สืบค้นงานวิจัย
การเพิ่มประสิทธิภาพการนำอาร์เอ็นเอสายคู่เข้าสู่เซลล์กุ้งจากการกินแบคทีเรียโดยอาศัยโปรตีน invasin และ listeriolysin O
พงโสภี อัตศาสตร์ - มหาวิทยาลัยมหิดล
ชื่อเรื่อง: การเพิ่มประสิทธิภาพการนำอาร์เอ็นเอสายคู่เข้าสู่เซลล์กุ้งจากการกินแบคทีเรียโดยอาศัยโปรตีน invasin และ listeriolysin O
ชื่อเรื่อง (EN): Development of double-stranded RNA delivery into shrimp cells by invasin and listeriolysin O
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: พงโสภี อัตศาสตร์
บทคัดย่อ: ในปัจจุบันการกระตุ้น RNA interference ด้วยอาร์เอ็นเอสายกู่นับเป็นวิชีที่มีประสิทธิภาพในการใช้ ป้องกันโรคไรัสในกุ้ง ถึงแม้ว่าการนำอาร์เอ็นเอสายกู่เข้าสู่กุ้งจะยังต้องอาศัยการฉีดเข้าสู่ haemolymph หรือกล้ามเนื้อ ซึ่งไม่สามารถใช้วิชีนี้กับกุ้งในฟาร์มได้ ดังนั้นงานวิจัชนี้จึงมุ่งหวังที่จะพัฒนาวิธีการยับยั้งยืน เป้าหมายไดยการกินอาหารผสมแบคที่เรียที่มีอาร์เอ็นเอสาขคู่ที่จำเพาะต่อยืนนั้นๆ อาหารผสมนั้นจะ ประกอบไปด้วขอาหารกังบดผสมกับแบคที่เรียที่มีการสร้างอาร์เอ็นเอสายคู่โดยอาศัยกล้วยน้ำว้าสุกเป็นตัว ผสาน อาหารผสมนี้มื่อผึ่งให้แห้งสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องได้นาบอย่างน้อย 3 เดือน ไดยไม่มีการสลาย ของอาร์เอ็นเอสายคู่ที่อยู่กายใน เมื่อนำอาหารผสมแบคที่เรียที่มีอาร์เอ็นเอสายคู่ต่อยืน Rab7 ของกุ้ง ไปให้กุ้ง กินติดต่อกันทุกวันเป็นเวล1 6 วัน แล้วทดสอบระดับการแสดงออกของน Rab7 พบว่ากังกลุ่มนี้มีระดับของ Rab7 transcript น้อยกว่ากังกลุ่มควบคุมที่กินอาหารผสมแบคที่เรียที่ไม่มีอาร์เอ็นเอสายคู่หรือกลุ่มที่กิน อาหารเม็ด แสดงให้ห็นว่ากุ้งได้รับอาร์เอ็นสายคู่ต่อยืน Rab7 จากอาหารในปริมาณที่สามารถไปกระตุ้น กระบวนการ RNAi ภายในซลล์และส่งผลให้มีการลระดับปริมาณอาร์เอ็นเอของขึ้น Rab7 ลงได้อย่าง เด่นชัด เมื่อนำเทกนิดนี้มาเตรียมอาหารผสมแบคที่เรียที่มีอาร์เอ็นเอสาขคู่ที่จำเพาะต่อขี่น ร! และยืน vp ของ PmDNV แล้วให้กุ้งกินก่อนใด้รับไรัส พบว่าอาหารผสมดังกล่าวสามารถขับยั้งไวรัสได้ ส่งผลให้กุ้งในกลุ่ม นี้มีปริมาณไวรัส P๓DNV น้อยกว่ากังในกลุ่มควบกุมอย่างชัดเจน นอกจากนี้พบว่าเมื่อนำยืน vasin และ ยืน listeriolysin 0 มาดัดแปลงให้แบดที่เรียที่มีอาร์เอ็นเอสาขคู่สามารถสร้างไปรตีนจากขืนทั้งสองนี้ด้วย ซึ่ง คาดว่าจะมีส่วนช่วยให้แบดที่เรียข้าสู่ซลล์กุ้งได้ดีและมีประสิทธิภาพมากขึ้นและช่วยให้ประสิทธิภาพใน การปลดปล่อยอาร์เอ็นเอสาขคู่ออกสู่ไซโตพลาสซึ่มของเซลล์กุ้งได้ดีขึ้นตามลำดับ จากการทดลองจะเห็นว่า การแสดงออกของยืน Rab7 หรือยืน STAT ของกุ้งที่กินอาหารผสมที่มีแบคที่เรียดัดแปลงเป็นตัวนำอาร์เอ็น เอสายกู่ มีระดับน้อยกว่าเมื่อใช้แบคที่เรียที่ไม่ได้ดัดแปลงให้มีการสร้างไปรตีนจากขืนทั้งสอง ดังนั้นวิธีการ ดัดแปลงแบดที่เรีขดังกล่าวนี้น่าจะนำไปใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการบยั้งไวรัสในกุ้งจากการกินอาหาร ผสมต่อไป
บทคัดย่อ (EN): The dsRNA mediated RNAi activation is currently cfiective strategy for anti-virus in shrimp. However, the introduction of dsRNA into individual shrimp, to suppress the target gene, is success by injcction cither through hacmolymph or intramuscular. This is costly and not convenient when working in the shrimp farming industries. Therefore, we attempt to develop an approach for silencing the target gene through RNAi technology by oral feeding of bacterially expressed the specific dsRNA. The dict was formulated by mixing ground shrimp food powder with bacteria expressing dsRNA using ripe banana as pellet binder. Afier air drying, this formulated dict can be kept at room temperature for at lcast 3 months without dcgradation of dsRNA. The shrimp was continuously fed with inactivated bacteria expressing dsRNA specifically to shrimp Rab7 gene for 6 days. Twenty four hours later, the level of Rab7 gene transcript was measured by semi-quantitative RT-PCR. The reduction of Rab7 transcript was observed when compared to the control shrimp (fed with bacteria containing empty vector or fed with commercial food pellet). Our results suggest dsRNA in the formulated dict can deliver into shrimp cells and eventually trigger specific gene silencing. To inhibit PmDNV, bacteria expressing dsRNAs targcted to viral nsl and vp genes were used. Shrimp received this mixed diet before and after PmDNV challenge had significantly less virus level than the control shrimp. Moreover, to improve the cfliciency of this approach, two bacterial genes, invasin (inv) and listeriolysin O (Ilo), were employed to engincer the bacteria (HT1 15) to permit an eficient entry into the shrimp cells as well as escape dsRNA from the entry vesicles to cell cytoplasm, respectively. The levels of Rab7 or STAT transcripts of shrimp treated with these modified bacteria (HT 115-Rab7-inv or HT115-STAT-llo) were lower than those of the control shrimp treated with un-modified bacteria (HT115-Rab7 or HT115-STAT). It indicated that the modification of bacteria with these two proteins may serve as a stratcgy to improve the RNAi mediated viral inhibition via orally bacteria delivery system in the future.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยมหิดล
คำสำคัญ (EN): listeriolysin O
เจ้าของลิขสิทธิ์: สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

พงโสภี อัตศาสตร์. "การเพิ่มประสิทธิภาพการนำอาร์เอ็นเอสายคู่เข้าสู่เซลล์กุ้งจากการกินแบคทีเรียโดยอาศัยโปรตีน invasin และ listeriolysin ODevelopment of double-stranded RNA delivery into shrimp cells by invasin and listeriolysin O". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2556

พงโสภี อัตศาสตร์. "การเพิ่มประสิทธิภาพการนำอาร์เอ็นเอสายคู่เข้าสู่เซลล์กุ้งจากการกินแบคทีเรียโดยอาศัยโปรตีน invasin และ listeriolysin ODevelopment of double-stranded RNA delivery into shrimp cells by invasin and listeriolysin O". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2556. Print.



TARR Wordcloud:
การเพิ่มประสิทธิภาพการนำอาร์เอ็นเอสายคู่เข้าสู่เซลล์กุ้งจากการกินแบคทีเรียโดยอาศัยโปรตีน invasin และ listeriolysin O
พงโสภี อัตศาสตร์
มหาวิทยาลัยมหิดล
30 กันยายน 2556
การผลิตแบคทีเรียให้สร้างอาร์เอ็นเอสายคู่มีฤทธิ์ยับยั้งการติดเชื้อไวรัสหัวเหลือง การกระตุ้นลูกกุ้งในระยะ post larva ให้มีความต้านทานต่อโรคตัวแดงดวงขาวโดยการแช่ในสารละลายอาร์เอ็นเอสายคู่ การจัดจำแนกอาร์เอ็นเอที่ไม่แปลรหัสเป็นโปรตีนของสาหร่ายในกลุ่มไซยาโนแบคทีเรียโดยใช้แบบจำลอง Co-variance การใช้สาหร่ายเซลล์เดียวแคลไมโดโมแนส (Chlamydomonas reinhardtii) สำหรับการผลิตและส่งผ่านอาร์เอนเอสายคู่เพื่อป้องกันเชื้อไวรัสในกุ้ง ศึกษาการแสดงออกของยีนในเซลล์กุ้งและเซลล์แมลง การใช้เครื่องหมายดีเอ็นเอช่วยในการผนวกยีนต้านทานโรคไหม้เข้าสู่ข้าวสายพันธุ์ปรับปรุง IR 57514 เพื่อเพิ่มศักยภาพการผลิตข้าวในที่ราบลุ่มอาศัยน้ำฝนบริเวณลุ่มแม่น้ำโขง การเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการผลิตพลาสติกชีวภาพจากอ้อยและการนำไปใช้ ประสิทธิภาพของน้ำหมักชีวภาพต่อการเพิ่มผลผลิตทางการเกษตร การศึกษาแบคทีเรียในกระเพาะรูเมนเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการใช้อาหารโค การเพิ่มประสิทธิภาพในการผสมพันธุ์ยาง
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair