สืบค้นงานวิจัย
การโคลน polyhydroxyalkanoates biosynthetic genes จาก Alcaligenes latus เพื่อพัฒนาจุลินทรีย์ดัดแปลงพันธุกรรมที่สามารถผลิต Poly 3-hydroxybutyrate
ปรีย์กมล กลั่นฤทธิ์ - มหาวิทยาลัยขอนแก่น
ชื่อเรื่อง: การโคลน polyhydroxyalkanoates biosynthetic genes จาก Alcaligenes latus เพื่อพัฒนาจุลินทรีย์ดัดแปลงพันธุกรรมที่สามารถผลิต Poly 3-hydroxybutyrate
ชื่อเรื่อง (EN): Cloning of polyhydroxyalkanoates biosynthetic genes from Alcaligenes latus to develop a genetically modified organism for Poly 3-hydroxybutyrate production
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: ปรีย์กมล กลั่นฤทธิ์
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Preekamol Klanrit
หน่วยงานสังกัดผู้แต่ง:
  1. มหาวิทยาลัยขอนแก่น
บทคัดย่อ: ในปัจจุบันภาวะโลกร้อนและมลพิษที่เกิดจากของเสีย โดยเฉพาะพลาสติกที่ไม่สามารถย่อยสลายได้ ก่อให้เกิดปัญหาทางด้านสิ่งแวดล้อมเพิ่มมากขึ้น ดังนั้น การใช้วัสดุที่สามารถย่อยสลายได้ (Biodegradable materials) จึงเป็นอีกหนึ่งทางเลือกที่จะช่วยบรรเทาปัญหาสิ่งแวดล้อม ทำให้นักวิจัยหลายท่านให้ความสนใจในการพัฒนาพลาสติกหรือพอลิเมอร์ที่มี Polyhydroxyalkanoates (PHAs) เป็นองค์ประกอบเนื่องจากมีคุณสมบัติทางกายภาพคล้ายกับ Polypropylene ซึ่งเป็นพอลิเมอร์สังเคราะห์จากกระบวนการปิโตรเคมีที่ใช้ในปัจจุบัน Poly (3-hydroxybutyrate) หรือ PHB เป็นพอลิเมอร์ที่อยู่ในกลุ่ม PHAs ซึ่งเป็นที่รู้จักมากที่สุด ในงานวิจัยนี้ ผู้วิจัยได้ศึกษาวิถีการสังเคราะห์ PHAs (PHA Biosynthesis) และโคลนยีน (Genes) ที่กำหนดการสร้างเอนไซม์ที่สำคัญ 3 ชนิดได้แก่ -ketothiolase (phaA), Acetoacetyl coenzyme A reductase (phaB) และ PHA synthase (phaC) จากแบคทีเรีย Alcaligenes latus TISTR 1403 ซึ่งมีรายงานว่าสามารถผลิตและสะสม PHB ในปริมาณที่สูง ผู้วิจัยได้สกัด Genomic DNA จาก A. latus เพื่อใช้เป็นแม่แบบในปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสโดยใช้ไพรเมอร์จำเพาะกับยีนทั้ง 3 ชนิด ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการทำปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสของ phaC, phaA และ phaB genes มีขนาดประมาณ 1.6 kb, 1.2 kb และ 0.7 kb ตามลำดับ จากนั้นได้เชื่อมต่อ PCR products กับ pGEM-T Easy Vector และส่งถ่ายผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการเชื่อมต่อเข้าสู่ Escherichia coli สายพันธุ์ JM 109 ด้วยวิธี Chemical Transformation ตามด้วย Heat shock ผู้วิจัยได้คัดเลือกโคโลนีของแบคทีเรียที่คาดว่าจะได้รับพลาสมิดลูก-ผสมด้วยวิธี Blue-white colony selection ตรวจสอบต่อด้วยการสกัดพลาสมิดจาก E. coli และตัดด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะ จากนั้นส่งโคลนที่คัดเลือกได้ไปตรวจสอบลำดับนิวคลีโอไทด์ ผลการวิเคราะห์ข้อมูลลำดับนิวคลีโอไทด์พบว่า phaC, phaA และ phaB genes มีขนาด 1,608 bp, 1,176 bp และ 735 bp ซึ่งจะถูกแปลรหัสเป็นกรดอะมิโนได้ 536, 392 และ 245 ตัว ตามลำดับ ค่าเปอร์เซ็นต์ความเหมือน (% identity) ระหว่าง phaC, phaA และ phaB genes กับยีนเดียวกันของ A. latus สายพันธุ์อื่นในฐานข้อมูล NCBI เท่ากับ 88%, 90% และ 94% ตามลำดับ นอกจากนี้ เมื่อวิเคราะห์ค่าคาดคะเนน้ำหนักโมเลกุลพบว่าเอนไซม์ PHA synthase (phaC), -ketothiolase (phaA) และ Acetoacetyl coenzyme A reductase (phaB) มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 59.6 kDa, 40.3 kDa และ 26.2 kDa ตามลำดับ
บทคัดย่อ (EN): At present, the global warming and the pollution from wastes especially from non-degradable plastics have increased the environmental problems and concerns. Thus, the use of biodegradable materials is an alternative to reduce these problems. As a consequence, the development of biodegradable polymers especially polyhydroxyalkanoates (PHAs) has been of significant interest to many researchers since the physical properties of PHAs are similar to those of polypropylene, which is the polymer synthesized from petrochemical process. Poly (3-hydroxybutyrate) or PHB is the best-known and characterized PHA. In this research, we studied PHA biosynthetic pathway and cloned 3 genes encoding 3 important enzymes, i.e. -ketothiolase (phaA gene), Acetoacetyl coenzyme A reductase (phaB gene) and PHA synthase (phaC gene) from Alcaligenes latus TISTR 1403. This bacterium was reported to be capable of efficiently producing and accumulating a large amount of PHB so the genomic DNA was extracted and used as a template in the Polymerase Chain Reaction (PCR) with gene specific primers. The PCR product sizes of phaC, phaA and phaB genes were approximately 1.6 kb, 1.2 kb และ 0.7 kb, respectively. Then, the purified PCR products were each ligated to pGEM-T Easy Vector and the ligation products were transformed into E. coli strain JM 109 using chemical transformation followed by heat shock. The positive clones were verified by (1) blue-white colony selection (2) extraction of the plasmids from the bacteria and cut with proper restriction enzyme and (3) extraction of the plasmids and use as a template for PCR with the gene specific primers to check for specific PCR products of expected sizes. After the correct identification of the right clones, they were sent for sequencing. The sizes of the cloned PCR products were consistent with the data analyzed from the National Center for Biotechnology Information (NCBI). It was shown that phaC, phaA and phaB genes were 1,608 bp, 1,176 bp and 735 bp in length, and encoded the proteins of 536, 392 and 245 amino acids, respectively. The percent identity of phaC, phaA and phaB genes as compared to the corresponding genes from other strains of A.latus showed the values of 88%, 90% and 94%, respectively. In addition, with the aid of the program from the Expasy Server, the theoretical molecular weight of PHA synthase (phaC), -ketothiolase (phaA) and Acetoacetyl coenzyme A reductase (phaB) were calculated to be approximately 59.6 kDa, 40.3 kDa and 26.2 kDa, respectively.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยขอนแก่น
คำสำคัญ: 3-ไฮดรอกซีบิวทิเรต
คำสำคัญ (EN): PHB
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

ปรีย์กมล กลั่นฤทธิ์. "การโคลน polyhydroxyalkanoates biosynthetic genes จาก Alcaligenes latus เพื่อพัฒนาจุลินทรีย์ดัดแปลงพันธุกรรมที่สามารถผลิต Poly 3-hydroxybutyrateCloning of polyhydroxyalkanoates biosynthetic genes from Alcaligenes latus to develop a genetically modified organism for Poly 3-hydroxybutyrate production". มหาวิทยาลัยขอนแก่น. 2553

ปรีย์กมล กลั่นฤทธิ์. "การโคลน polyhydroxyalkanoates biosynthetic genes จาก Alcaligenes latus เพื่อพัฒนาจุลินทรีย์ดัดแปลงพันธุกรรมที่สามารถผลิต Poly 3-hydroxybutyrateCloning of polyhydroxyalkanoates biosynthetic genes from Alcaligenes latus to develop a genetically modified organism for Poly 3-hydroxybutyrate production". มหาวิทยาลัยขอนแก่น. 2553. Print.



TARR Wordcloud:
การโคลน polyhydroxyalkanoates biosynthetic genes จาก Alcaligenes latus เพื่อพัฒนาจุลินทรีย์ดัดแปลงพันธุกรรมที่สามารถผลิต Poly 3-hydroxybutyrate
ปรีย์กมล กลั่นฤทธิ์
มหาวิทยาลัยขอนแก่น
2553
ปัจจัยที่มีผลต่อการพัฒนาข้าราชการกรมประมง การใช้ประโยชน์จากจุลินทรีย์ในการควบคุมทางชีวภาพ การผลิต Inulin และ Oligofructose จากกล้วยเพื่อใช้เป็นสารเสริมอาหาร การศึกษารูปแบบผลิตภัณฑ์จุลินทรีย์และวิธีการเลี้ยงขยายเชื้อจุลินทรีย์ผลิตสารเอ็กโสโพลีแซ็กคาไรด์ สร้างและทดสอบ เครื่องผลิตไบโอดีเซลแบบใช้จุลินทรีย์ การหมักข้าวฟ่างหวานแบบกะและแบบกึ่งกะโดยใช้ Alcaligenes latus เพื่อผลิตสารไบโอโพลีเมอร์พีเอชเอ (โพลีไฮดรอกซีอัลคาโนเอท) การพัฒนาวิธีแยกสารสกัดโพลีแซคคาไรด์เพื่อการขยายขนาดการผลิต การใช้ยีสต์มีชีวิตร่วมกับจุลินทรีย์ EM (Effective Microorganisms) ในการผลิตไรน้ำนางฟ้าไทยคุณภาพ การพัฒนาปุ๋ยชีวภาพจากผลผลิตทางการเกษตรในท้องถิ่น เพื่อสนองแนวทางพระราชดำริเศรษฐกิจพอเพียง อาหารจากจุลินทรีย์
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair