สืบค้นงานวิจัย
การพัฒนาวิธีตรวจหาซีรัมนิวทรัลไลซิงแอนติบอดีต่อไวรัสพีพีอาร์ด้วยเทคนิคซูโดไทป์
นวพล เตชะเกรียงไกร - สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)
ชื่อเรื่อง: การพัฒนาวิธีตรวจหาซีรัมนิวทรัลไลซิงแอนติบอดีต่อไวรัสพีพีอาร์ด้วยเทคนิคซูโดไทป์
ชื่อเรื่อง (EN): Development of a pseudotype-based serum neutralisation test against peste des petits ruminants virus (PPRV)
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: นวพล เตชะเกรียงไกร
หน่วยงานสังกัดผู้แต่ง:
  1. คณะสัตวแพทยศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
บทคัดย่อ: ปัจจุบัน แผมการมน้ำระวังการคิดเชื้อใดที่พีอารในประเทศไทย โดยกรมปศุสัทว์ กระทรายทราษารคาาาา และสหกรณ์ กระทำโดยการตรวจคัดกรองการมีอยู่ของแอนติบอดีต่อไวรัสพีพีอาร์ด้วยชุดตรวจอีไลซาที่อาศัย หลักการของการแข่งขันระหว่างแอนติบอดีควบคุมบวก และแอนติบอดีต่อไวรัสในตัวอย่างชีรัมส่งตรวจ (competitive ELISA) ชุดตรวจอีไลซานี้ แม้มีความไว (sensitivity) และความจำเพาะ (specity) ในการ ตรวจที่สูง แต่ก็มีหน้าต่างของความไม่แน่นอน (inconclusive readout) เมื่ออ่านค่าได้ระหว่างร้อยละ 50 ถึง 60 เมื่อเปรียบเทียบกับแอนติบอดีตัวควบคุมคุมวก ซึ่งตัวอย่างที่อ่านค่าได้ไม่แน่นอนเหล่านี้ จำเป็นต้องได้รับ การวินิจฉัยยืนยันด้วยการตรวจหาชีรัมนิวทรัลไลชิงแอนติบอดี ซึ่งเป็นการตรวจมาตรฐานสูงสุด (gold standard) ตามคู่มือของ OIE แต่วิธีการนี้มีขั้นตอนการปฏิบัติการที่ยุ่งยาก ต้องใช้งานไวรัสพีพีพีอาร์ที่มีชีวิต ซึ่ง ประเทศไทยไม่มีการถือครอง และยังจำเป็นต้องทำในห้องปฏิบัติการที่ระดับความปลอดภัยทางชีวภาพระดับ สาม โครงการวิจัยนี้จึงได้พัฒนาพีพีอาร์ซูโดไทป์บนแกนกลางของรีคอมบินนท์ไวรัสวีเอสวีขึ้นมาเพื่อใช้แทน ไวรัสที่มีชีวิต และพัฒนาต่อยอดขึ้นเป็นวิธีการตรวจหาชีรัมนิวทรัลไลซิงแอนติบอดีด้วยชูโดไทป์โดยใช้งาน ร่วมกับเซลล์เป้าหมาย HEK293 ที่แสดงออกตัวรับ dogSLAM พีพีอาร์ชูโดไทป์ที่สร้างได้มีไตเตอร์เฉลี่ยอยู่ที่ 5.45x101 TCIDy/มิลลิลิตร สามารถตรวจการติดเชื้อเข้าเซลล์โดยการแสดงออกของกรีนฟลูอเรสเซนท์ โปรตีนภายใต้กล้องจุลทรรศน์ฟูลูออเรสเซนส์ชนิดหัวกลับภายใน 48 ชั่วโมง ซึ่งใช้เวลาสั้นกว่าการอ่านผลด้วย พยาธิสภาพของเซลล์ที่ติดเชื้อด้วยไวรัสที่มีชีวิตประมาณ 7 เท่า (14 วัน) เมื่อเปรียบเทียบการชุดสำเร็จไอดี สกรีน พีพีอาร์ คอมเพทิชั่นที่ใช้ตรวจหาแอนติบอดีต่อไวรัสพีพีอาร์ในปัจจุบัน จากตัวอย่างชีรัมแพะจำนวน 115 ตัวอย่างพบว่ามี 12 ตัวอย่างที่ให้ผลบวกตรงกันทั้งสองวิธีและ 64 ตัวอย่างที่ให้ผลลบตรงกันทั้งสองวิธี แต่ มี 38 ตัวอย่างที่แสดงผลบวกด้วยชุดตรวจอีไลซาแต่แสดงผลลบด้วยวิธีชีรัมนิวทรัลไลเซชั่นด้วยชูโดไทป์ และ สามารถตรวจพบนิวทรัลไลชิงแอนติอบอดีในหนึ่งตัวอย่างที่แสดงผลไม่แน่นอนด้วยวิธีอีไลชา คิดเป็น ความจำเพาะและความไวทางการวินิจฉัยอยู่ที่ร้อยละ 100 และร้อยละ 24 ตามลำดับและมีค่าทำนายผลบวกและค่าทำนายผลลบที่ร้อยละ 100 และร้อยละ 62.75 ตามลำดับ โดยค่าร้อยละการกีดขวางที่อ่านได้จากวิธี อีไลซาและแอนติบอดีไตเตอร์ที่วัดได้จากจากวิธีชีซีรัมนิวทรัลไลเซชั่นด้วยเทคนิคซูโดไทป์มีความสัมพันธ์เชิงลบ ระดับปานกลางอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (Pearson r = -0.3979 ถึง -0.5786) โดยสรุป วิธีการตรวจหาชีรัม นิวทรัลไลซิงแอนติบอดีด้วยซูโดไทป์ที่พัฒนาขึ้นในโครงการวิจัยนี้สามารถนำไปสู่การเปลี่ยนแปลงวิธีการ วินิจฉัยยืนยันการสัมผัสไวรัสพีพีอาร์ของประเทศไทย เช่นตรวจคัดกรองเบื้องต้นด้วยวิธีอีไลซาและตรวจยืนยัน ด้วยการตรวจหาชีรัมนิวทรัลไลซิ่งแอนติบอดีด้วยพีพีอาร์ซูโดไทป์ อย่างไรก็ตาม ควรมีการทดสอบ ประสิทธิภาพเปรียบเทียบกับวิธีการตรวจหาซีรัมนิวทรัลไลซิ่งแอนติบอดีด้วยไวรัสพีพีพีอาร์ที่มีชีวิตต่อไป
บทคัดย่อ (EN): The current surveillance program for peste des petits ruminants virus, PPRV by the Department of Livestock Development, Ministry of Agriculture and Coorporation, Thailand, utilise a commercially available PPR competitive ELISA. Even though the high diagnostic sensitivity and specificity are observed with this ELISA, there remains a window of doubt, when %blocking lies between 50% and 60%. Confirmation with a gold standard, the serum neutralisation test (SNT) is recommended for those doubtful samples according to OIE guideline. However, SNT is laborious, expensive and require live PPRV, which currently available in Thailand. Additionally, handling of live PPRV requires a biosecurity level 3 (BSL3) facility. To address the abovementioned difficulties, this project has developed a PPRV pseudotype based on a recombinant vesicular stomatitis virus (VSV) backbone and a dogSLAM expressing target cell and used as a pseudotype-based serum neutralisation test. The developed PPRV pseudotype reached an average titre of 5.45x104 TCID50/ml. Pseudotype infection, as reflected by green fluorescent protein (GFP) signal, is readily observable under an inverted fluorescent microscope within 48 hours, compared to a two-weeks incubation time of live PPRV cytopathic effect. From the 115 goat sera tested in this project, 12 and 64 sera tested positive and negative, respectively by both the competitive ELISA and the psudotype-based SNT. Thirty-eight tested positive by the competitive ELISA but negative by the psudotype-based SNT. Altogether, in comparison with the competitive ELISA, the psudotype-based SNT has a diagnostic specificity and sensitivity of 100% and 24, respectively, with a positive predictive and negative predictive value of 100% and 62.75%, respectively. Furthermore, a statistically significant, intermediate correlation (Pearson r = -0.3979 to-0.5786) was observed between a blocking percentage read by the competitive ELISA and a neutralising titre read by the psudotype-based SNT. In conclusion, the psudotype-based SNT is highly specific and can be used as a confirmation test for those doubtful and positive serum samples tested on the competitive ELISA. However, its performance should be further assessed against a live-virus neutralisation test.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)
คำสำคัญ: แพะ
คำสำคัญ (EN): goat
เจ้าของลิขสิทธิ์: คณะสัตวแพทยศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

นวพล เตชะเกรียงไกร. "การพัฒนาวิธีตรวจหาซีรัมนิวทรัลไลซิงแอนติบอดีต่อไวรัสพีพีอาร์ด้วยเทคนิคซูโดไทป์Development of a pseudotype-based serum neutralisation test against peste des petits ruminants virus (PPRV)". สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน) . 2565

นวพล เตชะเกรียงไกร. "การพัฒนาวิธีตรวจหาซีรัมนิวทรัลไลซิงแอนติบอดีต่อไวรัสพีพีอาร์ด้วยเทคนิคซูโดไทป์Development of a pseudotype-based serum neutralisation test against peste des petits ruminants virus (PPRV)". สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน) . 2565. Print.



TARR Wordcloud:
การพัฒนาวิธีตรวจหาซีรัมนิวทรัลไลซิงแอนติบอดีต่อไวรัสพีพีอาร์ด้วยเทคนิคซูโดไทป์
นวพล เตชะเกรียงไกร
สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)
2565
การพัฒนาชุดตรวจดีเอ็นเอเซ็นเซอร์สําหรับตรวจหาเชื้อเอชพีพีอาร์อารเอสในสุกรอย่างง่ายและรวดเร็ว การจัดทําฐานข้อมูลความแปรปรวนของลําดับนิวคลีโอไทด์ระดับจีโนมเพื่อค้นหาตําแหน่งสนิปส์ที่สัมพันธ์กับปริมาณโปรตีนหลักและสารออกฤทธิ์ในเมล็ดข้าวไทย การระบุเครื่องหมายพันธุกรรมที่เกี่ยวข้องกับกลไกทางชีวภาพที่ตอบสนองต่อสภาพอากาศร้อนจัดเนื่องจากภาวะแล้งด้วยเทคนิคทรานสคริปโตมเพื่อใช้ในการปรับปรุงพันธุ์ไก่เนื้อ การพัฒนาวิธีการตรวจโรคไวรัสอุบัติใหม่และแยกเชื้อทิลาเปียพาร์โวไวรัสในฟาร์มปลานิลและปลานิลแดง การพัฒนาดีเอ็นเอไบโอเซนเซอร์เพื่อการตรวจหาเชื้อลิสทีเรียในผลิตภัณฑ์อาหาร การพัฒนาดีเอ็นเอไบโอเซนเซอร์เพื่อการตรวจหาเชื้อแคมไพโลแบคเตอร์ในผลิตภัณฑ์เนื้อสัตว์ การพัฒนาแบคทีเรีย Lactobacillus plantarum ที่แยกได้จากมูลสุกรพันธุ์พื้นเมืองเพื่อใช้เป็นโพรไบโอติกแบคทีเรียที่มีคุณสมบัติในการป้องกันโรคพีอีดีในสุกร การพัฒนาชุดตรวจภูมิคุ้มกันของโรคอหิวาต์แอฟริกาในสุกร “การตรวจสอบความถูกต้องของชุดทดสอบทางจุลชีววิทยาเชิงคุณภาพของชุดตรวจดีเอ็น เอแบบแถบชนิด 3 in 1 สําหรับเชื้อซัลโมเนลลา ลิสทีเรีย และ แคมไพโลแบคเตอร์ในผลิตภัณฑ์อาหาร” การสร้างวิธีตรวจสุขภาพกุ้งเพื่อคัดเลือกพ่อแม่พันธุ์ และลูกกุ้งที่ทนต่อโรคไวรัสตัวแดงดวงขาว
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair