สืบค้นงานวิจัย
การใช้โปรตีนเรืองแสงสีเขียวในการศึกษาตำแหน่งภายในเซลล์ของโปรตีน P3 ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวน / Sarasate Eiamtanasate
Sarasate Eiamtanasate - มหาวิทยาลัยมหิดล
ชื่อเรื่อง: การใช้โปรตีนเรืองแสงสีเขียวในการศึกษาตำแหน่งภายในเซลล์ของโปรตีน P3 ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวน / Sarasate Eiamtanasate
ชื่อเรื่อง (EN): Use of green fluorescent protein for subcellular localization study of papaya ringspot potyvirus P3 protein
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Sarasate Eiamtanasate
บทคัดย่อ: ไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนเป็นสาเหตุของการเกิดโรคที่รุนแรงในมะละกอ ซึ่งมีจีโนมเป็นอาร์เอ็นเอ สายเดี่ยวที่ถูกแปลรหัสเป็นโปรตีนขนาดใหญ่ก่อนที่จะผ่านกระบวนการย่อยให้เป็นโปรตีนที่สามารถทำงาน ได้จำนวน 10 ชนิด P3 เป็นโปรตีนลำดับที่ 3 ของไวรัสที่ถูกสันนิษฐานว่ามีส่วนเกี่ยวข้องกับการเพิ่มจำนวน ของไวรัส การก่อโรค และความจำเพาะของพืชเจ้าบ้าน อย่างไรก็ดีหน้าที่และตำแหน่งของ P3 ภายในเซลล์ ที่ติดโรคยังไม่เป็นที่ทราบแน่ชัด วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้คือการหาตำแหน่งของ P3 ภายในเซลล์โดยการ สร้างโปรตีนลูกผสมที่ประกอบด้วยส่วนของ P3 และโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (green fluorescent protein, GFP) เพื่อใช้ในการศึกษาการแสดงออกของโปรตีนในเซลล์เยื่อหอม ทำการสร้างเวคเตอร์หลายชนิดที่มีชิ้นส่วนดีเอ็นเอของ P3 ส่วนต่าง ๆ และ/หรือ 6K1 และยีนที่ สร้าง GFP เพื่อให้มีการสร้างโปรตีนลูกผสมหลายรูปแบบภายในเซลล์เยื่อหอมจากนั้นนำเวคเตอร์ข้างต้น เข้าสู่เซลล์เยื่อหอมโดยการยิงอนุภาคโดยลำพังหรือร่วมกับเวคเตอร์ที่สร้างโปรตีนเรืองแสงสีแดง (ER-DsRed2) ที่มีตำแหน่งจำเพาะอยู่ที่ endoplasmic reticulum (ER) ผลการศึกษาพบว่า โปรตีนลูกผสมที่มีส่วนของ P3 หรือ P3-6K1 หรือ P3 ที่ขาดส่วนปลายอะมิโนสามารถพบได้ที่ ER ในขณะที่โปรตีนลูกผสมที่มีส่วนของ 6K1 เท่านั้น หรือ P3 ที่ขาดส่วนปลายคาร์บ๊อกซี่สามารถพบกระจาย อยู่ทั่วทั้งเซลล์ ผลนี้บ่งชี้ว่า P3 สามารถพบได้ที่ ER โดยมีส่วนปลายคาร์บ๊อกซี่ของ P3 เป็นส่วนสำคัญต่อ การระบุการไปสู่ตำแหน่งเป้าหมายที่ ER นอกจากนี้ยังพบว่า 6K1 ไม่มีผลต่อ P3 ในการไปสู่ตำแหน่งที่ ER และไม่พบว่ามีลำดับกรดอะมิโนที่เป็น ER-targeted ใน P3 จากผลดังกล่าวสันนิษฐานว่าการที่พบ P3 ได้ที่ ER นั้นอาจมีผลมาจากการที่โปรตีนมีส่วนที่ไม่ชอบน้ำเป็นส่วนสำคัญในการระบุตำแหน่งเป้าหมาย ดังนั้นการศึกษานี้ได้ทำการทำนายหาส่วนที่ไม่ชอบน้ำและพบว่า P3 มีส่วนดังกล่าวอยู่ในทั้งส่วนปลายอะมิโน และปลายคาร์บ๊อกซี่ (Hy2) มาสร้างโปรตีนลูกผสมกับ GFP และพบว่ามีตำแหน่งอยู่ที่ ER เช่นเดียวกับ โปรตีนลูกผสม GFP ที่มีส่วนของ P3 หรือ P3-6k1 หรือ P3 ที่ขาดส่วนปลายอะมิโน การศึกษานี้แสดงให้ เห็นว่า Hy2 เป็นส่วนสำคัญต่อการระบุการไปสู่ตำแหน่งเป้าหมายที่ ER ของ P3
บทคัดย่อ (EN): Papaya ringspot potyvirus (PRSV) causes a severe disease in papayas. Its genome is a single messenger-polarity RNA which is translated into a polyprotein that is processed into 10 functional proteins. The P3 protein, encoded by the 3rd cistron has been proposed to be involved in viral replication, pathogenicity determination and host specificity. However, its exact function/s and subcellular localization in infected cells still remain unclear. Therefore, the objective of this study was to determine the subcellular localization of PRSV P3 by expressing its green fluorescent (GFP) fusion protein in onion epidermal cells, in order to further understand its function/s. Plant expression vectors containing P3 or its derivatives fused with gfp gene were constructed and expressed transiently in onion epidermal cells. Single or cobombardment of each of the above constructs with an endoplasmic reticulum (ER) targeted DsRed2 construct (ER-DsRed2) indicated that GFP fusion proteins of P3- , P3-6K1- and N-terminal truncated P3 (CP3-6K1-GFP) were localized at ER, whereas those of 6K1- and C- terminal truncated P3 (NP3-GFP) were expressed all over the transfected cells as for the free GFP. These results suggested that P3 is localized at ER, and the localization determinant sequence is located at its Cterminus. The result also indicated that the presence of 6K1 protein, encoded by the 4th cistron, does not affect the localization of P3 protein as suggested in other reports. The lack of ER-targeted sequence suggested that the presence of hydrophobic region/s within the P3 protein might contribute to its ER localization. Therefore, hydrophobic region prediction was performed and 2 hydrophobic regions located at the N- and C-terminal region of P3 protein respectively were found. A construct which express the second hydrophobic region (Hy2) fused with GFP in plant cell was created and expressed in onion epidermal cells. The results indicated that Hy2 GFP fusion protein co-localized with the ER-DsRed2 fusion protein. These data confirm that the Hy2 which is located at the C-terminal region is the localization determinant sequence for PRSV P3 protein.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://dcms.thailis.or.th/dcms/dccheck.php?Int_code=126&RecId=3759&obj_id=4157
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยมหิดล
คำสำคัญ (EN): Potyvirus
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยมหิดล
รายละเอียด: ไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนเป็นสาเหตุของการเกิดโรคที่รุนแรงในมะละกอ ซึ่งมีจีโนมเป็นอาร์เอ็นเอ สายเดี่ยวที่ถูกแปลรหัสเป็นโปรตีนขนาดใหญ่ก่อนที่จะผ่านกระบวนการย่อยให้เป็นโปรตีนที่สามารถทำงาน ได้จำนวน 10 ชนิด P3 เป็นโปรตีนลำดับที่ 3 ของไวรัสที่ถูกสันนิษฐานว่ามีส่วนเกี่ยวข้องกับการเพิ่มจำนวน ของไวรัส การก่อโรค และความจำเพาะของพืชเจ้าบ้าน อย่างไรก็ดีหน้าที่และตำแหน่งของ P3 ภายในเซลล์ ที่ติดโรคยังไม่เป็นที่ทราบแน่ชัด วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้คือการหาตำแหน่งของ P3 ภายในเซลล์โดยการ สร้างโปรตีนลูกผสมที่ประกอบด้วยส่วนของ P3 และโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (green fluorescent protein, GFP) เพื่อใช้ในการศึกษาการแสดงออกของโปรตีนในเซลล์เยื่อหอม ทำการสร้างเวคเตอร์หลายชนิดที่มีชิ้นส่วนดีเอ็นเอของ P3 ส่วนต่าง ๆ และ/หรือ 6K1 และยีนที่ สร้าง GFP เพื่อให้มีการสร้างโปรตีนลูกผสมหลายรูปแบบภายในเซลล์เยื่อหอมจากนั้นนำเวคเตอร์ข้างต้น เข้าสู่เซลล์เยื่อหอมโดยการยิงอนุภาคโดยลำพังหรือร่วมกับเวคเตอร์ที่สร้างโปรตีนเรืองแสงสีแดง (ER-DsRed2) ที่มีตำแหน่งจำเพาะอยู่ที่ endoplasmic reticulum (ER) ผลการศึกษาพบว่า โปรตีนลูกผสมที่มีส่วนของ P3 หรือ P3-6K1 หรือ P3 ที่ขาดส่วนปลายอะมิโนสามารถพบได้ที่ ER ในขณะที่โปรตีนลูกผสมที่มีส่วนของ 6K1 เท่านั้น หรือ P3 ที่ขาดส่วนปลายคาร์บ๊อกซี่สามารถพบกระจาย อยู่ทั่วทั้งเซลล์ ผลนี้บ่งชี้ว่า P3 สามารถพบได้ที่ ER โดยมีส่วนปลายคาร์บ๊อกซี่ของ P3 เป็นส่วนสำคัญต่อ การระบุการไปสู่ตำแหน่งเป้าหมายที่ ER นอกจากนี้ยังพบว่า 6K1 ไม่มีผลต่อ P3 ในการไปสู่ตำแหน่งที่ ER และไม่พบว่ามีลำดับกรดอะมิโนที่เป็น ER-targeted ใน P3 จากผลดังกล่าวสันนิษฐานว่าการที่พบ P3 ได้ที่ ER นั้นอาจมีผลมาจากการที่โปรตีนมีส่วนที่ไม่ชอบน้ำเป็นส่วนสำคัญในการระบุตำแหน่งเป้าหมาย ดังนั้นการศึกษานี้ได้ทำการทำนายหาส่วนที่ไม่ชอบน้ำและพบว่า P3 มีส่วนดังกล่าวอยู่ในทั้งส่วนปลายอะมิโน และปลายคาร์บ๊อกซี่ (Hy2) มาสร้างโปรตีนลูกผสมกับ GFP และพบว่ามีตำแหน่งอยู่ที่ ER เช่นเดียวกับ โปรตีนลูกผสม GFP ที่มีส่วนของ P3 หรือ P3-6k1 หรือ P3 ที่ขาดส่วนปลายอะมิโน การศึกษานี้แสดงให้ เห็นว่า Hy2 เป็นส่วนสำคัญต่อการระบุการไปสู่ตำแหน่งเป้าหมายที่ ER ของ P3
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

Sarasate Eiamtanasate. "การใช้โปรตีนเรืองแสงสีเขียวในการศึกษาตำแหน่งภายในเซลล์ของโปรตีน P3 ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวน / Sarasate EiamtanasateUse of green fluorescent protein for subcellular localization study of papaya ringspot potyvirus P3 protein". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2550

Sarasate Eiamtanasate. "การใช้โปรตีนเรืองแสงสีเขียวในการศึกษาตำแหน่งภายในเซลล์ของโปรตีน P3 ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวน / Sarasate EiamtanasateUse of green fluorescent protein for subcellular localization study of papaya ringspot potyvirus P3 protein". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2550. Print.



TARR Wordcloud:
การใช้โปรตีนเรืองแสงสีเขียวในการศึกษาตำแหน่งภายในเซลล์ของโปรตีน P3 ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวน / Sarasate Eiamtanasate
Sarasate Eiamtanasate
มหาวิทยาลัยมหิดล
2550
การใช้ไวรัสใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอเป็นยีนพาหะเพื่อผลิตโปรตีนแปลกปลอมในพืชแบบชั่วคราว การใช้ไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอเพื่อผลิตและนำเสนอแอนติเจนแปลกปลอมอย่างเป็นระบบ การวิเคราะห์ยีนถ่ายทอดไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอดัดแปรพันธุกรรม การศึกษาเกี่ยวกับจีโนมและการสร้าง infectious transcript ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอสายพันธุ์ w การถ่ายยีนสร้างโปรตีน cylindrical inclusion ของเชื้อไวรัสจุดวงแหวนในมะละกอเข้าสู่พืช การตรวจวิเคราะห์ยีนโปรตีนเปลือกหุ้มของเชื้อไวรัสจุดวงแหวนที่ถ่ายฝากในมะละกอดัดแปรพันธุกรรม G2 การศึกษาโปรตีนทั้งหมดของสาหร่ายสีเขียว Chlamydomonas reinhardtii ในการตอบสนองต่อแสงที่มีปริมาณสูง ผลของโพแทสเซียมคลอเรตต่อการเปลี่ยนแปลงโปรตีนของใบลำไย การใช้เอนไซม์ในการผลิตรำข้าวโปรตีนสูง. การผลิตผงโปรตีนเข้มข้นจากแมงกะพรุน และการประยุกต์ใช้
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair