สืบค้นงานวิจัย
การศึกษาเสถียรภาพในระดับโมเลกุลที่บริเวณอนุรักษ์ของโปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด Cry4B
Anchanee Sangcharoen - มหาวิทยาลัยมหิดล
ชื่อเรื่อง: การศึกษาเสถียรภาพในระดับโมเลกุลที่บริเวณอนุรักษ์ของโปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด Cry4B
ชื่อเรื่อง (EN): Investigation of molecular stabilization in the conserved regions of the Bacillus thuringiensis Cry4B toxin
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Anchanee Sangcharoen
บทคัดย่อ: จากการเปรียบเทียบลำดับของกรดอะมิโนในโปรตีนสารพิษ (Cry) ชนิดต่างๆ จาก แบคทีเรีย Bacillus thuringiensis พบว่า มีบริเวณอนุรักษ์อยู่ 5 บริเวณกระจายตัวอยู่ในโครงสร้าง โปรตีนทั้ง 3 โดเมน ในการศึกษาเบื้องต้นโดยใช้โปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด Cry4B เป็นตัวอย่าง พบว่า กรดอะมิโนอนุรักษ์ที่ตั้งอยู่ในบริเวณเหล่านี้ มีบทบาทและความสำคัญอย่างยิ่งต่อเสถียรภาพและการ ม้วนพับตัวของโครงสร้างโปรตีน ในงานวิจัยนี้ จึงได้มีการสร้างโปรตีนกลายพันธุ์ของลำดับอะมิโน ชนิด R251A D259N Y267F T285V H466Y D470N K487A R627A และ E629Q ขึ้น โดยใช้ R203Q ซึ่งเป็นโปรตีนสารพิษกลายพันธุ์ที่ไม่ถูกตัดระหว่างเกลียวอัลฟาที่ 5 และ 6 เป็นโครงสร้าง ต้นแบบ จากการทดลองพบว่า โปรตีนกลายพันธุ์เกือบทุกชนิดมีระดับการแสดงออกของโปรตีนภาย ใต้การเหนี่ยวนำของสารละลาย IPTG มีปริมาณเทียบเท่ากับโปรตีนต้นแบบ โดยโปรตีนกลายพันธุ์ R251A H466Y และ D470N มีคุณสมบัติต่างๆ เช่น ความสามารถในการละลายในสารละลาย คาร์บอเนต การตัดย่อยด้วยเอนไซม์จนได้โครงสร้างที่ออกฤทธิ์ได้ และเสถียรภาพต่อสารละลาย GuHCl คล้ายกับโปรตีนต้นแบบ ซึ่งสามารถบ่งชี้ได้ว่า โปรตีนกลายพันธุ์เหล่านี้มีความสามารถใน การม้วนพับตัวเป็นโครงสร้างคล้ายกับโปรตีนต้นแบบ ในขณะที่ โปรตีนกลายพันธุ์ D259N Y267F T285V K487A และ R627A สูญเสียคุณสมบัติในการละลายเมื่อเทียบกับโปรตีนต้นแบบ สำหรับ โปรตีนกลายพันธุ์ E629Q มีความสามารถในการละลายแต่ไม่พบโปรตีนขนาด 65 กิโลดาลตันหลัง จากการถูกตัดย่อยด้วยเอนไซม์ จากผลการทดลองข้างต้น สามารถระบุได้ว่า ปฏิสัมพันธ์ที่เกิดขึ้นบน กรดอะมิโนที่ถูกเปลี่ยนแปลงเหล่านี้มีความสำคัญต่อการม้วนพับตัวของโครงสร้างและการรักษา เสถียรภาพของโปรตีน การเปลี่ยนแปลงกรดอะมิโนเหล่านี้ทำให้โปรตีนไม่สามารถเกิดการม้วนพับ เป็นโครงสร้างที่ถูกต้องได้ ในการพิจารณาโดยใช้โครงสร้าง 3 มิติของโปรตีน Cry4B พบว่าปฏิ สัมพันธ์เหล่านี้เกิดขึ้นจากปฏิกิริยาระหว่างประจุ หรือพันธะไฮโดรเจน ซึ่งเกิดขึ้นระหว่างกรดอะมิ โนที่มีตำแหน่งตั้งอยู่ในบริเวณอนุรักษ์ต่างๆ ทั้งสิ้น
บทคัดย่อ (EN): 6 loop, R203Q, as a template. The generated mutant toxins were expressed as a 130-kDa protoxin under IPTG induction. Most of the mutants were expressed in a comparable level to the template. The mutant toxins, R251A, H466Y and D470N were soluble in carbonate buffer pH 9.8 and produced the 65-kDa active form under trypsin processing. The stabilizing free energy values of R203Q template, R251A, H466Y and D470N obtained from a chemical unfolding experiment under GuHCl titration are 23.72, 24.98, 23.39 and 23.38 kcal/mole, respectively. The results implied that these mutants still adopted the native-like structure. The other mutants, D259N, Y267F, T285V, K487A, and R627A, were obtained as insoluble products in the native buffer. For E629Q, it was found as soluble protoxin but gave no product of a 65-kDa protein. These results suggested that the stabilizing interactions provided by these residues have critical contributions in protein folding and molecular stabilization. These stabilizing interactions were identified by using the Cry4B X-ray structure as an electrostatic interaction and hydrogen bonding that occur among the residues of conserved blocks
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://dcms.thailis.or.th/dcms/dccheck.php?Int_code=126&RecId=1153&obj_id=665
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยมหิดล
คำสำคัญ (EN): Toxins
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยมหิดล
รายละเอียด: จากการเปรียบเทียบลำดับของกรดอะมิโนในโปรตีนสารพิษ (Cry) ชนิดต่างๆ จาก แบคทีเรีย Bacillus thuringiensis พบว่า มีบริเวณอนุรักษ์อยู่ 5 บริเวณกระจายตัวอยู่ในโครงสร้าง โปรตีนทั้ง 3 โดเมน ในการศึกษาเบื้องต้นโดยใช้โปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด Cry4B เป็นตัวอย่าง พบว่า กรดอะมิโนอนุรักษ์ที่ตั้งอยู่ในบริเวณเหล่านี้ มีบทบาทและความสำคัญอย่างยิ่งต่อเสถียรภาพและการ ม้วนพับตัวของโครงสร้างโปรตีน ในงานวิจัยนี้ จึงได้มีการสร้างโปรตีนกลายพันธุ์ของลำดับอะมิโน ชนิด R251A D259N Y267F T285V H466Y D470N K487A R627A และ E629Q ขึ้น โดยใช้ R203Q ซึ่งเป็นโปรตีนสารพิษกลายพันธุ์ที่ไม่ถูกตัดระหว่างเกลียวอัลฟาที่ 5 และ 6 เป็นโครงสร้าง ต้นแบบ จากการทดลองพบว่า โปรตีนกลายพันธุ์เกือบทุกชนิดมีระดับการแสดงออกของโปรตีนภาย ใต้การเหนี่ยวนำของสารละลาย IPTG มีปริมาณเทียบเท่ากับโปรตีนต้นแบบ โดยโปรตีนกลายพันธุ์ R251A H466Y และ D470N มีคุณสมบัติต่างๆ เช่น ความสามารถในการละลายในสารละลาย คาร์บอเนต การตัดย่อยด้วยเอนไซม์จนได้โครงสร้างที่ออกฤทธิ์ได้ และเสถียรภาพต่อสารละลาย GuHCl คล้ายกับโปรตีนต้นแบบ ซึ่งสามารถบ่งชี้ได้ว่า โปรตีนกลายพันธุ์เหล่านี้มีความสามารถใน การม้วนพับตัวเป็นโครงสร้างคล้ายกับโปรตีนต้นแบบ ในขณะที่ โปรตีนกลายพันธุ์ D259N Y267F T285V K487A และ R627A สูญเสียคุณสมบัติในการละลายเมื่อเทียบกับโปรตีนต้นแบบ สำหรับ โปรตีนกลายพันธุ์ E629Q มีความสามารถในการละลายแต่ไม่พบโปรตีนขนาด 65 กิโลดาลตันหลัง จากการถูกตัดย่อยด้วยเอนไซม์ จากผลการทดลองข้างต้น สามารถระบุได้ว่า ปฏิสัมพันธ์ที่เกิดขึ้นบน กรดอะมิโนที่ถูกเปลี่ยนแปลงเหล่านี้มีความสำคัญต่อการม้วนพับตัวของโครงสร้างและการรักษา เสถียรภาพของโปรตีน การเปลี่ยนแปลงกรดอะมิโนเหล่านี้ทำให้โปรตีนไม่สามารถเกิดการม้วนพับ เป็นโครงสร้างที่ถูกต้องได้ ในการพิจารณาโดยใช้โครงสร้าง 3 มิติของโปรตีน Cry4B พบว่าปฏิ สัมพันธ์เหล่านี้เกิดขึ้นจากปฏิกิริยาระหว่างประจุ หรือพันธะไฮโดรเจน ซึ่งเกิดขึ้นระหว่างกรดอะมิ โนที่มีตำแหน่งตั้งอยู่ในบริเวณอนุรักษ์ต่างๆ ทั้งสิ้น
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

Anchanee Sangcharoen. "การศึกษาเสถียรภาพในระดับโมเลกุลที่บริเวณอนุรักษ์ของโปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด Cry4BInvestigation of molecular stabilization in the conserved regions of the Bacillus thuringiensis Cry4B toxin". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2546

Anchanee Sangcharoen. "การศึกษาเสถียรภาพในระดับโมเลกุลที่บริเวณอนุรักษ์ของโปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด Cry4BInvestigation of molecular stabilization in the conserved regions of the Bacillus thuringiensis Cry4B toxin". มหาวิทยาลัยมหิดล. 2546. Print.



TARR Wordcloud:
การศึกษาเสถียรภาพในระดับโมเลกุลที่บริเวณอนุรักษ์ของโปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด Cry4B
Anchanee Sangcharoen
มหาวิทยาลัยมหิดล
2546
การแสดงออกและศึกษาคุณสมบัติของชิ้นส่วนโปรตีน Domain II และ II-III ของโปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด CRY4Ba จากเชื้อแบคทีเรีย Baci การเปลี่ยนแปลงยีนเพื่อศึกษากรดอะมิโนที่เกี่ยวข้องกับความเป็นพิษในบริเวณส่วนที่ 2 ของโปรตีนชนิด Cry4Ba จาก Bacillus thuringiensis สมุนไพรพื้นเมืองไทย 3 ชนิดที่ใช้ในการควบคุมยุงลายและลูกน้ำยุงรำคาญ การทดสอบฤทธิ์การฆ่าหอยและลูกน้ำยุงของมะเขือขื่นในห้องปฏิบัติการ การศึกษาบทบาทของกรดอะมิโน Cysteine ต่อการม้วนพับของโปรตีนและการออกฤทธิ์ต่อลูกน้ำยุงของโปรตีนพิษ BinB จาก Bacillus sphaericus. การแสดงออกทางพันธุกรรมของโปรตีนติดตามเพื่อการประยุกต์ใช้ทางภูมิคุ้มกันวิทยาและการศึกษาทางชีววิทยาระดับโมเลกุล การศึกษาคุณลักษณะการดื้อยาในระดับโมเลกุลและความหลากหลายทาง การศึกษาคุณสมบัติระดับโมเลกุลของโปรตีนเฉพาะส่วนที่ทำให้เกิดรูรั่วบนผิวเซลล์ของโปรตีนสารพิษ Adenylate cyclase-haemolysin จากเชื้อ Bordetel การโคลนและการจำแนกยีนสร้างโปรตีนตัวเหมือนแคดฮีรีนในลูกน้ำยุงลาย การเปลี่ยนแปลงยีนเพื่อศึกษากรดอะมิโนที่เกี่ยวข้องกับความเป็นพิษซึ่งอยู่ในส่วนที่ 2 ของโปรตีนชนิด Cry4Ba จากแบคทีเรีย Bacillus thuringiensis
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair