่เกิดปฏิกิริยาข้ามกลุ่มกับเชื้อไวรัสชนิดอื่น ค่าคงที่ของการจับกันระหว่างแอนติเจนกับแอนติบอดี (KA) ของโมโนโคลนอล และ scFV มีค่าประมาณ 1.42 + 0.72 x 109 และ 3.34 + 0.38 x 108 l/mol ตามลำดับ ยีน VP28 ที่สมบูรณ์ของเชื้อไวรัส WSSV ถูกเพิ่มจำนวนโดยวิธี PCR และเชื่อมต่อกับเวคเตอร์ซึ่ง แสดงออกในแบคทีเรีย เมื่อนำโคลนที่คัดเลือกไปหาลำดับนิวคลีโอไทด์พบว่ามีความแตกต่างของนิวคลี โอไทด์จากที่เคยมีรายงานใน GenBank อยู่ 2 ตำแหน่งคือลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 114 (จาก A เป็น T) และ ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 434 (จาก C เป็น T) จากการเปลี่ยนแปลงดังกล่าวส่งผลให้มีการแปลรหัสกรดอะมิ โนเปลี่ยนไปในตำแหน่งที่ 38 จากกรดกลูตามิกเป็นวาลีน และตำแหน่งที่ 145 จากโปรลีนเป็นลิวซีน ตามลำดับ โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ผลิตขึ้นจากเซลล์ม้ามของหนู ซึ่งถูกกระตุ้นด้วนโปรตีน VP28 บริสุทธิ์ จากการคัดเลือกเซลล์ลูกผสมด้วย Western blotting พบว่า 3 โคลนซึ่งผลิตแอนติบอดีจำเพาะต่อ โปรตีน VP28 บริสุทธิ์และสามารถจับได้กับอนุภาคไวรัส WSSV ได้ถูกคัดเลือกและหนึ่งในนั้น (โคลน W10C9) ได้ถูกนำไปศึกษาต่อ ค่า KA มีค่าประมาณ 2.32 + 0.38 x 108 l/mol การตรวจวิเคราะห์ด้วย วิธี Indirect ELISA พบว่าสามารถตรวจหาปริมาณของโปรตีน VP28 บริสุทธิ์และจากอนุภาคไวรัส WSSV ได้ที่ระดับต่ำที่สุดที่ 65 และ 300 นาโนกรัม ตามลำดับ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

Sorasak Intorasoot. "การพัฒนาการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีเพื่อใช้ในการตรวจวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัสในกุ้งThe development of monoclonal antibody for detection of viral infection in shrimp". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2550

Sorasak Intorasoot. "การพัฒนาการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีเพื่อใช้ในการตรวจวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัสในกุ้งThe development of monoclonal antibody for detection of viral infection in shrimp". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2550. Print.



TARR Wordcloud:
การพัฒนาการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีเพื่อใช้ในการตรวจวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัสในกุ้ง
Sorasak Intorasoot
มหาวิทยาลัยมหิดล
2550
การติดเชื้อไวรัส infectious hypodermal and hematopietic necrosis ในกุ้งกุลาดำ การศึกษาเปรียบเทียบระหว่างกุ้งขาวแปซิฟิก Penaeus vannamei ที่รอดชีวิตกับกุ้งที่ตายภายหลังการติดเชื้อไวรัสโรคตัวเหลือง ปัจจัยที่มีผลต่อพฤติกรรมเสี่ยงต่อการติดเชื้อเอชไอวี ของกลุ่มผู้ใช้แรงงาน โรงงานอุตสาหกรรมแปรรูปกุ้งส่งออก อำเภอระโนด จังหวัดสงขลา พ.ศ 2553 การปรับปรุงสมบัติการยึดติดระหว่างยางธรรมชาติกับยางไนไตรล์โดยใช้สารเพิ่มการยึดติดที การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีจำเพาะต่อเชื้อ vibrio parahaemolyticus โดยเน้นการวินิจฉัย serotype การใช้แร่ธาตุของลูกกุ้งขาว (Litopenaeus vannamei) ในระบบอนุบาล การพัฒนาซุปกึ่งสำเร็จรูปรสกุ้งจากหัวกุ้ง การแปรรูปร่วมของถ่านหินและน้ำมันพืชใช้แล้วให้เป็นของเหลวโดยใช้ตัวเร่งปฏิกิริยา การประยุกต์ใช้เครื่องอัลตราซาวด์ทางการวินิจฉัยในการหาค่าการลดทอนอัลตราซาวด์และอุณหภูมิที่เกิดขึ้นในเนื้อเยื่อจำลองจากการใช้อัลตราซาวด์ในการรักษา การศึกษาลักษณะการตายแบบ apoptosis ของเซลล์ตับที่เพาะเลี้ยงในสภาวะติดเชื้อไวรัสเด็งกี่
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair