สืบค้นงานวิจัย
การถ่ายยีนเรพลิเคสที่ไม่สมบูรณ์ของ cucumber mosaic virus เข้าสู่มะเขือเทศ
อัญจนา บุญชด - มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
ชื่อเรื่อง: การถ่ายยีนเรพลิเคสที่ไม่สมบูรณ์ของ cucumber mosaic virus เข้าสู่มะเขือเทศ
ชื่อเรื่อง (EN): Transformation of tomato (lycopersicon esculentum MILL.) with the defective replicase gene of cucumber mosaic virus
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: อัญจนา บุญชด
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Anjana Bhunchoth
บทคัดย่อ: ถ่ายยีนเข้าสู่มะเขือเทศพันธุ์การค้า 2 พันธุ์คือ สีดาทิพย์ 3 และวีเอฟ 134-1-2 ด้วยวิธีการใช้เชื้ออะโกรแบคทีเรียบ่มร่วมกับชิ้นใบมะเขือเทศแล้วเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อชิ้นใบให้เป็นต้นสมบูรณ์เพื่อคัดเลือกและปรับปรุงพันธุ์มะเขือเทศให้มีความต้านทานต่อไวรัส โดยใช้ยีนเรพลิเคสทีไม่สมบูรณ์ (defective replicase gene, ยีน Rep) ของ cucumber mosaic virus (CMV) เป็นกลไกในการสร้างความต้านทานโรคใบด่างที่เกิดจาก CMV ศึกษาพัฒนาวิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อมะเขือเทศทั้ง 2 พันธุ์พบว่าการเพาะเลี้ยงมะเขือเทศพันธุ์สีดาทิพย์ 3 และวีเอฟ 134-1-2 โดยใช้ชิ้นส่วนใบเลี้ยงเพาะเลี่ยงในอาหาร MS-B5 ที่เติม BA ร่วมกับ IAA (BA/LAA) ในอัตรา 1.0/.02 และ 2.5/0.2 มก./ล. และเพาะเลี้ยงชิ้นใบในที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน สามารถชักนำการเกิดยอดได้ในในอัตรา 50.0 และ 60.0 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ สูตรอาหารที่เหมาะสมสำหรับยืดยอดมะเขือเทศทั้ง 2 พันธุ์ได้แก่ อาหาร MS-B5 ที่เติม GA3 อัตรา 0.1, 1.0 หรือ 2.0 มก./ล. แล้วชักนำรากและยืดรากในอาหารสูตร MS-B5 เมื่อทดลองถ่ายยีน Rep เข้าสู่มะเขือเทศพันธุ์สีดาทิพย์ 3 และวีเอฟ 134-1-2 โดยใช้เชื้ออะโกรแบคทีเรีย 2 สายพันธุ์ คือ LBA4404 และ AgL1 พบว่าไม่สามารถเพาะเลี้ยงชิ้นใบมะเขือเทศพันธุ์สีดาทิพย์ 3 ที่ผ่านการถ่ายยีนแล้วได้ในอาหารคัดเลือก แต่ในการถ่ายยีนเข้าสู่มะเขือเทศพันธุ์วีเอฟ 134-1-2 โดยใช้เชื้ออะโกรแบคทีเรียสายพันธุ์ AgL1 สามารถเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อชิ้นใบดภายหลังการถ่ายยีนจนเจริญเป็นต้นสมบูรณ์ได้ในอัตรา 5.06-11.20 เปอร์เซ็นต์ การใช้เทคนิค polymerase chaing reaction และ genomic Southern hybridization ตรวจสอบยีน Rep ในโครโมโซมของมะเขือเทศพันธุ์วีเอฟ 134-1-2 ที่ได้รับการถ่ายยีน แสดงให้เห็นว่ามียีน Rep จำนวน 1-2 ชุด สอดแทรกในโครโมโซมของมะเขือเทศจำลองพันธุ์ line ต่าง ๆ จากการทดลองความต้านทานโรคของมะเขือเทศจำลองพันธุ์ R0line # 2, 3-2 และ 4 โดยการปลูกเชื้อ CMV ด้วยวิธีกล พบว่ามะเขือเทศทุก line ที่นำมาทดสอบมีความต้านทานต่อไวรัส CMV โดยเมื่อตรวจวัดปริมาณไวรัสด้วยเทคนิค ELISA ไม่พบ CMV ในมะเขือเทศจำลองพันธุ์ line # 2 ส่วน line # 3-2 และ 4 ตรวจพบปริมาณ CMV ในระดับต่ำ มะเขือเทศจำลองพันธุ์สามารถเจริญเติบโตออกดอกและติดผลได้ภายหลังย้ายปลูกแล้ว 70 วัน ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า การถ่ายยีน Rep ของ CMV เข้าสู่มะเขือเทศ สามารถปรับปรุงพันธุ์มะเขือเทศวีเอฟ 134-1-2 ให้ต้านทานต่อ CMV ได้เป็นผลสำเร็จTransformation of commercial tomato cultivars, Lycopersicon esculentum cv. Seedathip 3 and VF134-1-2 by Agrobacterium-mediated leaf disc technique have been conducted to produce virus resistant plant. The defective replicase gene (Rep gene) of cucumber mosaic virus (CMV) was used for inducing resistance against mosaic disease caused by CMV. The regeneration system of tomato tissue culture was developed. Shoot organogenesis of Seedathip 3 and VF134-1-2 tomatoes had been successfully generated by culturing seedling-cotyledonous leaf disc in MS-B5 medium supplemented with BA and IAA (BA/IAA) at concentration of 1.0/0.2 and 2.5/0.2 mg/l. Leaf tissues were kept under a 16 h light period for 4 weeks providing 50.0 and 60.0 regeneration percentage, respectively. The culture media suitable for shoot elongation was MS-B5 supplemented with GA3 0.1, 1 or 2 mg/l, and the MS-B5 medium was subsequently used for root induction and elongation. The Agrobacterium, strain LBA4404 or AgL 1 was ineffectively transformed Rep gene into Seedathip 3 tomato while the AgL1 strain performed effectively gene transfer to VF134-1-2 tomato, providing about 5.06-11.20 percent transformation efficiency. The Rep gene fragment had been readily detected in transformed VF134-1-2 tomato plants by polymerase chain reaction and genomic Southern hybridization techniques. The result indicated that 1-2 copies of Rep gene had been integrated into chromosomes of these transgenic. Resistance to CMV of transgenic VF134-1-2 tomato lines # 2, 3-2 and 4 have been evaluated by mechanical inoculation of CMV-containing sap on transgenic tomato leaves. All tested plants exhibited resistance to CMV infection without showing and disease symptom. As determined by ELISA, CMV could not be detected in transgenic tomato line # 2, whereas low titre of CMV was observed in line # 3-2 and 4. These transgenic tomatoes were fertile and had fruit set within 70 days after transplanting. Transformation of tomato with CMV-Rep gene has been implemented hereby to produce VF134-1-2 tomato resistant to CMV.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://www.lib.ku.ac.th/KUthesis/AnjanaBhu/index.html
เผยแพร่โดย: มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
คำสำคัญ: พันธุวิศวกรรม
เจ้าของลิขสิทธิ์: มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
รายละเอียด: ถ่ายยีนเข้าสู่มะเขือเทศพันธุ์การค้า 2 พันธุ์คือ สีดาทิพย์ 3 และวีเอฟ 134-1-2 ด้วยวิธีการใช้เชื้ออะโกรแบคทีเรียบ่มร่วมกับชิ้นใบมะเขือเทศแล้วเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อชิ้นใบให้เป็นต้นสมบูรณ์เพื่อคัดเลือกและปรับปรุงพันธุ์มะเขือเทศให้มีความต้านทานต่อไวรัส โดยใช้ยีนเรพลิเคสทีไม่สมบูรณ์ (defective replicase gene, ยีน Rep) ของ cucumber mosaic virus (CMV) เป็นกลไกในการสร้างความต้านทานโรคใบด่างที่เกิดจาก CMV ศึกษาพัฒนาวิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อมะเขือเทศทั้ง 2 พันธุ์พบว่าการเพาะเลี้ยงมะเขือเทศพันธุ์สีดาทิพย์ 3 และวีเอฟ 134-1-2 โดยใช้ชิ้นส่วนใบเลี้ยงเพาะเลี่ยงในอาหาร MS-B5 ที่เติม BA ร่วมกับ IAA (BA/LAA) ในอัตรา 1.0/.02 และ 2.5/0.2 มก./ล. และเพาะเลี้ยงชิ้นใบในที่มีแสง 16 ชั่วโมงต่อวัน สามารถชักนำการเกิดยอดได้ในในอัตรา 50.0 และ 60.0 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ สูตรอาหารที่เหมาะสมสำหรับยืดยอดมะเขือเทศทั้ง 2 พันธุ์ได้แก่ อาหาร MS-B5 ที่เติม GA3 อัตรา 0.1, 1.0 หรือ 2.0 มก./ล. แล้วชักนำรากและยืดรากในอาหารสูตร MS-B5 เมื่อทดลองถ่ายยีน Rep เข้าสู่มะเขือเทศพันธุ์สีดาทิพย์ 3 และวีเอฟ 134-1-2 โดยใช้เชื้ออะโกรแบคทีเรีย 2 สายพันธุ์ คือ LBA4404 และ AgL1 พบว่าไม่สามารถเพาะเลี้ยงชิ้นใบมะเขือเทศพันธุ์สีดาทิพย์ 3 ที่ผ่านการถ่ายยีนแล้วได้ในอาหารคัดเลือก แต่ในการถ่ายยีนเข้าสู่มะเขือเทศพันธุ์วีเอฟ 134-1-2 โดยใช้เชื้ออะโกรแบคทีเรียสายพันธุ์ AgL1 สามารถเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อชิ้นใบดภายหลังการถ่ายยีนจนเจริญเป็นต้นสมบูรณ์ได้ในอัตรา 5.06-11.20 เปอร์เซ็นต์ การใช้เทคนิค polymerase chaing reaction และ genomic Southern hybridization ตรวจสอบยีน Rep ในโครโมโซมของมะเขือเทศพันธุ์วีเอฟ 134-1-2 ที่ได้รับการถ่ายยีน แสดงให้เห็นว่ามียีน Rep จำนวน 1-2 ชุด สอดแทรกในโครโมโซมของมะเขือเทศจำลองพันธุ์ line ต่าง ๆ จากการทดลองความต้านทานโรคของมะเขือเทศจำลองพันธุ์ R0line # 2, 3-2 และ 4 โดยการปลูกเชื้อ CMV ด้วยวิธีกล พบว่ามะเขือเทศทุก line ที่นำมาทดสอบมีความต้านทานต่อไวรัส CMV โดยเมื่อตรวจวัดปริมาณไวรัสด้วยเทคนิค ELISA ไม่พบ CMV ในมะเขือเทศจำลองพันธุ์ line # 2 ส่วน line # 3-2 และ 4 ตรวจพบปริมาณ CMV ในระดับต่ำ มะเขือเทศจำลองพันธุ์สามารถเจริญเติบโตออกดอกและติดผลได้ภายหลังย้ายปลูกแล้ว 70 วัน ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า การถ่ายยีน Rep ของ CMV เข้าสู่มะเขือเทศ สามารถปรับปรุงพันธุ์มะเขือเทศวีเอฟ 134-1-2 ให้ต้านทานต่อ CMV ได้เป็นผลสำเร็จTransformation of commercial tomato cultivars, Lycopersicon esculentum cv. Seedathip 3 and VF134-1-2 by Agrobacterium-mediated leaf disc technique have been conducted to produce virus resistant plant. The defective replicase gene (Rep gene) of cucumber mosaic virus (CMV) was used for inducing resistance against mosaic disease caused by CMV. The regeneration system of tomato tissue culture was developed. Shoot organogenesis of Seedathip 3 and VF134-1-2 tomatoes had been successfully generated by culturing seedling-cotyledonous leaf disc in MS-B5 medium supplemented with BA and IAA (BA/IAA) at concentration of 1.0/0.2 and 2.5/0.2 mg/l. Leaf tissues were kept under a 16 h light period for 4 weeks providing 50.0 and 60.0 regeneration percentage, respectively. The culture media suitable for shoot elongation was MS-B5 supplemented with GA3 0.1, 1 or 2 mg/l, and the MS-B5 medium was subsequently used for root induction and elongation. The Agrobacterium, strain LBA4404 or AgL 1 was ineffectively transformed Rep gene into Seedathip 3 tomato while the AgL1 strain performed effectively gene transfer to VF134-1-2 tomato, providing about 5.06-11.20 percent transformation efficiency. The Rep gene fragment had been readily detected in transformed VF134-1-2 tomato plants by polymerase chain reaction and genomic Southern hybridization techniques. The result indicated that 1-2 copies of Rep gene had been integrated into chromosomes of these transgenic. Resistance to CMV of transgenic VF134-1-2 tomato lines # 2, 3-2 and 4 have been evaluated by mechanical inoculation of CMV-containing sap on transgenic tomato leaves. All tested plants exhibited resistance to CMV infection without showing and disease symptom. As determined by ELISA, CMV could not be detected in transgenic tomato line # 2, whereas low titre of CMV was observed in line # 3-2 and 4. These transgenic tomatoes were fertile and had fruit set within 70 days after transplanting. Transformation of tomato with CMV-Rep gene has been implemented hereby to produce VF134-1-2 tomato resistant to CMV.
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

อัญจนา บุญชด. "การถ่ายยีนเรพลิเคสที่ไม่สมบูรณ์ของ cucumber mosaic virus เข้าสู่มะเขือเทศTransformation of tomato (lycopersicon esculentum MILL.) with the defective replicase gene of cucumber mosaic virus". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2544

อัญจนา บุญชด. "การถ่ายยีนเรพลิเคสที่ไม่สมบูรณ์ของ cucumber mosaic virus เข้าสู่มะเขือเทศTransformation of tomato (lycopersicon esculentum MILL.) with the defective replicase gene of cucumber mosaic virus". มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. 2544. Print.



TARR Wordcloud:
การถ่ายยีนเรพลิเคสที่ไม่สมบูรณ์ของ cucumber mosaic virus เข้าสู่มะเขือเทศ
อัญจนา บุญชด
มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
2544
การศึกษาการสูญเสียไลโคพีนในระหว่างกระบวนการผลิตซอสมะเขือเทศและมะเขือเทศแช่อิ่ม. การผลิตเมล็ดพันธุ์มะเขือเทศพันธุ์ดอยคำ สูตรชีวภัณฑ์ของเชื้อแบคทีเรียปฏิปักษ์เพื่อควบคุมโรคทางดินของมะเขือเทศ การศึกษาโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับกลไกการควบคุมการถอดรหัสของยีนที่ไม่แสดงออกในพืชที่ผ่านการถ่ายยีน การถ่ายยีนสร้างโปรตีน cylindrical inclusion ของเชื้อไวรัสจุดวงแหวนในมะละกอเข้าสู่พืช ผลของระดับแคลเซียมต่อการเจริญเติบโตของมะเขือเทศที่ปลูกในวัสดุปลูกไม่ใช้ดิน ผลของอุณหภูมิเทอร์โมเบรค ความเร็วรอบและขนาดของรูตะแกรงของเครื่องแยกกากต่อความคงตัวของนํ้ามะเขือเทศเข้มข้น การจัดเรียงตัวของยีนและการเกิดดีเอ็นเอเมทิลเลชั่นบนโปรโมเตอร์ในพืชที่ผ่านกระบวนการถ่ายยีน การศึกษาคุณสมบัติของยีนมะเร็งของไวรัส HPV16 : ความหลากหลายของยีน แหล่งที่อยู่และหน้าที่การกระตุ้นการแสดงออกของยีน การถ่ายยีนแอนติฟริซโปรตีนดัดแปรในสตรอเบอรี
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair