สืบค้นงานวิจัย
การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของลูซีนดีไฮโดรจิเนส จาก Alcaligenes faecalis
Supatjaree Ruengsomwong - จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
ชื่อเรื่อง: การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของลูซีนดีไฮโดรจิเนส จาก Alcaligenes faecalis
ชื่อเรื่อง (EN): Purification and characterization of leucine dehydrogenase from Alcaligenes faecalis
ผู้แต่ง / หัวหน้าโครงการ (EN): Supatjaree Ruengsomwong
บทคัดย่อ (EN): Leucine dehydrogenase producing bacteria were screened from soil sample and the isolate which produced the highest enzyme activity was identified as Alcaligenes faecalis. Optimum condition for L-Leucine dehydrogenase production was cultivation in 1% peptone medium pH 7.2 at 37ํC for 24 hours. After the enzyme was purified to homogeneity by DEAE-Toyopearl, Butyl-Toyopearl and Hitrap Q chromatography columns, % recovery and purification fold were 16.4 and 66.4, respectively. The enzyme had the molecular weight of 536,000 daltons and consisted of 10 identical subunits of 52,000 daltons. Substrats specificty of the enzyme on L-valine and L-isoleucine were 1.33 and 1.13 fold of that on L-leucine in oxidative deamination. In reductive amination, substrate specificity on [alpha]-ketoisovalerate, [alpha]-ketovalerate and [alpha]-keto-[beta]-methylvalerate were 2.0, 1.35 and 1.23 fold of that on [alpha]-ketoisocaprorate. The coenzyme specificity on 3-acetylepyridine adinine dinucleotide was about 4.78 fold higher than NAD[supercript +]. The optimum pH for oxidative deamination and reductive amination were 10.8 and 8.8 where as optimum temperatures were 45 ํC, and 55 ํC respectively. The enzyme retained its full activity upon the incubation at 45 ํC for 8 hours. The enzyme activity was completely inhibited by HgCI [subscript2] at final concentration of 1 mM. Chemical modification of the enzyme at tryptophan, methionine and lysine residues by incubation with 10 mM of group-specific reagents: N-bromosuccinimide, chloramine T and 2,4,6- trinitrobenzenesulfonic acid, respectively, led to completely loss of enzyme activity. The apparent K[subscript m] values for L-leucine, L-isoleuine, L-valine, NAD[superscript +], NADH, [alpha]-ketoisocaproate and ammonia were 4.2, 4.3, 14.0, 0.44, 0.02, 3.33 and 100 mM, respectively. The steady state kinetic studies including product inhibition on the enzyme reaction indicated that the oxidative deamination proceeds through a sequential ordered binary-ternary-ternary mechanism in which NAD[superscript +] binds first to the enzyme followed by L-leucine and products are released in the order of ammonia, [alpha]-ketoisocaproate and NADH, respectively. N-terminal sequence was M E I F N Y M E Q A D Y E Q L V I X Q D and internal amino acid sequence of the enzyme were, PGPXGPAGSKG (or V) EPGPAGPXG, T (or L, Y, V) LPGLAGTXG and RDNIPSYVAADRLAEERIRVA.
บทคัดย่อ: ไม่พบข้อมูลจากหน่วยงานต้นทาง
ภาษา (EN): th
เอกสารแนบ: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/7589
เผยแพร่โดย: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
คำสำคัญ (EN): Alcaligenes
เจ้าของลิขสิทธิ์: Chulalongkorn University
รายละเอียด: Leucine dehydrogenase producing bacteria were screened from soil sample and the isolate which produced the highest enzyme activity was identified as Alcaligenes faecalis. Optimum condition for L-Leucine dehydrogenase production was cultivation in 1% peptone medium pH 7.2 at 37ํC for 24 hours. After the enzyme was purified to homogeneity by DEAE-Toyopearl, Butyl-Toyopearl and Hitrap Q chromatography columns, % recovery and purification fold were 16.4 and 66.4, respectively. The enzyme had the molecular weight of 536,000 daltons and consisted of 10 identical subunits of 52,000 daltons. Substrats specificty of the enzyme on L-valine and L-isoleucine were 1.33 and 1.13 fold of that on L-leucine in oxidative deamination. In reductive amination, substrate specificity on [alpha]-ketoisovalerate, [alpha]-ketovalerate and [alpha]-keto-[beta]-methylvalerate were 2.0, 1.35 and 1.23 fold of that on [alpha]-ketoisocaprorate. The coenzyme specificity on 3-acetylepyridine adinine dinucleotide was about 4.78 fold higher than NAD[supercript +]. The optimum pH for oxidative deamination and reductive amination were 10.8 and 8.8 where as optimum temperatures were 45 ํC, and 55 ํC respectively. The enzyme retained its full activity upon the incubation at 45 ํC for 8 hours. The enzyme activity was completely inhibited by HgCI [subscript2] at final concentration of 1 mM. Chemical modification of the enzyme at tryptophan, methionine and lysine residues by incubation with 10 mM of group-specific reagents: N-bromosuccinimide, chloramine T and 2,4,6- trinitrobenzenesulfonic acid, respectively, led to completely loss of enzyme activity. The apparent K[subscript m] values for L-leucine, L-isoleuine, L-valine, NAD[superscript +], NADH, [alpha]-ketoisocaproate and ammonia were 4.2, 4.3, 14.0, 0.44, 0.02, 3.33 and 100 mM, respectively. The steady state kinetic studies including product inhibition on the enzyme reaction indicated that the oxidative deamination proceeds through a sequential ordered binary-ternary-ternary mechanism in which NAD[superscript +] binds first to the enzyme followed by L-leucine and products are released in the order of ammonia, [alpha]-ketoisocaproate and NADH, respectively. N-terminal sequence was M E I F N Y M E Q A D Y E Q L V I X Q D and internal amino acid sequence of the enzyme were, PGPXGPAGSKG (or V) EPGPAGPXG, T (or L, Y, V) LPGLAGTXG and RDNIPSYVAADRLAEERIRVA.
หากไม่พบเอกสารฉบับเต็ม (Full Text) โปรดติดต่อหน่วยงานเจ้าของข้อมูล

การอ้างอิง

Supatjaree Ruengsomwong. "การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของลูซีนดีไฮโดรจิเนส จาก Alcaligenes faecalisPurification and characterization of leucine dehydrogenase from Alcaligenes faecalis". จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. 2548

Supatjaree Ruengsomwong. "การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของลูซีนดีไฮโดรจิเนส จาก Alcaligenes faecalisPurification and characterization of leucine dehydrogenase from Alcaligenes faecalis". จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. 2548. Print.



TARR Wordcloud:
การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของลูซีนดีไฮโดรจิเนส จาก Alcaligenes faecalis
Supatjaree Ruengsomwong
จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
2548
การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของเลคตินจากเมล็ดลูกเนียง Archidendron jiringa Nielsen. การผลิตและการทำให้ starch-binding amylase จาก alkaliphilic Bacillus sp. SS-8 บริสุทธิ์และศึกษาสมบัติต่าง ๆ ของเอนไซม์บริสุทธิ์ การโคลนและการแสดงออกของยีนฟีนิลอะลานีนดีไฮโดรจิเนสจาก Acinetobacter Lwoffii และความเป็นไปได้ในการผลิตกรดอะมิโน การปรับปรุงความเสถียรต่อความร้อนของอะลานีนดีไฮโดรจิเนสจาก Aeromanas hydrophila โดยวิธี site directed mutagenesis การทำให้อัลคาไลน์โปรตีเอสที่ผลิตจาก alkalotolerant Bacillus sp. B12 บริสุทธิ์และศึกษาสมบัติต่าง ๆ การทำให้เอนไซม์ไคติเนสบริสุทธิ์และการศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์จากเชื้อ escherichia coli ที่ การแสดงออกและลักษณะสมบัติของตัวยับยั้งเซรีนโปรติเนสจากกุ้งกุลาดำ Penaeus monodon การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน การหาสูตรอาหารที่เหมาะสมต่อการผลิตและศึกษาสมบัติเอนไซม์ไซลาเนสบริสุทธิ์จากเชื้อราที่เจริญในอุณหภูมิสูง Thermoascus aurantia การวิเคราะห์การกลายพันธุ์และแฮปโปลทัยป์ของยีนสร้างกลูโคส - 6 -ฟอสเฟต ดีไฮโดรจีเนสในประชากรเอเซียตะวันออกเฉียงใต้
คัดลอก URL
กระทู้ของฉัน
ผลการสืบค้นทั้งหมด โพสต์     เรียงลำดับจาก
พัฒนาระบบโดยศูนย์ความรู้เฉพาะด้านวิศวกรรมความรู้และวิศวกรรมภาษาDeveloped by Center of Excellence for Unified Knowledge and Language Engineering
สนับสนุนโดยสำนักงานพัฒนาการวิจัยการเกษตร (องค์การมหาชน)Supported by the Agricultural Research Development Agency (Public Organization)
แบบสำรวจความพึงพอใจQuestionair