สืบค้นงานวิจัย
การพัฒนาวิธีการวินิจฉัยโรคที่เกิดจากแบคทีเรียในระบบทางเดินหายใจของสุกร
พัชรี ทองคำคูณ - กรมปศุสัตว์
ชื่อเรื่อง: การพัฒนาวิธีการวินิจฉัยโรคที่เกิดจากแบคทีเรียในระบบทางเดินหายใจของสุกร
ชื่อเรื่อง (EN): Development of diagnostic techniques of bacterial diseases in respiratory system in swine
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: พัชรี ทองคำคูณ
บทคัดย่อ: สุกรในระบบฟาร์มที่มีการเลี้ยงหนาแน่นมักเกิดปัญหาการติดเชื้อ Mycoplasma hyopneumoniae ซึ่งก่อให้เกิดความเสียหายทางเศรษฐกิจ เนื่องจากสุกรเติบโตช้าและมีภาวะติดเชื้อแบคทีเรียซ้าซ้อน การตรวจการติดเชื้อที่รวดเร็วทาให้ควบคุมโรคและลดความสูญเสียลงได้ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาเทคนิค multiplex PCR ในการตรวจหาดีเอ็นเอที่จาเพาะต่อเชื้อ Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Haemophilus parasuis, Actinobacillus pleuropneumoniae และ Mycoplasma hyopneumoniae ได้พร้อมกันในหลอดเดียว และผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน P46 glutathione-S transferase fusion (P46/GST fusion) และรีคอมบิแนนท์โปรตีน P36 glutathione-S transferase fusion (P36/GST fusion) ของเชื้อ M. hyopneumoniae โดยการตัดต่อยีน P46 และยีน P36 เข้าสู่ plasmid TOPO ในเชื้อ E. coli แล้วตัดต่อยีนนี้เข้าสู่ plasmid pGEX-6P-1 เพื่อผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน P46/GST fusion และ P36/GST fusion ในเชื้อ E. coli ผลการศึกษาพบว่า เทคนิค multiplex PCR มีค่า limit of detection กับดีเอ็นเอของเชื้อแต่ละชนิดตั้งแต่ 10 picogram/?l และ limit of detection กับดีเอ็นเอของเชื้อเหล่านี้จากปอดสุกร มีค่า 106 CFU/g ในการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน P46/GST fusion พบว่ามีการสร้างอยู่ในส่วนของ inclusion body ส่งผลให้การแยกรีคอมบิแนนท์โปรตีน P46 พบการปนเปื้อนโปรตีนอื่นของเชื้อ E. coli จึงควรมีการแก้ไขก่อนนามาใช้เป็นแอนติเจนสาหรับตรวจการติดเชื้อ M. hyopneumoniae โดยวิธีอีไลซ่า ในขณะที่โปรตีน P36/GST fusion มีการสร้างอยู่ในส่วนของ inclusion body เช่นกัน เมื่อทาการแยกโปรตีนนามาฉีดกระตุ้นกระต่ายให้สร้างแอนติบอดีต่อโปรตีน P36/GST fusion เพื่อใช้เป็นแอนติบอดีจาเพาะในทาการทดสอบ กับเนื้อเยื่อปอดของสุกรที่ติดเชื้อ M. hyopneumoniae โดยวิธี immunoperoxidase นั้น จากการทดสอบไม่พบการเกิดสีที่จาเพาะบนเนื้อเยื่อปอดของสุกรที่ติดเชื้อ M. hyopneumoniae ทั้งนี้อาจเป็นไปได้ว่าแอนติซีรัมต่อ P36/GST ที่ผลิตจากกระต่ายไม่สามารถจับกับโปรตีนแอนติเจนหรือเชื้อ M. hyopneumoniae ที่อยู่บนเนื้อเยื่อปอดที่ตรึงฟอร์มาลินได้หรือจับได้น้อย การแก้ไขที่อาจเป็นไปได้ คือ เพิ่มการผลิต P36/GST จากการเพาะเลี้ยง E. coli โดยใช้อาหารเลี้ยงเชื้อปริมาณสูงขึ้น และปรับเปลี่ยนเทคนิคการสกัดโปรตีนบริสุทธิ์อาจส่งผลให้มีระดับแอนติบอดีต่อ P36 จากกระต่ายที่สูงมากขึ้นต่อการทาปฏิกิริยา immunoperoxidase ได้
บทคัดย่อ (EN): Swine raised in an intensive farming system are usually infected by Mycoplasma hyopneumoniae, which causes economic losses due to decrease in growth rate and increase in mixed bacterial infection of the pigs. Rapid detection is useful for prompt disease control and reduction of losses. In this study, we aimed to develop multiplex PCR for detection of Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Haemophilus parasuis Actinobacillus pleuropneumoniae and Mycoplasma hyopneumoniae DNAs in only one reaction; construct recombinant P46 glutathione-S transferase fusion (P46/GST fusion) protein and P36 glutathione-S transferase fusion (P36/GST fusion) protein of M. hyopneumoniae. Firstly, P46 gene and P36 gene were inserted into TOPO cloning plasmid and subsequently inserted into plasmid pGEX-6P-1 to over express recombinant P46/GST and P36/GST fusion protein of M. hyopneumoniae in E. coli. The results revealed that limit of detection of the multiplex PCR in detecting the DNA extracted from the bacteria was 10 picogram/?l. Additionally, limit of detection in detecting the bacterial DNA extracted from the simulated lung was 106 CFU/g. For recombinant protein production, it was found that P46/GST fusion protein was mainly produced in inclusion body, resulting in a contamination of other protein of E. coli in a purification process. The contamination shall be removed before the recombinant P46 protein can be used for detection of M. hyopneumoniae infection by ELISA. Moreover, P36/GST fusion protein was mainly produced in inclusion body too. The P36/GST fusion protein was purified and injected into rabbit to produce antibody against this protein and used for detection of M. hyopneumoniae from formalin fixed tissue of infected pig by immunoperoxidase. The positive reaction was not detected which might be due to no binding or low binding between P36/GST antiserum and M. hyopneumoniae on the tissue. The suggestion was to increase volume of broth medium to over express P36/GST fusion protein in E. coli and change protein purification technique may lead to succeed in high rabbit antibody titer against P36 for the immunoperoxidase test.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: กรมปศุสัตว์
คำสำคัญ: การวินิจฉัยโรคแบคทีเรียในระบบทางเดินหายใจสุกร
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

พัชรี ทองคำคูณ. "การพัฒนาวิธีการวินิจฉัยโรคที่เกิดจากแบคทีเรียในระบบทางเดินหายใจของสุกรDevelopment of diagnostic techniques of bacterial diseases in respiratory system in swine". กรมปศุสัตว์. 2554

พัชรี ทองคำคูณ. "การพัฒนาวิธีการวินิจฉัยโรคที่เกิดจากแบคทีเรียในระบบทางเดินหายใจของสุกรDevelopment of diagnostic techniques of bacterial diseases in respiratory system in swine". กรมปศุสัตว์. 2554. Print.



TARR Wordcloud:
การพัฒนาวิธีการวินิจฉัยโรคที่เกิดจากแบคทีเรียในระบบทางเดินหายใจของสุกร
พัชรี ทองคำคูณ
กรมปศุสัตว์
30 กันยายน 2554
กรมปศุสัตว์
โครงการวิจัยและพัฒนาเพื่อแก้ปัญหาโรคใบขาวของอ้อย การพัฒนาเทคนิค multiplex PCR ในการตรวจโรคที่เกิดจากแบคทีเรียในระบบทางเดินหายใจจากปอดสุกร การสร้างสุกรพันธุ์แลนด์เรซของกรมปศุสัตว์ การพัฒนาระบบการเลี้ยงสุกรแบบปล่อยแปลง อาการทางเดินหายใจและสมรรถภาพปอดของพนักงาน ในโรงงานแปรรูปไม้ยางพาราแห่งหนึ่งในจังหวัดนครศรีธรรมราช การศึกษาโครงสร้างอย่างละเอียดของผิวหนังพยาธิใบไม้ในกระเพาะอาหาร ด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเลคตรอนชนิดส่องผ่านเพื่อพัฒนาวิธีการวินิจฉัยโรค amphistomosis ในวัว การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียโปรไบโอติกในน้ำทิ้งจากโรงงานผลิตขนมจีนเพื่อใช้ผสมในอาหารและน้ำดื่มสำหรับสุกรและสัตว์ปีก การวิจัยและพัฒนาผลิตภัณฑ์แบคทีเรีย Xenorhabdus nematophila เพื่อควบคุมไรศัตรูเห็ด มิญชวิทยาเพื่อการวินิจฉัยโรคปลา ผลของการใช้ระบบบำบัดน้ำแบบ skimmer ต่อการเปลี่ยนแปลงปริมาณ แบคทีเรียและต่อการอนุบาลกุ้งทะเล
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair