สืบค้นงานวิจัย
การวิจัยต่อยอดด้านความปลอดภัยของอาหารจากเชื้อแบคทีเรียก่อโรคอาหารเป็นพิษ: จากตลาดสู่โต๊ะอาหาร2
ศาสตราจารย์ ดร. สัตวแพทย์หญิง วันเพ็ญ ชัยคำภา - สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)
ชื่อเรื่อง: การวิจัยต่อยอดด้านความปลอดภัยของอาหารจากเชื้อแบคทีเรียก่อโรคอาหารเป็นพิษ: จากตลาดสู่โต๊ะอาหาร2
ชื่อเรื่อง (EN): Translational Research on Food Safety from Pathogenic Bacteria Causing Food Poisoning: from market to table
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ: ศาสตราจารย์ ดร. สัตวแพทย์หญิง วันเพ็ญ ชัยคำภา
หน่วยงานสังกัดผู้แต่ง:
  1. ภาควิชาปรสิตวิทยา คณะแพทยศาสตร์ศิริราชพยาบาล มหาวิทยาลัยมหิดล
บทคัดย่อ: โครงการวิจัยนี้มีจุดประสงค์หลัก เพื่อพัฒนาชุดตรวจสำเร็จรูปแบบอิมมูโนโครมาโตกราฟี สำหรับ ตรวจหาเชื้อแบคทีเรียก่อโรค คือ ลิสทีเรีย สปีชีส์ ลิสทีเรีย โมโนไซโตจีเนส และเชื้อวิบริโอ คอเลอเร ชีโร กรุ๊ปโอหนึ่ง ที่ปนเปื้อนในตัวอย่างอาหาร เพื่อให้สามารถตรวจได้สะดวก ประหยัด แม่นยำ และทราบผล เร็ว เมื่อเปรียบเทียบกับวิธีเพาะแยกและพิสูจน์เอกลักษณ์ของเชื้อที่เป็นวิธีมาตรฐานและวิธีตรวจหาดีเอ็น เอด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่แบบเรียลไทม์ รวมทั้งดำเนินการทดสอบชุดตรวจสำเร็จรูปแบบอิมมูโนโครมาโตกราฟิ เพื่อตรวจหาเชื้อซัลโมเนลลาในตัวอย่างอาหารที่พัฒนาไว้แล้วจากผลงานวิจัยที่ได้รับทุน สวก. ประจำปี พ.ศ. 2559 โดยทำในห้องปฏิบัติการแบบห้องปฏิบัติการเดี่ยว (Single Lab.) ตามข้อกำหนดของ Association of Official Agricultural Chemists (AOAC) ส่วนการทดสอบชุดตรวจนี้ในแบบ ห้องปฏิบัติการอิสระ (Independent lab.) ทำโดย รศ. ดร. ประเวทย์ ตุ้ยเต็มวงศ์ ที่ได้รับทุนจาก สวก. เช่นกัน โครงการวิจัยนี้มีระยะเวลาดำเนินการที่เสนอไว้ 3 ปี โดยในปีแรก (2 มิถุนายน พ.ศ. 2560 ถึง 1 มิถุนายน พ.ศ. 2561) และปีที่สอง (5 ตุลาคม พ.ศ. 2562 ถึง 4 ตุลาคม พ.ศ. 2563 ได้รับอนุมัติให้ขยาย เวลาถึง 4 มกราคม พ.ศ. 2564) คณะผู้วิจัยได้ดำเนินกิจกรรมที่เสนอไว้ครบถ้วนทุกกิจกรรมแล้ว ดังนี้ ได้เตรียมโฮโมจีเนทของเชื้อลิสทีเรีย สปีซีส์ และ วิบริโอ คอเลอเร ซีโรกรุ๊ปโอหนึ่ง และซีโรกรุ๊ป อื่น และแบคทีเรียอื่น ๆ เพื่อใช้เป็นแอนติเจน เสร็จเรียบร้อยแล้ว ได้เพาะเลี้ยงเซลล์โฮบริโดมาที่ผลิต แอนติบอดีชนิดโมโนโคลนาลที่จับเฉพาะกับเชื้อวิบริโอ คอเลอเร ชีโรกรุ๊บโอหนึ่งแล้ว และทำให้แอนติบอดี บริสุทธิ์ จากนั้นตรวจหาไตเตอร์ของแอนติบอดีที่เตรียมได้ พบว่ามี 40,000 หน่วยอีไลซาต่อหนึ่งมิลลิลิตร ในปริมาตรรวม 1.5 มิลลิลิตร (รวมทั้งสิ้น 60,000 หน่วยอีไลซา) ซึ่งเพียงพอสำหรับการวิจัยต่อไป นอกจากนี้ยังได้ตรวจยืนยันความเฉพาะของแอนติบอดีดังกล่าว พบว่าแอนติบอดีชนิดโมโมโคลนาลที่ เตรียมได้จับเฉพาะกับเชื้อวิบริโอ คอเลอเร ชิโรกรุ๊ปโอหนึ่ง เท่านั้น และไม่จับกับเชื้อวิบริโอ คอเลอเร ชิโร กรุ๊ปอื่น และแบคทีเรียอื่น ๆ คณะผู้วิจัยได้ออกแบบและสังเคราะห์เพปไทด์ของโปรตีนอินเวชันแอสโซซิ เอตเทต [invasion-associated protein (lap)] ที่มีเฉพาะในเชื้อลิสทีเรีย สปีซีส์ สำหรับใช้เป็นแอนติเจน ในการผลิตโครงร่างโปรตีน (protein scaffolds/affinomes/affibodies ต่อไปขอเรียกว่า affinomes) ชนิดโมโนโคลนาลที่จับกับเชื้อลิสทีเรียได้ทุกสปีซีส์แล้ว คณะผู้วิจัยได้เตรียมโปรตีนรีคอมบิแนนท์อินเทอนา สินเอแบบบริสุทธิ์ [purifed recombinant internalin A (InIA)] ซึ่งเป็นโปรตีนเฉพาะของเชื้อลิส โม โนไซโตจีเนสแล้ว และได้ผลิต affinomes ชนิดโมโนโคลนาลที่จับกับ lap และ InIA เรียบร้อยแล้ว ซึ่ง affinomes เหล่านี้จะใช้เป็นส่วนประกอบของชุดตรวจหาเชื้อลิสทีเรีย สปีซีส์ และลิสทีเรีย โมโซโตจีเนส คณะผู้วิจัยได้เตรียมแอนติบอดีชนิดโพลีโคลนาลต่อเชื้อลิสทีเรีย สปีซีส์ และวิบริโอ คอเลอเร ซีโรกรุ๊ปโอ หนึ่ง ในกระต่าย และสกัดเอาเฉพาะโพลีโคลนาลไอจีจืออกมาจากอิมมูนซีรัมของกระต่ายเสร็จเรียบร้อย แล้ว เพื่อใช้เป็นส่วนประกอบของชุดตรวจแบบอิ่มมูโนโครมาโท กราฟิสำหรับตรวจหาแอนติเจนของเชื้อลิส ทีเรีย สปีซีส์ ลิสทีเรีย โมโนไขโตจีเนส และวิบริโอ คอเลอเร ชีโรกรุ๊ปโอหนึ่ง คณะผู้วิจัยได้เก็บตัวอย่างอาหาร จากตลาดในกรุงเทพและปริมณฑล ทั้งจากตลาดสดและซูเปอร์มาร์เก็ต ครบตามที่ AOAC กำหนด แล้ว คือเนื้อหมู-เนื้อวัว (60 ตัวอย่าง) เนื้อไก่ (64 ตัวอย่าง) อาหารทะเล (93 ตัวอย่าง) และผัก-ผลไม้ จำนวน (60 ตัวอย่าง) และได้ตรวจหาเชื้อเป้าหมายทั้งสามชนิดว่ามีหรือไม่มีในตัวอย่างอาหารด้วยการ เพาะ แยก และพิสูจน์เอกลักษณ์ของเชื้อ และได้พัฒนาวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่แบบเรียลไทม์เพื่อเพิ่มปริมาณยืน เฉพาะของเชื้อลิสทีเรีย สปีซีส์ (igp) ลิสทีเรีย โมโนไซโตจีเนส (h(y) และวิบริโอ คอเลอเร (ctA) เรียบร้อยแล้ว รวมทั้งได้พัฒนาชุดตรวจแบบอิมมูโนโครมาโทกราฟีสำหรับตรวจหาเชื้อ ลิสทีเรีย สปีชีส์ ลิส ทีเรีย โมโนไซโตจีเนส และวิบริโอ คอเลอเร ชิโรกรับโอหนึ่ง แล้ว พบว่าในตัวอย่างอาหารที่สุ่มเก็บมา ทั้งหมด ไม่มีเชื้อลิสทีเรียหรือเชื้ออหิวาต์ปนเปื้อน นอกจากนี้ยังมีผลการตรวจหาเชื้อชัลโมเนลลาใน ตัวอย่างอาหารด้วยชุดตรวจแบบอิมมูโนโครมาโทกราฟี ใน single lab. ซึ่งได้ผลตรงกับการตรวจด้วยวิธี เพาะ แยก และพิสูจน์เอกลักษณ์ของเชื้อด้วยวิธีมาตรฐานและปฏิกิริยาลูกโซ่แบบเรียลไทม์ และได้ผลิตชุดชุดชุดชุด ตรวจดังกล่าว จำนวน 500 ชุดให้แก่ รศ. ดร. ประเวศ ตุ้ยเต็มวงศ์ เพื่อประเมินใน independent lab. (กรมปศุสัตว์) แล้ว งานวิจัยสำเร็จตามแผนที่วางไว้ทุกกิจกรรม
บทคัดย่อ (EN): This study aimed to invent ready- to-use immunochromatographic test kits for detection of pathogenic bacteria, namely Listeria spp. , L. monocytogenes and Vibrio cholerae serogroup O1 that contaminated in food samples. The test kits should be easy to use, cost-effective, and accurate with rapid turn-around time when compared to the conventional microbiological methods and DNA detection by real-time polymerase chain reaction ( real- time PCR) . We also validated the previously established Salmonella immunochromatographic test kit (ICT) (from the financial support of ARDA in the fiscal year 2559 B.E.) in a single lab as well as in an independent lab (performed by Associated Prof. Dr. Prawate Tuitemwong who also received research support from ARDA). The duration of this research project is 3 years. The first year duration was June 2nd, 2560 B.E. to June 1st , 2561B.E. and the second year duration was October 5th , 2562 B.E. to October 4th , 2563 B.E., with the permission to extend to January 4th, 2564 B.E. We have completed all of the proposed research activities of the first and the second years as follows: Whole cell homogenates of Listeria spp. and V. cholerae, as well as other bacteria have been prepared for use as homologous and heterologous antigens. We have cultured a hybridoma secreting mouse monoclonal antibody (MAb) to V. cholerae serogroup O1; then, extracted out the monoclonal antibodies from the cell spent medium and titrated the antibody titer by indirect ELISA. A total of 60,000 ELISA units of the MAb were recovered from 500 ml of the hybridoma spent medium (1.5 ml of 40,000 ELISA units/ml), which was adequate for subsequent use. Antigenic specificity of the so-prepared MAb was verified and found to bind only with homogenate of V. cholerae serogroup O1 and did not react to homogenates of V. cholerae of other serogroups and other heterologous bacteria. We have designed and synthesized peptide of invasion-associated protein ( Iap) that is specific to Listeria spp. for use as antigen in the production of monoclonal protein scaffolds (colloquailly affinomes) that bind to all Listeria spp. We have produced recombinant internalin A protein ( InlA) which is the protein unique to the L. monocytogenes, and produced affinomes that bound to the Iap peptide and InlA. These affinomes were used further in the invention of immunochromatographic test kits for detecting Listeria spp. and Listeria monocytogenes, respectively. We have also prepared rabbit polyclonal antibodies (PAbs) to Listeria spp. and V. cholerae serogroup O1 and isolated IgGs from the rabbit immune sera for use in assembling the immunochromatographic test kits for detection of Listeria spp. , Listeria monocytogenes and V. cholerae serogroup O1. We have collected food samples from fresh markets and supermarkets in Bangkok and periphery: pork- beef (60 samples), chicken meat (64 samples), seafood (93 samples) and vegetables-fruits (60 samples) and peformed culture method for detection of Listeria spp. , L. monocytogenes and V. cholerae serogroup O1 in the samples. Real-time PCR for detection of specific genes of Listeria spp. (iap), L. monocytogenes (hly) and V. cholerae (ctx) were develop and used for detecting the respective bacterial DNA in the collected food samples. It was found that none of the randomly collected samples contained Listeria spp. or V. cholerae. Besides, we have validated the ICT test kits for Salmonella detection in food samples (single lab validation), which the test results were in complete concordance with of the results of the conventional culture method and the real-time PCR. We also produced 500 tests of the Salmonella ICT kits for Assoc. Prof. Dr. Prawate Tuitemwong for validation in an independent Lab. at the Department of Livestock Development. All of the planned research activities have been completed.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เผยแพร่โดย: สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)
คำสำคัญ: อิมมูโนโครมาโทกราฟี
คำสำคัญ (EN): Immunochromatography (ICT)
เจ้าของลิขสิทธิ์: ภาควิชาปรสิตวิทยา คณะแพทยศาสตร์ศิริราชพยาบาล มหาวิทยาลัยมหิดล
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

ศาสตราจารย์ ดร. สัตวแพทย์หญิง วันเพ็ญ ชัยคำภา. "การวิจัยต่อยอดด้านความปลอดภัยของอาหารจากเชื้อแบคทีเรียก่อโรคอาหารเป็นพิษ: จากตลาดสู่โต๊ะอาหาร2Translational Research on Food Safety from Pathogenic Bacteria Causing Food Poisoning: from market to table". สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน) . 2562

ศาสตราจารย์ ดร. สัตวแพทย์หญิง วันเพ็ญ ชัยคำภา. "การวิจัยต่อยอดด้านความปลอดภัยของอาหารจากเชื้อแบคทีเรียก่อโรคอาหารเป็นพิษ: จากตลาดสู่โต๊ะอาหาร2Translational Research on Food Safety from Pathogenic Bacteria Causing Food Poisoning: from market to table". สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน) . 2562. Print.



TARR Wordcloud:
การวิจัยต่อยอดด้านความปลอดภัยของอาหารจากเชื้อแบคทีเรียก่อโรคอาหารเป็นพิษ: จากตลาดสู่โต๊ะอาหาร2
ศาสตราจารย์ ดร. สัตวแพทย์หญิง วันเพ็ญ ชัยคำภา
สำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)
2562
การวิจัยต่อยอดด้านความปลอดภัยของอาหารจากเชื้อแบคทีเรียก่อโรคอาหารเป็นพิษ: จากตลาดสู่โต๊ะอาหาร การวิจัยต่อยอดด้านความปลอดภัยของอาหารจากเชื้อแบคทีเรียก่อโรคอาหารเป็นพิษ: จากตลาดสู่โต๊ะอาหาร (ปีที่ 3) โครงการพัฒนาระบบอาหารของประเทศไทย: การวางภาพกรอบระบบอาหารและการวิเคราะห์และพัฒนาระบบอาหารส่วน “การค้า การกระจายและการบริการอาหาร” การพัฒนาระบบอาหาร (Food system) ของประเทศไทย : ระบบการผลิตสินค้าเกษตรและการแปรรูปอาหาร การต่อยอดผลงานวิจัยเรื่องกลไกการก่อโรคของเชื้อ Enterocytozoon hepatopenaei (EHP) เพื่อนำไปใช้ในการควบคุมการระบาดของเชื้อในกุ้ง การใช้เศษเหลือจากการผลิตลำไยเพื่อผลิตเป็นอาหารเสริมทดแทนการขาดแคลนอาหารในธรรมชาติสำหรับเลี้ยงผึ้งพันธุ์ (Apis mellifera L.) การวิจัยและพัฒนาอาหารสำหรับแม่พันธุ์กุ้งขาวแวนนาไม การพัฒนาดีเอ็นเอไบโอเซนเซอร์เพื่อการตรวจหาเชื้อลิสทีเรียในผลิตภัณฑ์อาหาร 3 in 1 ดีเอ็นเอเซนเซอร์เพื่อการตรวจหาเชื้อซัลโมเนลลา ลิสทีเรีย และ แคมไพโลแบคเตอร์ในผลิตภัณฑ์อาหาร โครงการวิจัยเชิงนโยบายเพื่อการพัฒนาระบบอาหารของประเทศไทย
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair